构建MHCⅡ类分子反式激活因子基因突变体抑制转染细胞HLAⅡ类分子的表达

目的：探讨MHCⅡ类分子反式激活因子（CⅡ\TA）突变体抑制HLAⅡ类分子表达的可能性。方法：构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2、含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3的含起始密码子及NLS（nuclear localization signal)的pcDNA3mCⅡTA4突变体。用脂质体转染法将上述3种突变体及pcDNA3空载体转入HeLa细胞和的Raji细胞。用流式细胞术和RT－PCR法观察它们对HeLa/Raji细胞HLA－DR／DQ分子的诱导性和组成性表达的影响。结果：在细胞和基因水平证实pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4对HeLa/Raji细胞HLA－DR／DQ的表达起明显抑制作用，而pcDNA3mCⅡTA2和pcDNA3空载体无此作用。结论：成功构建的pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mⅡTA4能抑制HLAⅡ类分子的表达。     

采用PCR-RFLP技术检测中国人HLA纯合细胞DQ基因多态性

本文采用PCR-RFLP方法对7株中国人HLA纯合细胞的DQA1、DQB1基因作基因分型,检出了这些细胞株的DQ基因类型,证实了中国人群存在着一种DRw12与DQA1*0601-DQB1*0301连锁的新单倍型。     

转染MHCII类基因对卵巢癌细胞株免疫特性的影响

建立稳定表达CIITA基因的人卵巢癌细胞株HO CIITA ,分析转染CIITA基因对T细胞体外抗肿瘤免疫应答的影响。以CIITA基因逆转录病毒 (pLXSN/CIITA )转染并筛选获得HO CIITA。用FACS和RT PCR分析HLA以及抗原加工递呈基因表达水平。以磁珠法分离得到正常人外周血CD4 +/CD8+T细胞 ,分别进行混合淋巴细胞反应及细胞因子测定 (ELISA和RT PCR )。结果显示 ,转染CIITA基因后 ,使HO细胞HLAII类分子和LMP7基因表达增高 ,而Ii基因表达由阳性转为阴性 ,未检测到TAP1表达 ;HO和HO CIITA细胞刺激CD4 +T细胞分泌IL 4含量两者有显著差异。刺激 4 8h后达到顶峰 ,前者分泌量约为后者的 1/2 ,但分泌IFN γ无差异 ,RT PCR与ELISA两种测定结果一致。表明转染CIITA基因可增加肿瘤细胞表面MHCII类分子的表达 ,该作用与IFN γ具有协同效应 ;并能诱导CD4 +T细胞表达IL 4。     

建立猪MHCⅠ类抗原特异性人T细胞系的探讨

目的　建立间接识别中国版纳猪SLAⅠ类P1分子的特异性人T细胞系的方法 ,以进一步研究SLAⅠ类分子的间接识别在猪→人异种细胞性排斥中的作用。方法　以E·coli中表达并纯化的SLAⅠ类分子P1为抗原 ,体外反复刺激健康人PBMC ,3H TdR掺入法筛选特异性增殖的T细胞 ,FACS作表型初步分析。结果　初步测定健康人外周血版纳猪SLAⅠ类P1分子特异性T细胞反应频率约 6 .67× 1 0 - 7,所建 4个T细胞系表型均为TCRαβ+ ,其中 3株以CD4+ 为主 ,1株以CD8+ 为主。结论　利用E .coli表达的纯蛋白抗原可建立间接识别版纳猪SLAⅠ类P1分子的特异性人T细胞系。     

HLA-D抗原的本质和HLA-D分型现状

HLA-D抗原是用细胞学方法检出的HLAⅡ类抗原,以前认为D抗原是HLA-D位点基因的产物。现已证明,独立的D 位点是不存在的,HLA 基因图谱上只有DR、DQ 和DP 组成的D 区。D 抗原可能代表DR 和DQ 分子上的某些决定簇,这些决定簇只被T 细胞所识别。传统的HLA-D 分型采用初次混合淋巴细胞培养(MLC)方法,现证明,用T 克隆方法也能检出HLA-D 抗原,因此D 抗原概念和D 分型方法都在原有基础上有新的发展,本文介绍D 抗原本质和HLA-D 分型研究的新进展。     

人可溶性TRAIL基因的克隆及表达

为了利用大肠杆菌表达人可溶性肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体 (TRAIL )蛋白 ,应用RT PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增人可溶性TRAIL蛋白cDNA ,克隆入PCR2 1 载体 ,测序验证后用基因重组法分别构建了人可溶性TRAIL蛋白的真核与原核表达质粒载体。将重组质粒分别转入COS 7和大肠杆菌M1 5中表达。用流式细胞仪检测人可溶性TRAIL蛋白在COS 7细胞中的瞬时表达 ,用SDS PAGE电泳和Westernblot鉴定大肠杆菌中的表达产物。所表达融合蛋白为人可溶性TRAIL蛋白分子 ,相对分子质量为 2 1 0 0 0 ,表达量约为 2mg/ml。所表达的人可溶性TRAIL蛋白具有诱导HL 60细胞凋亡的作用。上述结果提示大肠杆菌可良好表达具有生物活性的人可溶性TRAIL蛋白 ,为深入研究TRAIL分子在肿瘤与自身免疫性疾病中的可能应用提供了材料。     

不同小鼠品系对天花粉蛋白诱导免疫抑制易感性的差异

为了解不同品系小鼠对天花粉蛋白 (Tk )诱导的免疫抑制应答能力的差异 ,应用OVA特异性T细胞体外增殖抑制试验 ,发现 8种近交系小鼠对Tk相关免疫抑制的敏感性不同。根据抑制幅度 ,C5 7BL/ 6 (H 2 b)被判为高易感品系 (HS ,highsusceptible ) ,同属H 2 k 的C3H/He和AKR为低易感品系 (LS ,lowsusceptible)。Tk浓度为 5 0ng/ml时的T细胞增值抑制百分率对HS为 4 7 8%± 3 4 % ;对两个LS分别为 15 9%± 3 0 %和 18 9%± 3 5 % ,两组间差异显著 (P <0 0 0 1)。这一差异可持续出现在 5 0～ 2 0 0ng/ml的Tk剂量范围内。其余 5个品系 (BALB/c、 6 15、T739、A、DBA/ 2 )的抑制幅度介于HS和LS之间。这一结果有助于研究相应免疫抑制的基因调控。     

从健康人外周血中建立异种抗原特异性的T细胞系初探

为了探讨异种器官移植中Ｔ细胞参与的免疫排斥机理，从健康人外周血中试行建立识别猪淋巴细胞怕特异的Ｔ细胞系方法研究。方法：通过照光致弱的猪外周血单个核细胞反复刺激的人Ｔ淋巴细胞，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法筛选特异性增殖的Ｔ细胞。结果获得２株为ＴＣＲαβ＾＋ＣＤ３＾３＋ＣＤ８＾＋细胞，另１株为ＴＣＲαβ＾＋ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋细胞。结论：健康人外周血中有识别异种抗原特异性的Ｔ细胞系，但出现频率较低。     

异种淋巴细胞混合培养时T淋巴细胞分泌细胞因子的格局

目的 研究异种淋巴细胞混合培养时T淋巴细胞亚群分泌细胞因子的格局。方法 用单向异种混合淋巴细胞反应体系研究人－猪间细胞反应的细胞因子分泌格局。结果 γ干扰素的mRNA与蛋白质均强表达,而白细胞介素4（IL－4）均无表达,初次混合淋巴细胞反应时,IL－10的mRNA弱表达,但是猪抗原特异性T淋巴细胞系中未检测到IL－10mRNA表达。结论 异种淋巴细胞混合培养时以Ⅰ型细胞因子分泌为主,参与反应的细胞因子格局和同种移植时呈现相似性。     

B淋巴细胞抗原互补决定区序列分析的应用

近年来,人们对Ｂ细胞的免疫应答的本质,生发中心的形成,细胞克隆的发生和发育,抗原细胞细胞相互作用,以及不同的Ｂ细胞亚群的调节,在分子水平上加又以重新认识。从而推动了对自身免疫病中Ｂ细胞的超突变、克隆性增生的研究。来自骨髓的Ｂ细胞迁移至外周淋巴组织如淋巴结、粘膜下和关节滑膜等,受到抗原刺激后开始分化,并形成生发中心。生发中心的Ｂ细胞一旦与抗原特异性结合,即可受到抗原的选择也称亲和力的筛选,发生类别转换与体细胞突变。而免疫球蛋白基因超突变ｈｙｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ则为高亲和性Ｂ细胞的发生与发展提…