类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Notch及其配体表达

为研究Notch信号途径在类风湿关节炎(RA)发病机制中的作用,选取活动期RA患者,采用流式细胞术结合细胞表面及细胞内染色技术检测外周血单个核细胞Notch受体及配体表达情况,并与正常对照进行比较。结果发现,活动期RA患者外周血T细胞Notch2、Notch3及Notch4表达较正常人明显增加,Notch1分子表达均较少,二者未见差异。其中表达Notch分子的细胞以CD4+T细胞为主。二者B细胞Notch1、Notch2、Notch3及Notch4的表达均较低,之间未见明显差异。RA患者单核细胞Jagged1分子表达明显增加,而Delta1表达降低。结果提示活动期RA患者外周血单个核细胞中不同群体细胞存在Notch及其配体表达水平的改变。     

人类白细胞抗原基因系统:进展及研究方向的若干建议

<正> 免疫遗传学(immunogenetics)作为基础免疫学的一个主要领域,研究机体免疫应答的遗传基础及其基因调控。主要涉及三个基因系统:免疫球蛋白(Ig)基因系统、T细胞抗原受体(TCR)基因系统和主要组织相容性复体(MHC)。这三个基因系统的共同特点,是以数量极大的基因产物赋于机体具有适应多变内外环境的巨大潜力。所不同的是,Ig     

OVA66抗原肽与HLA-A2分子结合性和结合稳定性的研究

目的：建立利用T2细胞体外筛选肿瘤相关抗原OVA66中HLAA2限制性抗原肽表位的实验方法。方法：应用计算机预测获得OVA66抗原中多个不同分值的九肽分子，在不同浓度(0.2 μg/ml,2 μg/ml,5 μg/ml和20 μg/ml)下与T2细胞共同孵育4 h，并分别在其后的0，2,4 h测定T2细胞表面HLAA2分子的平均表达强度，抗原肽与HLAA2的亲和力以20％MFImax时的抗原肽作用浓度表示；抗原肽与HLAA2分子结合稳定性以MFI(4 h)/MFI(0 h)的百分比表示。结果：经计算机预测所获得的分值不同的4种候选OVA66抗原肽表位与T2细胞表面HLAA*0201的结合能力和结合稳定性显示出差别，并且与预测的分值不尽符合，其中L235和L238与HLAA *0201的结合力优于L236和L237。 结论：利用T2细胞可以在体外初步筛选获得与HLAA *0201具有高亲和力的抗原肽。     

用定量PCR技术分析人体肾癌浸润T淋巴细胞限制性取用TCR Vβ基因格局

T淋巴细胞在特异性抗肿瘤免疫应答中起关键作用。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中富含肿瘤反应性T细胞,体外培养TIL并回输给带瘤宿主,可提高临床免疫治疗效果。但是TIL仍具有高度的异质性,只有从中找到并分离出那些在肿瘤抗原驱动下发生寡克隆扩增T细胞,才有希望在特异并性治疗方面取得突破。国外九十年代起采用分子生物学技术确定TIL中发生寡克隆扩增T细胞的TCR V区基因的特定结构,为肿瘤特异性T细胞免疫治疗开拓了新的前景。本文即是跟踪国外的这一进展,应用定量PCR技术,分析人体肾细胞癌(RCC)TIL的TCR受体谱结构及相应的寡克隆偏移格局。     

MHC Ⅱ类反式激活蛋白调控肿瘤细胞HLA分子的表达

为研究肿瘤细胞ＭＨＣⅡ类分子表达及对ＩＦＮ－γ诱导ＨＬＡ分子表达的反应性与ＣＩＩＴＡ表达的关系。本文采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、免疫组化和流式细胞术检测肿瘤细胞ＨＬＡ分子表达,以ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤细胞ＣＩＩＴＡ基因肿瘤细胞ＨＬＡⅡ类分子表达与ＣＩＩＴＡ表达一致;组成性或诱导性表达ＣＩＩＴＡ的肿瘤细胞,经ＩＦＮ－γ作用后其ＨＬＡⅠ、Ⅱ类分子表达增高;ＩＦＮ－γ诱导后仍不表达ＣＩＩＴＡ的肿瘤细胞,     

膜FasL的纯化与诱导凋亡功能的鉴定

本文用FasL单抗NOK 1与CNBr Sepharose4B偶联 ,制备亲和层析柱 ,从表达FasL的HEpG2细胞膜蛋白抽提液中分离纯化FasL分子。实验证明用本法纯化的FasL其相对分子质量为 3 10 0 0～ 3 3 0 0 0 ,SDS PAGE呈现单一条带 ,Westernblot表明具有一定的抗原性 ,能诱导表达Fas的细胞发生凋亡 ,在一定浓度范围内呈现量 效关系 ,为进一步研究FasL分子的结构功能及制备抗体提供了实验材料。     

sFas、 sFasL及细胞因子在类风湿关节炎疾病中的意义

目的研究sFas,sFasL,细胞因子及抗单链DNA抗体与类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)致病的关系及意义。方法采用ELISA法检测32名RA患者的血清标本。结果RA患者血清sFas,sFasL,IL-6及IL-8的水平均高于正常对照组。活动期sFasL,IL-6及IL-8的水平显著高于非活动期(P∨0.01),而sFas的水平未见显著差异。在32例RA患者中,有8例sFas和sFasL的水平同时升高,9例抗单链DNA抗体和sFasL同时升高。结论IL-6和IL-8的水平与RA的炎症程度有关。高浓度的sFas和sFasL可抑制Ts细胞对TH细胞的负向调节。由Fas/FasL启动淋巴细胞凋亡产生的核抗原,可致机体产生抗单链DNA抗体。检测sFas,sFasL,IL-6及IL-8有助于对RA的诊断,并可为RA的免疫生物治疗提供依据。     

IL-10的双向免疫调节作用

传统观点认为,同一细胞因子的免疫生物学作用相对固定,间接和直接途径刺激免疫应答或抑制免疫应答,两者选其一,但新近有文献报道同一个细胞因子在不同微环境中可发挥截然不同的免疫生物学作用。此领域中,近来以细胞因子IL-10的双向免疫调节活性最受关注,多年来有关IL-10的负向调节作用及其应用研究不断取得进展,另一方面,其免疫刺激的作用及免疫生物学意义的研究也正逐渐深入,并由此猜测其可能是一种多能细胞因子。本文将结合最新文献,就IL-10正、负向调节的免疫学特性进行综述。     

转染MHCⅡ类基因对卵巢癌细胞株免疫特性的影响

建立稳定表达CIITA基因的人卵巢癌细胞株HO-CIITA，分析转染CIITA基因对T细胞体外抗肿瘤免疫应答的影响。以CIITA基因逆转录病毒(pLXSN/CIITA)转染并筛选获得HO-CIITA。用FACS和RT-PCR分析HLA以及抗原加工递呈基因表达水平。以磁珠法分离得到正常人外周血CD4 ／CD8 T细胞，分别进行混合淋巴细胞反应及细胞因子测定(ELISA和RT-PCR)。结果显示，转染CIITA基因后，使HO细胞HLA Ⅱ类分子和LMP7基因表达增高，而Ⅱ基因表达由阳性转为阴性，未检测到TAP1表达；HO和HO-CIITA细胞刺激CD4 T细胞分泌IL-4含量两者有显著差异。刺激48h后达到顶峰，前者分泌量约为后者的1／2，但分泌IFN-γ无差异，RT-PCR与ELISA两种测定结果一致。表明转染CIITA基因可增加肿瘤细胞表面MHC Ⅱ类分子的表达，该作用与IFN-γ具有协同效应；并能诱导CD4 T细胞表达IL-4。     

混合皮肤移植中IL-10在自体角朊细胞诱导局部免疫耐受中的作用

目的：探讨IL-10在混合皮肤移植中角朊细胞诱导的局部免疫耐受中的作用。方法：利用已经建立的MEIC体外模拟系统，检测在引入和未引入自体角朊细胞的实验系统上清中IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的浓度，并用IL-10基因敲除小鼠实验观察IL-10在诱导抑制中的作用。结果：在未引入自体角朊细胞的MELC体系中，表现的是典型的Th1相关的细胞因子动力学曲线，在加入自体角朊细胞后，则出现了细胞因子由Th1和Th2转换的动力学曲线，且IL-10起着关键的作用，在以IL-10基因knockout小鼠的角朊细胞去替代实验体系中的正常小鼠角朊细胞时，对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制率虽有所下降，但无显著差异，而以IL-10基因knockout小鼠的淋巴细胞替代实验体系中的正常小鼠的淋巴细胞时，对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制作用被显著缓解，表明对抑制起关键调节作用的是自体淋巴细胞来源的IL-10，而非自体角朊细胞分泌的IL-10。结论：在混合皮肤移植中，自体角朊细胞是通过激活Th2细胞，后者分泌大量的IL-10和IL-4等细胞因子来抑制Th1细胞增殖，从而抑制Th1亚群所介导的细胞免疫及移植物排斥来诱导局部免疫耐受的。