Netrins与神经轴突的生长发育

神经细胞在胚胎发育过程中形成相互联系 ,须依靠神经轴突正确投射到靶细胞的能力。Netrins是一族高度保守的神经导向分子家族成员 ,在轴突的延长和诱向中发挥了重要作用。轴突对导向分子的反应各不相同 ,即使是同一个生长锥也会在投射路程中改变对相同导向分子的反应。内在和外在的影响因素同时参与了处于发育中的轴突生长锥对Netrins的反应性的变化。本文综述了Netrins的功能及其所涉及的精细的调节机制     

诱导多能干细胞在视网膜疾病研究中的应用

诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是成体细胞通过重编程而获得的一类具有胚胎干细胞相似特性和功能的细胞.近年来,iPSCs在再生医学和干细胞研究领域备受关注,尤其是患者特异源性iPSCs,来源方便、无免疫排斥和伦理学问题,同时还可以保留特定个体基因型,为再生医学以及细胞移植疗法提供了新的细胞来源.目前,iPSCs在视网膜疾病研究领域取得了长足的进步.本文主要对iPSCs向视网膜色素上皮细胞、感光细胞和神经节细胞的诱导分化及细胞移植研究、安全性评价等方面进行综述,探讨iPSCs在视网膜疾病研究中的应用和前景.     

有色光对视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β的影响

目的研究不同色光对RPE细胞分泌生长因子的影响,从细胞生物学和分子生物学水平探讨RPE细胞在有色光信号传导中的作用.方法将第二代RPE细胞以每孔5×104的密度接种于4个6孔板,培养3 d后,将培养液换为含1%胎牛血清的F12培养液,置于各种色光下培养,分别于4、8、12、24、48h后收集培养液,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA),测定TCF-β的量;将置于红色、黄色和蓝色光下照射24h后的细胞取出,采用Trizol一步法提取RPE细胞总RNA,通过RT-PCR检测不同色光照射后RPE细胞TGF-β的mRNA表达水平.结果 ELISA结果显示人胚RPE细胞可分泌TGF-β,在受到不同波长的光照射后,不同时段TGF-β的分泌量也不一样,数据采用两因素方差分析,差异有统计学意义;RT-PCR结果显示不同色光照射24h后RPE细胞TGF-β的mRNA表达水平不同.结论有色光线可能引起RPE细胞蛋白质合成功能受阻,进而对眼球的生长发育产生作用.     

大鼠Müller细胞的体外培养及免疫组织化学鉴定

Müller细胞是视网膜中一种非常重要的胶质细胞.成熟的M黮ler细胞发出很多分支包围、分隔神经元的胞体和突起[1].研究表明M黮ler细胞在外伤或光损伤后可表达多种生长因子,这些生长因子除对神经元具有保护作用外[2],对细胞外环境也具有调控作用[3].因此, M黮ler细胞在视网膜中的作用正日益受到人们的重视.而M黮ler细胞的培养方法主要有组织块贴壁培养法和酶解法.本实验应用酶解法成功分离了大鼠视网膜的M黮ler细胞,并进行体外培养、免疫组化鉴定,为进一步研究胶质细胞在中枢神经系统的作用提供实验基础.     

影响大鼠胚胎视网膜祖细胞体外增殖的两个因素

目的探讨在体外培养条件下影响大鼠胚胎视网膜祖细胞增殖的因素。方法取第18天大鼠胚胎,用无血清培养技术扩增视网膜祖细胞,以形成悬浮生长的细胞球,经免疫细胞化学、扫描电镜与透射电镜技术鉴定细胞球中已分化的细胞,并观察不同细胞接种密度对祖细胞增殖率的影响。结果①细胞球中出现分化细胞形态和NF及Nestin阳性细胞;②提高接种细胞密度,祖细胞增殖率增加。结论①此期的祖细胞分裂产生分化细胞,导致祖细胞增殖能力差;②接种细胞密度影响祖细胞增殖率。     

提前光照对氧诱导视网膜病小鼠模型的视网膜血管发育的影响

目的探讨提前光照对氧诱导视网膜病小鼠模型的视网膜新生血管发育的影响。方法48只健康C57BL／6J小鼠．随机取12只作为正常对照组，其余随机分为高氧模型组、提前光照组和高氧联合提前光照组。每组各12只小鼠。高氧模型组：将出生后第7天（P7）的小鼠置于舍75％高浓度氧的氧箱内，5d后取出，再置于正常空气环境中饲养；提前光照组：取出生后第4天（P4）未开睑新生小鼠。手术提前开启右眼睑裂。让右眼提早接受环境光及视觉刺激，左眼为自身对照：高氧联合提前光照组：取P4小鼠提前开启右眼睑裂．在P7时放入高浓度氧箱内饲养，5d后取出。各组均于小鼠生后第27天（P27）取材，应用HE染色、视网膜铺片ADP酶染色及视网膜新生血管计数等方法观察小鼠视网膜新生血管的生长情况。结果在P27时，正常对照组和单纯提前光照组小鼠视网膜均无显著新生血管生长；高氧模型组内皮细胞计数较正常对照组及单纯提前光照组明显增加，有显著统计学意义（P〈0．01），提示该组存在显著视网膜新生血管生长：在高氧联合提前光照组，双眼新生血管内皮细胞计数均较正常对照组明显增加（P〈0．05），但该组的提前光照眼新生血管内皮细胞计数较单纯高氧作用眼有所减少（P〈0．01）。结论对于小鼠，高氧可诱导视网膜新生血管的生成，提前光照可削弱高氧所致的小鼠视网膜新生血管的增殖。     

维生素B12的正确用法及分析

药师通过对临床不合理使用维生素B12的病例分析,阐述了正确使用维生素B12注射液的用法和用量及注意事项.药师建议:临床合理用药,避免医疗纠纷.     

基于对称区域生长和边缘梯度的视神经纤维的分割

在视神经横切面图像中,将每个神经纤维的内外边界进行精确分割是视神经形态分析的重要环节,提出一种基于对称区域生长和髓鞘边缘梯度的有效分割算法.该算法分两步进行,首先根据交互方式下选取的种子点,由对称区域生长算法实现轴突分割,然后在轴突轮廓模型基础上,髓鞘外轮廓在髓鞘平均边缘梯度引导下进行演化,实现自动分割.与K-均值聚类,局部阈值和水平集等其他算法的实验结果相对照显示,该算法分割获得的轴突和髓鞘轮廓与实际轮廓相吻合,其分割结果可以作为后续神经纤维形态分析的基础.     

邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯对人神经母细胞瘤细胞增殖的影响

目的 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基已基）酯（di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP）对人神经母细胞瘤细胞增殖的影响及机制。方法 体外培养人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,分为5组：不加干预药物（对照组）、加17β-雌二醇（17β-estradiol,E₂组）、加DEHP（DEHP组）、同时加E₂和磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K）抑制剂LY294002（E₂ + LY294002组）、同时加DEHP和LY294002（DEHP + LY294002组）。检测各组细胞0、2、5 d时光吸收度值（absorbance value,AV）,5 d时DNA增殖指数（proliferation index,PI）,凋亡指数（apoptotic index,AI）、Capase-3蛋白、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（protein-serine-threonine kinase,Akt）以及磷酸化Akt（phosphor-AktSer473,p-AktSer473）蛋白表达。结果 E₂和DEHP组2、5 d时AV值及5 d时PI值均较对照组明显增高（P<0.01）,而E₂ + LY294002和DEHP + LY294002组则较E₂和DEHP组明显降低（P<0.01）,各组AI及Caspase-3蛋白表达无明显变化。5 d时p-AktSer473蛋白表达,E₂和DEHP组较对照组增加（P<0.01）,而E₂ + LY294002和DEHP + LY294002组则较E₂和DEHP组明显减少（P<0.01）,各组Akt蛋白表达无明显变化。结论 DEHP可促进人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞体外增殖,作用与雌激素相仿。该促增殖效应可能通过PI3K/Akt信号通路起作用,与细胞凋亡途径无关。     

以腺病毒为载体的基因治疗药物毒性及其机制的研究进展

基因治疗药物已成为当今生物技术药物研发的重点,而腺病毒是目前临床基因治疗较常选用的载体系统。它们在发挥治疗作用的同时,亦会引起机体出现毒性反应。从腺病毒载体及相应药物引发的毒性反应,固有免疫及获得性免疫系统活化等方面对它们的毒性及其机制进行总结。