人FasL胞外区cDNA的克隆及表达

应用RT PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增FasL胞外区cDNA ,克隆入PCR2 1载体 ,测序验证后在大肠杆菌DH5α中表达 ,经亲和层析柱纯化 ,Westernblot鉴定所得表达产物为可溶性人FasL胞外区蛋白。     

中国汉族人HLA-DQAl~*0601基因转录启动子区显示新的核苷酸序列

本文测定了中国汉族人HLA纯合细胞SMY-43A的DQA1~*0601基因启动子区(QAP)核苷酸序列,发现顺式作用元件W box中-215和-216位核苷酸组成与已报道的白种人DQA1~*0601的QAP序列不同,由于SMY-43A的Ⅱ类基因单倍型组成为中国人特有,提示相应的QAP多态性可能具有人种差异.     

γδ_+T细胞的功能及其在自身免疫病中的意义

r~(δ+T)细胞能产生一些细胞因子,协助B细胞分化,并且参与细胞免疫应答。结核杆菌和麻疯杆菌感染的病灶局部和外周血中,该细胞亚群的比例较正常为高,其中大部分是分枝杆菌热休克蛋白特异的。此外,还发现许多自身免疫病中,该细胞亚群增多也与分枝杆菌热休克蛋白的交叉反应有关。这些都提示r~(δ+T)细胞在免疫防御和维持自身免疫耐受中的作用。r~(δ+T)细胞在胸腺哺育过程中不产生克隆丢失,这与αβ+T细胞有所不同。在外周,r,δ基因可发生再次重排。这群细胞的MHC约束性问题尚未定论,但它们很可能识别类MHC分子和它们提呈的抗原。     

混合皮肤移植中自体角朊细胞转染B7-1后诱导抑制功能的改变

目的 分析混合皮肤移植中自体角朊细胞转染B7-1基因后功能的改变，并探讨传统共刺激分子和MHC Ⅱ类分子等在自体角朊细胞诱导的局部免疫耐受中的作用。方法 利用建立的MELC体外模拟系统，对自体角朊细胞进行B7-1基因的转染，观察转染前后自体角朊细胞诱导抑制能力的变化，同时通过抗CTLA-4单抗及HLA Ⅱ类分子的封闭实验，观察这些分子在自体皮岛抑制效应中的作用。结果 自体角朊细胞转染B7-1基因后，诱导局部免疫抑制的能力消失，如果加入抗B7-1单抗阻断B7-1的作用后，其诱导抑制的能力又恢复；抗CTLA-4单抗不能阻断自体角朊细胞在实验体系中的抑制作用；用单抗所作的封闭实验结果表明。抗HLA-DR单抗封闭组对自体角朊细胞对MELR抑制诱导的影响最小（P〉0．05），抗DQ单抗则可以对MELR的抑制得到最大幅度的回复，而抗DP单抗也可以使体系中cpm值有一定的回升。结论 混合皮肤移植中，自体角朊细胞之所以可以诱导局部免疫耐受，是通过B7-1以外的其他共刺激信号激活Th2亚群、进而遏制Th1亚群来诱发抑制的，而且这种抑制与CTLA-4的负向调节无关。并具MHC限制性。     

雌激素受体与核因子κB相互作用研究

转录因子雌激素受体（ER）与核因子κB（NF-κB）的相互作用在多种组织细胞类型中均有研究。ER可在NF-κB信号转导通路的多个环节对NF-κB的转录活性产生影响：影响胞质内的NF-κB抑制蛋白及其激酶复合物：影响NF-κB的核转位；影响NF-κB的DNA结合活性；通过与共调节蛋白相互作用影响NF-κB的活性。二者的相互作用在多种疾病如乳腺癌、绝经及性别相关的免疫性疾病、绝经后骨质疏松等的发生发展中有重要意义。     

B7-H1分子在混合皮肤移植中自体角朊细胞诱导的抑制作用

目的探讨B7-H1在混合皮肤移植中自体角朊细胞诱导的局部免疫耐受中的作用。方法在加入与不加入自体角朊细胞的实验系统中，利用混合表皮淋巴细胞培养（MELC）体外模拟系统，检测角朊细胞表达B7-H1的情况，并观察抗B7-H1和PD-1单抗对自体角朊细胞诱导的免疫抑制的影响情况。结果在引入自体角朊细胞的MELC体系中，刚分离的角朊细胞并不表达B7-H1，但在4h开始有微弱的表达，而〉8h就有较强的表达；而未引入自体角阮细胞的MELC体系中，则始终未检测到B7-H1的表达。而且自体角朊细胞对自体淋巴细胞对异体表皮细胞的同种异体增殖反应的抑制作用能被抗B7-H1和PD-1的单抗阻断。结论混合皮肤移植中，自体角朊细胞可能是通过B7-H1提供共刺激信号，激活Th2亚群，遏止Th1亚群，从而抑制后者介导的细胞免疫。     

肿瘤相关抗原基因OVA66特异的RNA干扰对肿瘤细胞生物学特性的影响

构建OVA66基因的特异小干扰RNA表达载体,转染HeLa细胞,分析对该基因表达和肿瘤生物学特性的影响。以RT-PCR、Westernblot方法检测OVA66基因在多种肿瘤细胞系的表达谱。利用计算机辅助设计和合成针对OVA66的特异小干扰RNA的DNA片段,定向克隆于特定的干扰载体(pSUPER)。利用脂质体法将重组载体转染于OVA66高表达细胞系HeLa,筛选得到shRNA-OVA66稳定表达细胞。采用Real-timePCR检测目的基因的表达;FACS、Westernblot方法分析目的蛋白的表达。MTT、3H-TdR掺入等方法检测干扰OVA66基因表达后对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。双酶切鉴定得到针对OVA66基因特异的shRNA表达载体(pSUPER-shRNA-OVA66),并经序列分析证实。经检测pSUPER-shRNA-OVA66稳定表达的HeLa细胞(shRNA-OVA66)中目的基因mRNA水平降低;OVA66蛋白表达受到抑制,表明设计的靶片段对目的基因有显著的抑制效果。并显示shRNA-OVA66细胞DNA合成下降;细胞周期分析表明阻断OVA66基因表达可抑制shRNA-OVA66细胞增殖能力,并引发细胞凋亡。OVA66特异的shRNA表达载体构建成功,阻断OVA66基因表达可抑制细胞增殖,促使细胞凋亡,为OVA66蛋白肿瘤生物学功能与肿瘤发生、发展的研究奠定基础。     

天花粉蛋白通过激活CD8 Tc2亚群诱导人体免疫抑制

为了探讨天花粉蛋白(Tk)诱导免疫抑制的机制,采用抗原非特异性T淋巴母细胞增殖系统,筛选了37个Tk致敏的抑制性T细胞系。分析表明,健康人体内Tk相关抑制性T细胞的频率为5.0×10-7～10.8×10-7,该细胞系属CD8+TCRαβ+,细胞因子表达格局呈现向IL-4和IL-10明显偏移和IFN-γ分泌明显下降的格局。结合我们已有关于CD8+T细胞介导Tk相关应答而不显示细胞毒性的工作,可从表型和功能分析上确认,Tk针对体外人体淋巴细胞增值的免疫抑制,由CD8Tc2细胞介导。     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞与LSCC发病的相关研究

为研究调节性T细胞在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)、发展中的变化及其参与疾病进展的作用机制,收集2010～2011年上海市五官科医院收治的50例LSCC患者的肿瘤组织和外周血,应用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及趋化因子受体CCR6的表达变化,Real-time PCR法检测转录因子Foxp3以及细胞因子mRNA的表达量。结果发现:LSCC患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg的百分比较正常人显著增加,并与临床分期相关;CD4+CD25+CCR6+Treg Foxp3的表达,以及肿瘤组织Foxp3mRNA的表达皆明显高于对照组,且与临床分期、淋巴结转移相关。同时发现,LSCC患者外周血中TGF-β和IL-10mRNA的检出水平分别高于对照组,但IFN-γ、IL-2、IL-12mRNA的水平低于对照组。提示此类Foxp3+Treg属于一类诱导性T抑制细胞(Foxp3+iTreg),可通过产生IL-10和TGF-β抑制LSCC患者的细胞免疫功能。Foxp3的检测可能对判断LSCC的预后有一定价值。