艰难梭状杆菌肠毒素B在巨大芽孢杆菌中的表达和鉴定

目的 获得高纯度和具有生物活性的重组肠毒素B(rTcdB).方法 以艰难梭状芽孢杆菌染色体DNA为模板,通过PCR方法扩增得到全长TcdB基因并克隆至穿梭载体pHis1522.构建的质粒经直接测序验证无误后,转化巨大芽孢杆菌原生质体,在木糖的诱导作用下进行TcdB的表达、纯化及生物活性鉴定.结果 从细菌培养液中纯化得到rTcdB,浓度达到5～10 mg/L,其相对分子质量与天然的TcdB蛋白接近,生物活性与天然的TcdB蛋白相似.结论 在巨大芽孢杆菌中成功表达了具有完整结构和活性的艰难梭状芽孢杆菌TcdB重组蛋白.

Abstract：

Objective To express and purify recombinant and biologically active Clostridium difficile toxin B (rTcdB). Methods The genes of TcdB were amplified by polymerase chain reaction (PCR) using chromosomal DNA from a toxigenic strain, and cloned into a shuttle vector pHis1522.The sequences of TcdB genes in the vector were verified by DNA sequencing. The construction was transformed into Bacillus megaterium protoplasts and the protein expression was driven by a xylose promoter. The purified protein was tested for biological activity. Results rTcdB was successfully purified from bacterial crude extracts. Approximately 5-10 mg of highly purified recombinant toxin was obtained from one liter of bacterial culture. The expressed rTcdB had molecular mass similar to the native toxin, and its biological activity was proved to be similar to its native counterpart after an extensive examination. Conclusion rTcdB with biological activities is successfully expressed in Bacillus megaterium.     

一步夹心点免疫结合试验检测HBeAg

一步夹心点免疫结合试验检测ＨＢｅＡｇ周伯平１姚集鲁２１广东省深圳市东湖医院肝病研究室５１８０２０２中山医科大学传染病教研室主题词肝炎抗原，肝炎／分析免疫测定ＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｅｅｎｔｉｇｅｎｓ／ａｎａｌｙｓｉｓｉｍ...     

CD4+CD25+调节性T细胞对肺结核患者特异细胞免疫的调节作用

目的　探讨调节性T细胞对结核患者特异性细胞免疫的调节作用及其在结核病发生中的意义。方法 采用免疫磁珠从健康对照和结核患者外周血单个核细胞中分离CD4⁺CD25⁺调节性T细胞,观察其对结核患者外周血免疫反应,包括细胞增殖反应和细胞因子IFN-γ及IL-10分泌的影响。结果 体外消除CD4⁺CD25⁺调节性T细胞没有显著影响健康对照PBMC对BCG抗原的增殖反应,但可以显著增强结核患者PBMC对BCG抗原的细胞增殖反应、细胞因子IFN-γ及IL-10的分泌。分离的CD4⁺CD25⁺调节性T细胞能显著抑制结核患者CD4⁺CD25^-T细胞对BCG抗原及抗-CD3的细胞增殖和细胞因子IFN-γ分泌;CD4⁺CD25⁺调节性T细胞也抑制BCG刺激的CD4⁺CD25^-T细胞IL-10的分泌,但不影响抗-CD3刺激的IL-10分泌。结论 CD4⁺CD25⁺调节性T细胞可能通过抑制结核患者特异性细胞免疫应答促进肺结核病的发生发展。     

重症SARS的临床特点和胸部X线表现

目的总结和观察重症SARS的临床特点和胸部X线表现.方法对我院经临床诊断为重症SARS的24例患者的临床和胸部X线资料进行回顾性分析.结果 24例重症SARS患者中高热24例(100%),呼吸困难23例(95.8%),干咳19例(79.2%),胸闷、胸痛17例(70.8%).2例合并肝炎,1例合并糖尿病,1例同时伴有妊娠.外周血白细胞均正常或降低、淋巴细胞明显降低、低氧血症.胸部X线表现呈斑片状或小片状阴影15例(62.5%),大片状阴影5例(20.8%)及磨玻璃影9例(37.5%),肺纹理增粗11例(45.8%);肺部病灶位于两肺者18例(75%),其中病灶位于两中、下肺野者15例(62.5%),2例(8.3%)同时并发肺不张;肺部病灶位于一侧肺者6例(25%).病情未得到有效控制时,病灶24～48h内进展＞50%者14例(58.3%),且具有游走性.所有患者病灶吸收时间相对于非重症SARS明显延长,平均吸收时间为19d.8例(33.3%)肺部渗出性病灶吸收后肺内有不同程度的纤维化改变.结论重症SARS具有发热、咳嗽和呼吸困难以及外周白细胞正常和降低,CD4T淋巴细胞明显降低和低氧血症等特点.肺部X线表现以两中下肺野多叶多段、大小片状影为主;游走性及磨玻璃样影多见.     

胸腺肽α1及干扰素α-2b联合治疗慢性乙型肝炎的近期及远期疗效研究

我们于1995年至1998年应用胸腺肽al（T。l）与干扰素a－Zb（IFNa－Zb）联合治疗慢性乙型病毒性肝炎（CHB）30例。并设单用IFNa—Zb30例治疗组和不用抗病毒／免疫调节药物对照组15例。旨在评价Tal加IFNa－Zb联合治疗的近期（完成疗程时）和远期（随访1年以上）疗效及毒副反应。资料与方法1研究对象：所选病例均符合1995年（北京）全国传染病与寄生虫病学术会议修订的CHB诊断标准。全部病例为深圳市东湖医院患者。三组的基本情况有可比性（表1）。2．治疗方法：（A）Tall．6mg,皮下注射,开始连用4天,然后改每周2次,疗程6个月（…     

牛肝细胞刺激物质的成分及对小鼠急性肝衰竭的保护作用

应用液相色谱及等离子体发射光谱法分析新生牛肝匀浆提取液中的游离氨基酸及微量元素成分;观察该提取液腹腔注射后对CCl_4中毒小鼠急性肝衰竭的保护作用。结果表明提取液中含有13种以上的游离氨基酸,其中6种为必需氨基酸,牛磺酸含量为正常成人血浆的8倍,支/芳氨基酸比值为3.2。微量元素以Mn、Zn、Mg、Se及Fe的含量较高。该提取液能明显提高实验动物的成活率(60％,对照组为10％,P相似文献   

TLMV5′非编码区基因的克隆与序列分析

目的　调查TTV阴性的非甲～庚型肝炎患者中TTV -likeminivirus(TLMV)感染情况 ,对TLMV5′非编码区 (5′NCR)部分基因进行分子克隆与序列分析。方法　采用巢式PCR技术检测5 3例TTV阴性的非甲～庚肝炎患者血清TLMVDNA ,对PCR产物进行克隆、测序和分析。结果　 5 3例病例中TLMVDNA阳性 37例 (6 9 8% ) ,对其中 8株TLMV基因克隆测序 ,并与Takahashi报道的TLMV序列 (GenBankAccessionNo ab 0 2 6 930、ab0 2 6 931)比较 ,其核苷酸序列同源性在 6 4%～ 83%之间。结论　在TTV阴性的非甲～庚肝炎患者中存在TLMV感染。TLMV5′NCR基因变异性较大。TLMV的致病性及其与非甲～庚肝炎的关系尚有待进一步研究     

维持性血液透析患者输血传播性病毒感染状况及其基因分析

目的研究维持性血液透析患者输血传播性病毒(TTV)感染状况,及进行其部分基因序列分析.方法设计TTVORF1部分基因引物,巢式PCR检测80例血液透析患者及12例血液透析工作人员血清标本,将PCR产物克隆、测序分析.结果血液透析患者TTV感染率为35%(28/80),12名工作人员中有1例呈TTV阳性(8.3%).与日本株相比较,本实验分离株TTVORF1部分基因同源性为96.7%.TTV合并HBV感染者8例(8%),合并HCV感染者5例(6%);TTV与HBV、HCV同时感染者2例(2%).TTV阳性患者中,有输血史者占57%.结论血液透析患者中存在严重的TTV感染,血液透析工作人员亦存在TTV感染.TTV可以与HBV、HCV重叠感染,TTV感染者可能与输血有关,但TTV的非血液传播同样应引起重视.