结核分枝杆菌MPT64蛋白的表达，纯化及初步应用

目的 获得重组MPT64蛋白，研究其特性，评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 应用基因工程技术表达、纯化MPT64蛋白，通过Western blotting分析其抗原性。分别以结核分枝杆菌PPD或纯化的rMPT64蛋白为抗原，通过ELISA方法及结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果 重组质粒pE T15b-MPT64测序表达除83位密码子由CCA突变为CCG外，其余密码子均与报道的相同，但其氨基酸序列无变化。它在大肠杆菌BL21（DE3）细胞内以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的20－30％，分子量约26kDa,Western blotting分析它与抗结核分要支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化后的rMPT64样品经SDS－PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为80％左右，每100ml培养菌可获得10mg左右的重组蛋白。以33例正常人血清的OD值＋2S为正常界限值，PDD的特异性和敏感性分别为 94％（31／33）、63.7%(21/33)、66.7%;rMPT64纯化蛋白分别为94%(31/33)、30.3(10/33)；一步法分别为88％（29／33）。结论 pET15b－MPT64大肠杆菌工程菌能以包涵体形式高效表表重组 MPT64蛋白，该蛋白具有较高的抗性和免疫反应性。rMPT64纯化蛋白有可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。     

行为教育对未注册护士洗手依从性的影响

近年来,我院新招聘的未注册护士(指按照《中华人民共和国护士管理办法》第2条规定,未取得《中华人民共和国护士执业证书》并未经过注册的护理专业技术人员)较多,她们缺乏系统的医院感染基本知识和标准预防措施培训,预防医院感染意识薄弱.     

69例"复治肺结核"患者的病原菌构成、耐药性的临床分析

目的了解复治肺结核患者的细菌学及耐药情况和临床特征。方法分析69例临床分离株的耐药情况。应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)进行了菌种鉴定。结果结果表明,利福平(REP)、异烟肼(INH)链霉素(SM)、吡嗪酰胺(PZA)和乙胺丁醇(EMB)耐药率分别为79.7%,68.1%,76.8%,69.5%和44.9%。非结核分支杆菌4株,为堪萨斯分支杆菌2株,鸟胞内分支杆菌1株,偶然脓肿分枝杆菌1株。3例治愈,1例死亡。结论复治肺结核病人中有一小部分为非结核分支杆菌肺病患者,菌型鉴定非常重要,有助于诊断和治疗。     

结核中心结核分支杆菌Ag85A蛋白的克隆、表达及其血清学诊断价值的研究

10多年来国内、外学者一直从结核分支杆菌培养滤液中提纯蛋白质抗原进行多方面的研究,由于该方法制备蛋白抗原较烦琐、费时,因此,近年来许多研究者应用大肠杆菌来表达结核分支杆菌基因,简便地获得了大量结核分支杆菌单一的蛋白抗原.Ag85复合物是结核分支杆菌主要的分泌性蛋白,在结核分支杆菌H37Rv株中占分泌蛋白总量的30%,可从早期培养物中分离,是一种热不稳定的蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦分析可分为Ag85A、Ag85B和Ag85C三个组分[1].因此本研究通过基因工程技术构建结核分支杆菌Ag85A表达株,获得重组Ag85A(rAg85A)蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,为研制更有效的结核病免疫诊断试剂和新型的结核病疫苗奠定了基础.     

应用基因阵列法快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变

目的　研制一种新型的基因阵列 ,用于结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的快速检测。方法　根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计寡核苷酸探针并制作基因阵列 ,用生物素标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的目的片断 ,与基因阵列杂交 ,同时以聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术及DNA测序法为对照。结果　 111株结核分枝杆菌临床分离株经PCR SSCP分析 ,4 1株RFP敏感株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同 ;70株耐RFP菌株中 ,6 3株(90 % )SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株不同 ,其余 7株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同。基因阵列检测结果 4 1株RFP敏感株杂交图谱与标准株完全相同 ,70株耐RFP临床分离株中 ,6 3株检测到rpoB基因突变 ,检出率为 90 % ;其中 37株 (5 3% ) 5 31位丝氨酸 (Ser)置换 ,15株 (2 1% ) 5 2 6位组氨酸(His)置换 ,11株 (16 % )其他位置的氨基酸置换。基因阵列检测结果与PCR SSCP及测序结果一致。结论　用基因阵列法可简便、快速、准确地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变。     

具有抗结核作用中药及其成分研究进展

肺结核(TB)是全球重大公共卫生和社会问题,近年来耐多药率、广泛耐药率不断上升,抗结核化疗药物的毒副作用越来越严重,肺结核患者免疫力低下,使得肺结核疫情进一步加剧,研发出抗结核有效、副作用少的药物迫在眉睫。鉴于中药在防治肺结核中发挥着重要的作用,该文就近年来抗结核中药及其主要成分做一综述。     

应用结核病DNA疫苗治疗小鼠耐多药结核病的研究

目的 研究结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗单独或联合药物治疗小鼠耐多药结核病的效果,为建立耐多药结核病的免疫治疗新策略和新方案奠定基础.方法 用结核分枝杆菌高耐利福平、低耐异烟肼临床分离株HB361尾静脉注射17～19 g的6～8周龄雌性BALB/C小鼠后,将小鼠随机分为6组,每组10只.感染后第2天开始,分别用pVAX1载体(A组)、利福平(B组)、吡嗪酰胺(C组)、Ag85A质粒DNA疫苗(D组)、Ag85A质粒DNA疫苗联合利福平(E组)、Ag85A质粒DNA疫苗联合吡嗪酰胺(F组)治疗60 d.治疗结束后4周,分别取肺、肝和脾观察病理改变,称取重量,做菌落计数.结果 小鼠感染4周后,肺内菌量达到1.5×107 CFU,脾内菌量达到1.1×106 CFU.A、B组小鼠死亡率均为10%,其余各组小鼠均存活.治疗结束后4周,肺组织病理显示,各治疗组肺组织病变均有不同程度减轻,病变局限,可见正常的肺泡结构,肺泡轮廓相对清晰.与A组比较,C、D、E、F组肺组织菌落数分别减少了1.18、1.35、1.38、1.08 logs,脾脏菌落数分别减少了0.91、1.00、1.26、1.03 logs(P＜0.01).结论 结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗单独或联合药物治疗小鼠耐多药结核病均有显著疗效.Ag85A质粒DNA疫苗与抗结核药物联合治疗是治疗耐多药结核病的最有前途的免疫策略.     

Ag85A/B嵌合DNA疫苗治疗小鼠敏感结核病疗效的实验研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A/B嵌合DNA疫苗治疗小鼠敏感结核病的效果。方法用结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉注射50只雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为5组,感染后第3 d开始,分别用生理盐水(A组)、pVAX1载体(B组)、利福平(C组)、草分枝杆菌F.U.36注射液(D组)、Ag85A/B嵌合DNA疫苗(E组)治疗,每2周肌肉注射1次DNA疫苗,共3次。在治疗结束后2周,杀鼠,取小鼠肺和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数。结果与A组比较,D组、E组肺脏病变有不同程度减轻,病变局限,3/5区域肺泡结构完整,清晰,细胞分布均匀。与A组相比,C、D、E组肺脏菌落数依次减少2.11 log、0.76 log、0.81 log;肝脏菌落数依次减少2.11 log、0.74 log、1.11 logs(P0.01)。结论 Ag85A/B嵌合DNA对小鼠敏感结核病具有较好的治疗效果。     

糖尿病合并肺结核患者清晨高血糖20例分析及处理

目的 探讨糖尿病合并肺结核患者清晨高血糖的原因.方法 监测20例糖尿病合并肺结核患者22:00-6:00时段血糖,每隔2 h监测1次,对监测结果进行分析.结果 3例属Somogyi现象,5例属黎明现象,12例为胰岛素用量不足,分别给予不同处理,空腹血糖均达标.结论 检测午夜前后的血糖是治疗糖尿病合并肺结核患者清晨高血糖的关键.