携带人OCT4A基因的慢病毒载体的构建及其稳定转染K562白血病细胞株的建立

本研究旨在构建共表达人OCT4A与绿色荧光蛋白（GFP）慢病毒载体pLVX-OCT4A-ZsGreen1,并通过感染获得稳定表达重组质粒的白血病K562细胞系,观察OCT4A在其中的表达。根据Gen Bank数据库提供的OCT4A mRNA序列,合成编码mRNA基因的特异性引物序列,通过RT-PCR技术扩增出OCT4A全长片段,克隆至pCR-Blunt载体。将OCT4A DNA片段酶切回收后克隆至经EcoR1酶切线性化的慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1,构建pLVX-OCT4A-ZsGreen1慢病毒重组质粒,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确。经三质粒包装系统包装后获得高滴度慢病毒颗粒并感染人白血病细胞系K562,通过流式细胞仪分选获得稳定表达的白血病细胞系,应用Real-time PCR和Western blot方法分别检测稳定转染细胞系的OCT4A mRNA和OCT4A蛋白表达。应用CCK-8法和平板细胞克隆形成试验测定OCT4A对K562细胞增殖能力的影响。结果表明,经限制性内切酶检测及基因测序证实成功构建了携带OCT4A基因的重组慢病毒;包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达（1.43±0.25）×10^8U/ml;病毒感染K562细胞后经流式细胞仪分选获得GFP＋细胞,实时定量PCR及Western blot证实病毒感染后OCT4A基因及蛋白的表达可有效上调;CCK-8法及平板集落形成试验显示病毒感染的K562细胞体外增殖活性明显升高,与对照组相比均有统计学差异（P〈0.05）。结论：成功构建了表达OCT4A基因的慢病毒载体,并且获得可稳定上调OCT4A表达的K562细胞株。     

腹腔镜胆囊切除术治疗急性结石性胆囊炎203例分析

腹腔镜胆囊切除术（laparoscopic cholecystectomy, LC）因具有创伤小、恢复快等优点,已成为治疗胆囊良性疾病的主要方法,广泛应用于临床。但胆囊急性炎症时水肿、充血、粘连给手术带来一定的困难,是否适合行LC曾一度存在争议。本院自2006年1月至2013年1月共行急性胆囊炎LC手术203例,获得良好疗效,现作一总结分析,报告如下。     

康复治疗对脑卒中患者腓肠肌表面肌电信号的影响

目的:研究综合康复治疗对脑卒中患者腓肠肌表面肌电信号的影响。方法:脑卒中偏瘫患者40例,偏瘫侧下肢综合痉挛量表(CSS)评分均12分,随机分为综合组、针刺组各20例,在常规治疗的基础上,2组分别配合综合康复(运动疗法、作业疗法等)与针刺治疗(取患者下肢穴)。治疗前、治疗10和20d时测定2组患者健患侧腓肠肌表面肌电均方根值(RMS),同时进行下肢CSS评分及下肢运动功能Lindmark评分。结果:治疗20d时,综合组患侧腓肠肌RMS值、CSS评分比治疗前和针刺组明显下降(P0.01)。Lindmark评分与治疗前比较2组均有提高,综合组上升幅度高于针刺组(均P0.01)。结论:综合康复治疗可明显改善脑卒中患者下肢的肌痉挛。表面肌电测试中RMS值可作为评价脑卒中患者腓肠肌痉挛的量化指标之一,具有一定的临床使用价值。     

多层螺旋CT在儿童漏斗胸中的应用价值

目的 探讨多层螺旋CT在儿童漏斗胸中的应用价值。方法 收集2018年6月至2020年6月间在我院行多层螺旋CT检查的漏斗胸患儿60例,对其CT表现进行总结。结果 本组患儿对称性漏斗胸45例,非对称性漏斗胸伴胸骨旋转15例,Haller指数平均约（4.58±1.75）,其中轻度漏斗胸6例,中度漏斗胸15例,重度漏斗胸39例,随着漏斗胸程度的加重,相应的心脏旋转角度、胸骨凹陷深度也随之增大;60例患儿中胸部扁平度指数<2有55例,合并脊柱轻度侧弯3例,13例术前CT检查提示肺部病变,5例患儿出现了小气道改变、支气管空气潴留征。结论 CT是诊断和评价漏斗胸的最佳成像方法,可为漏斗胸患儿提供全面的术前评估,为制定手术方案提供详细的数据参考。     

中西医结合治疗急性重型胆管炎

急性重型胆管炎(ACST)的死亡率高达17～25％。我院自1983年2月～1989年12月,在200例ACST治疗中,采用鼻胆管引流配合中药清解灵治疗,结果197例治愈,3例死亡,死亡率为1.5％。     

表面肌电联合等速测试评定肌痉挛的临床研究

目的 研究表面肌电联合等速测试评定肌痉挛的作用.方法 16例脑卒中患者(观察组)和16例正常人(对照组)参加本项研究,采用表面肌电测试训练系统联合等速测试训练仪,进行踝关节等速被动运动时腓肠肌表面肌电的动态测试.惠者痉挛下肢改良Ashworth评分≧1+级,设定踝关节被动运动时测试角速度分别为10°/s、30°/s,每一角速度下重复关节屈伸动作5次,组间休息1 min.分别测定两组踝关节被动活动过程中腓肠肌表面肌电均方根值(RIMS)、峰阻矩(PT)和峰阻矩/体重比(PT/BW),并进行重复测试,二次测试间休息3min.结果 前后两次测试数据的差异无显著性(P>0.05).角速度为分别10°/s、30°/s时,比较观察组与对照组的RMS、PT,、PT/BW指标,除30°/s时的RMS值组间比较无显著性差异外(P>0.05),其余均差异有显著性(P<0.05).10°/s、30°/s两种角速度下观察组间及对照组间比较,除对照组组间PT.、PT/BW比较差异无显著性外(P>0.05),其余数据各组问比较均有显著差异(P<0.05).结论 表面肌电、等速测试评定肌痉挛有良好的信度,稳定性较好,可联合应用作为评定肌痉挛的量化指标.     

脂联素介导 APPL1／AMPK 信号通路对小鼠肾脏缺血再灌注损伤后期纤维化的影响

目的：研究脂联素（APN）介导 APPL1／AMPK 信号通路对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤后期纤维化的影响。方法雄性 C57BL／6小鼠48只,随机分为假手术组（Sham 组）、肾脏急性缺血再灌注组（IRI 组）、肾脏急性缺血再灌注＋APN 组（APN／IRI 组）和肾脏急性缺血再灌注＋生理盐水组（NS／IRI 组）,每组各12只。 APN／IRI 组在术前15 min、术后每24 h 分别经腹腔注射 APN 蛋白球状片段5μg／g,共3次;NS／IRI 组在相应时点经腹腔注射等量生理盐水。 IRI 组均行双侧夹闭肾蒂30 min 后开放肾灌注,Sham 组分离肾蒂但不夹闭。各组大鼠分别在术后2 d 随机各取6只小鼠,留取血液及肾组织标本。 PAS 染色观察肾组织病理变化;全自动生化分析仪检测血尿素氮（BUN）及血肌酐（Scr）含量;Western blot 检测肾脏组织 APPL1蛋白表达和 AMPK 磷酸化水平。术后14 d 每组取剩余6只小鼠肾脏标本,天狼星红苦味酸（Sirus red）染色观察肾组织病理变化,real time PCR 检测α平滑肌肌动蛋白（α－SMA）和转化生长因子β1（TGF －β1）的 mRNA 表达。结果术后2 d,与 Sham 组相比,IRI组、APN／IRI 组和 NS／IRI 组小鼠肾组织小管间质损害加重,血 BUN、Scr 升高（P ＜0．05）,APPL1蛋白表达和AMPK 磷酸化水平明显增高（P ＜0．05）;与 IRI 组相比,APN／IRI 组小鼠肾小管损害明显减轻,血 BUN、Scr 明显降低（P ＜0．05）,APPL1蛋白表达和 AMPK 磷酸化水平明显增高（P ＜0．05）。术后14 d,与 Sham 组相比,IRI 组、APN／IRI 组和 NS／IRI 组小鼠肾组织纤维化程度明显增高,α－SMA 和 TGF －β1的 mRNA 的表达明显增多（P ＜0．05）;与 IRI 组相比,APN／IRI 组小鼠肾组织纤维化程度明显降低,α－SMA 和 TGF －β1的 mRNA 的表达量明显减少（P ＜0．05）。结论APN 介导 APPL1／AMPK 信号通路减轻小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤后期纤维化。     

Ⅱ相代谢酶GST与肿瘤关系研究进展

目的为了了解Ⅱ相代谢酶谷胱甘肽S转移酶（GST）及其与肿瘤的发生．发展以及耐药性相关性的研究进展。方法总结GST酶系的功能、基因超家族，多态性和底物等研究进展及临床意义。结果与结论人谷胱甘肽-S转移酶（GsT）属Ⅱ相代谢酶，是催化谷胱甘肽（GSH）与亲电子的外源物结合的二聚体酶，具有解毒作用，包括α，μ，π，θ等亚族。GST的多态性与肿瘤发生、发展和耐药机制密切相关。     

神经病理性痛大鼠背根神经节TRESK mRNA表达的变化

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节(DRG) 孔钾离子通道TRESK mRNA表达的变化.方法 雄性SD大鼠32只,体重22、0～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n=16):假手术组(S组)和神经病理性痛组(NP组).采用坐骨神经分支选择性损伤法制备神经病理性痛模型.S组仅暴露神经,不结扎.于术前1 d和术后1、3、5、7、14 d取8只大鼠,测定左后肢机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于术前1 d和术后14 d痛阈测定结束后取L4,5术侧DRG,采用RT-PCR法测定TRESK mRNA的表达.结果 与S组比较,NP组MWT明显降低,DRG TRESK mRNA表达明显下调(P<0.05或0.01),TWL差异无统计学意义(P>0.05).结论 神经病理性痛大鼠DRG TRESK mRNA表达下调,该变化可能与神经病理性痛的形成有关.