人CCL20基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体的构建及测序

目的利用RNA干扰技术,以人CCL20基因为靶基因,设计CCL20基因特异性的小干扰RNA(siRNA),构建其短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒表达载体,并进行测序鉴定.方法设计并合成人CCL20基因特异性的DNA寡核苷酸,连接到经Spe Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切线性化的pHSER-dsRNA-GFP-SIN质粒上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性菌落、扩增后提取质粒,进行DNA测序鉴定.结果将合成的两对人CCL20基因特异性DNA寡核苷酸序列退火后,分别克隆到线性化的pHSER-dsRNA-GFP-SIN载体质粒上.在氨苄青霉素培养基条件下,筛选出相应的阳性菌落,经DNA测序鉴定确实为所需序列.结论构建成功了2对人CCL20基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体,可进一步用于干扰CCL20基因的mRNA转录,从而为制备CCL20基因表达抑制型的人角朊干细胞奠定基础.     

DNA疫羁接种研究的方法学问题

本文概述了ＤＮＡ疫苗研制和接种方法的研究现状，包括质粒载体和抗原基因的选择、ＤＮＡ疫羁接种途径等，并介绍了有关ＤＮＡ免疫接种实验研究的十二步自我帮助程序，从而为初涉该领域的研究人员提供了捷径。     

杜兴肌营养不良症治疗进展及前景

目的综述杜兴肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy，DMD）治疗的最新研究进展。方法广泛查阅近年来相关文献，对DMD治疗的研究进展进行综述。结果目前对DMD的治疗主要有基因治疗、细胞治疗和药理学治疗，基因治疗和细胞治疗通过传递正常基因或修正突变基因以及移植正常细胞，如干细胞来进行治疗；而药理学治疗主要针对dystrophin基因缺陷引起的下游事件，运用各种药物来减缓DMD病理进程，从而改善患者的生活质量，延长寿命。结论针对DMD的各种治疗手段均存在一定困难，目前尚不能有效治疗此病，还需要研究探索更有效的治疗浍格     

儿童皮下脂肪的脂肪酸组成及其与年龄和膳食的关系

目的　研究儿童皮下脂肪的脂肪酸组成及其与年龄和膳食的关系。方法　 81名年龄为 7天～ 1 0岁的儿童在外科手术时采取少量皮下脂肪标本 ,并调查膳食史。脂肪标本用气相色谱分析脂肪酸的构成 ,对 1 1种脂肪酸的百分率与年龄的关系用相关与直线回归法做统计分析。结果　饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的总和随年龄增长而减少 ,但硬脂酸 ( C18∶ 0 )与油酸 ( C18∶ 1)和多不饱和脂肪酸成分则随年龄增长而增加。结论　通过与各年龄组膳食史的变化比较 ,认为 :皮下脂肪脂肪酸构成的变化可反映儿童随年龄的增长日常膳食中摄入脂肪的质的变化     

CCL20基因敲低型组织工程皮肤种子细胞的克隆筛选及其干扰效果

目的 采用重组慢病毒CCL20基因特异性shRNA载体感染人永生化角质形成细胞系(HaCaT),筛选出稳定干扰CCL20基因表达的细胞克隆并检测其干扰效果.方法 用CaCl2法将已构建好的3种pHSER-CCL20-shRNA-GFP载体(pHCG-1和pHCG-2为CC120基因特异性,pHCG-3为CCL20基因错配)转染293FT包装出慢病毒颗粒,流式细胞术测定其病毒滴度.用G418压力筛选慢病毒感染的HaCaT,荧光定量RT-PCR和ELISA法分别检测CC120基因mRNA和蛋白的表达水平,以判断其特异性干扰效果.结果 三种慢病毒载体所包装出的慢病毒滴度分别为7.08×105转导单位(TU)/ml、1.88×105TU/ml和2.08×105TU/ml;感染后的HaCaT经过G418筛选5～8周,获得4株CCL20基因特异性的细胞克隆(HaCaT-1、HaCaT-2、HaCaT-3和HaCaT-4)及2株CCL20基因错配对照的细胞克隆(HaCaT-5和HaCaT-6).经荧光定量PCR和ELISA法检测显示,4株CCL20基因特异性细胞克隆均具有稳定干扰效果,不仅能显著地下调CCL20基因的mRNA表达(其抑制率分别为81.0%、89.0%、81.3%、77.2%),而且明显地减少CCL20蛋白分泌(其抑制率分别为70.0%、86.1%、88.1%、90.7%).结论 采用重组慢病毒CCL20基因特异性shRNA载体感染HaCaT可以筛选出具有长期稳定表达RNA干扰效应的CCL20基因敲低型人永生化角质形成细胞克隆,将可能为低免疫排斥反应异基因组织工程皮肤的构建提供种子细胞.     

小建中汤治疗消化性溃汤80例

笔者临证多年应用小建中汤治疗消化性溃疡80例，并与服西药治疗组比较，取得较好的疗效。现报道如下：     

OV-275填充柱快速分离生物样品中脂肪酸的探讨

应用OV-275(氰丙基氰乙基硅氧烷)填充柱对生物样品中14种饱含与不饱合脂肪酸作气相色谱分析,在18分钟之内即可完成分离、定性、定量。OV-275固定液在对r-亚麻酸(C18:3 n-6)花生酸(C20:0)及芥子酸(22:1)、花生四烯酸(C20:4n-6)等脂肪酸组成的选择性优于DEGS(丁二酸二乙二醇聚酯)固定液,分离所需时间也明显短于DEGS和Silar 10C(氰丙基苯基硅氧烷)固定液。     

n-3脂肪酸对血浆脂蛋白代谢的影响

本文就富含n-3 PFUA的鱼油对血脂影响的流行病学和干预试验的最新报道进行了综述,较全面地介绍了鱼油和n-3 PUFA对人体健康影响的进展。     

C2C12成肌细胞体外诱导分化为肌管的实验

 摘 要： 【目的】 观察低浓度马血清体外诱导成肌细胞C 2C 12向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用，探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制。【方法】 将C 2C 12成肌细胞用含不同浓度马血清的高糖DMEM培养基培养，收集细胞，在相差显微镜下观察形态变化，并通过免疫细胞化学（Imminocytochemistry，ICC）及RT-PCR方法分别检测肌性相关基因表达的改变。【结果】 ①20 mL/L和50 mL/L的马血清均能促使C 2C 12细胞形成肌小管，20 mL/L浓度马血清诱导效率最好（第7天时肌小管形成率分别为31．4％ ± 2．1％和19．0％ ± 1．6％，P<0．001）。②20 mL/L马血清诱导3～4 d开始有肌管形成，之后肌管越来越多，到8～9 d达高峰（第9天40．2％ ± 1．3％），往后细胞逐渐衰老死亡。③20 mL/L马血清诱导C 2C 12细胞向成熟肌细胞分化过程中，肌相关蛋白分子表达发生变化：结蛋白（desmin）、成肌分化抗原（MyoD）、生肌素（myogenin）和肌球蛋白（myosin）等表达逐渐增强（未刺激时分别约为49．6％ ± 1．1％、23．4％ ± 1．1％、4．8％ ± 1．6％和2．6％ ± 1．5％；第6天时分别提高为80．4％ ± 1．8％、85．4％ ± 1．1％、22．2％ ± 1．1％和26．0％ ± 1．6％；P<0．001）；desmin、MyoD和myogenin相应的mRNA分子也可以通过RT-PCR检测到。【结论】 ①低浓度的马血清能够有效刺激C 2C 12成肌细胞向成熟细胞分化，以20 mL/L浓度效果最好；②C 2C 12细胞是研究肌细胞发育分化的理想模板；③肌分化发育过程比较复杂，许多因素都可能起影响，研究设计要尽量标准化。