整合素αvβ3小干扰RNA载体构建及其对人视网膜血管内皮细胞的干扰效应检测

目的设计和构建整合素αvβ3（integrin αvβ3）特异性的小干扰RNA表达载体，并初步验证其对靶基因的抑制作用j方法设计靶点特异性的寡核苷酸，连接到经BamH 1-Hind Ⅲ酶切线性化的pGCsilencer2．0-U6质粒上，转染重组质粒到人视网膜血管内皮细胞，通过免疫印迹（Western印迹）及逆转录（RT-PCR）实验检测靶基因的抑制情况。结果成功构建pGCU6-ITGαv和pGCU6-ITGβ3 siRNAs重组质粒，转染人视网膜血管内皮细胞，Western印迹，RT-PCR结果证实重组质粒在蛋白及mRNA水平均能抑制整合素αvβ3的表达。结论成功构建了针对整合素αvβ3的siRNA质粒，该质粒可抑制整合素αvβ3在人视网膜血管内皮细胞中的表达。     

Vogt-小柳原田综合征误诊为青光眼并行手术一例

患者男,55岁.因双眼先后视力下降、眼痛伴头痛1个半月入我院,自诉发病前曾有感冒样症状.右眼曾在当地医院行抗青光眼手术治疗,术后症状无改善.入院查体:视力:右眼:手动/20 cm,左眼:0.1(+3.00=0.3);眼压:右眼:12 mm Hg,左眼:19 mm Hg.右眼角膜光滑透明,上方虹膜根切口可见,瞳孔直径约7 mm、欠圆,对光反射(-),晶状体混浊,玻璃体混浊.眼底模糊可见:视乳头充血、水肿,附近视网膜水肿,下方渗出性视网膜脱离,黄斑中心凹反射(-),左眼角膜后KP,瞳孔直径约4.0 mm、欠圆,对光反射(-),晶状体混浊,玻璃体混浊.眼底模糊可见:视盘境界欠清,下方渗出性视网膜脱离,黄斑中心凹反射(-).B超:示双眼玻璃体混浊,渗出性视网膜脱离(图1).     

黄斑疾病手术治疗的进展

黄斑部的病变是导致视力下降或丧失的主要原因之一。目前，随着玻璃体手术技术的不断完善和发展，视网膜和视网膜下手术成为可能，为黄斑疾病的治疗开辟了新的途径。观对目前黄斑疾病手术治疗的最新进展作一介绍。     

眼球内异物1369眼临床分析

我科于1958—1990年共收住院眼球内异物伤手术病人1369眼,现将治疗结果报告如下。临床资料男性1236眼,女性133眼,两者比为9.3∶1。年龄分布以21—30岁最多,占41%,其次为31—40岁(20%)、11—20岁(10%)。职别:工人超过半数(59.8%),农民与学生几乎相近似(19%:16%)。受伤眼别:右眼653只,左眼716只。穿孔部位:角膜高于巩膜3倍以上(991:293),角巩膜缘     

真性多瞳症合并青光眼一例

范××,男,26岁,自出生后双眼视力障碍于1987年6月21日就诊。查体:全身检查无改变。视力右眼30厘米光感,左眼0.02,不能矫正。眼压,右眼8.26kPa,左眼6.67kPa。双眼内斜20°,眼球过     

Notch1和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1在糖尿病小鼠视网膜中的表达

背景 多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1（PARP-1）在糖尿病视网膜病变（DR）发生过程中具有重要作用,而Notch1是生物体重要的信号转导通路,可能参与对视网膜新生血管性疾病的拮抗过程,Notch1是否参与了DR的发生还未得到证实. 目的 探讨Notch1、Dll4、PARP-1、Akt、核因子-κB（NF-κB）及caspase-3在糖尿病小鼠视网膜组织及高糖视网膜血管内皮细胞（RVECs）中的表达. 方法 建立糖尿病小鼠模型,应用免疫组织化学法和Western blot法检测Notch1、Dll4、PARP-1、Akt、NF-κB及caspase-3在糖尿病小鼠视网膜组织及RVECs的表达.结果 Notch1、Dll4、p-Akt在糖尿病小鼠视网膜组织中的表达量比正常对照组明显降低,而PARP-1、caspase-3在糖尿病小鼠视网膜组织中的表达量比正常对照组明显增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,但NF-κB的表达量无明显变化,差异无统计学意义（t=0.748,P=0.530）.RVECs中Notch1、p-Akt的表达量随葡萄糖浓度的增高而增加,而剪切型PARP-1、caspase-3的表达量则随葡萄糖浓度的增高而降低,在葡萄糖浓度为30 mmol/L时上述变化最显著,与正常对照组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）,而NF-κB的表达量无明显变化. 结论 在糖尿病小鼠视网膜中,剪切型PARP和caspase-3蛋白的表达上调,但Notch1、p-Akt蛋白的表达量下调.剪切型PARP和caspase-3表达量随葡萄糖浓度的增高而增加,Notch1、p-Akt则相反.     

紫杉醇抑制原代培养人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的研究紫杉醇（Taxol）对体外原代培养人视网膜色素上皮（human Retinal Pigment Epithelium,hRPE）细胞增殖的抑制作用及机制。方法体外分离、原代培养hRPE细胞,采用免疫细胞化学方法对其进行鉴定。不同浓度紫杉醇（0、0.005、0.05、0.5、5mg/L）处理hRPE细胞一定时间,采用形态学观察、细胞生长曲线及MTT法检测药物对hRPE细胞的生长抑制效应,流式细胞术检测药物对hRPE细胞的细胞周期阻滞作用及凋亡诱导作用。结果原代培养的hRPE细胞胞浆富含色素,随传代次数增加,黑色素颗粒逐渐减少直至消失。用抗人细胞角蛋白抗体进行免疫细胞化学鉴定hRPE细胞呈特异的阳性反应。细胞生长曲线及MTT法显示：紫杉醇作用于hRPE细胞24h和72h,其抑制细胞生长增殖的IC50值分别为5.24和3.24mg/L。流式细胞分析术检测结果显示：0.5mg/L紫衫醇作用细胞48h即可显著延迟hRPE细胞G2/M期进展并诱导凋亡（P〈0.05）。透射电镜观察显示：0.5mg/L紫杉醇作用后细胞表面微绒毛减少,电子密度增加,细胞器减少,异染色质聚集成团、边聚等。结论紫杉醇通过阻滞G2/M期进展和诱导凋亡显著抑制hRPE细胞生长增殖。     

雷公藤内酯醇的药理作用机制及其在眼科应用的研究展望

雷公藤内酯醇(triptolide,TP),又称雷公藤甲素,是从卫矛科雷公藤属雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.F.)、昆明山海棠[T.Hypoglaucum(Levl)Hukeda]以及苍山雷公藤(T.Forretii Dials)、东北雷公藤(T.Regelli Sprague et Taketa)等物质中分离得到的二萜内酯化合物,20世纪70年代,由Kupchan等[1]首次分离,至今已从雷公藤属植物提取近70种成分,其中TP的生物活性最强,其效价比雷公藤总苷高100～200倍.研究证实TP具有免疫抑制、抗炎、抗生育及抗肿瘤等多种药理作用,本文着重就TP在眼科基础研究及临床应用前景进行阐述.     

老年黄斑变性脉络膜新生血管膜的增殖活性

目的 研究老年黄斑变性(AMD)脉络膜新生血管膜(CNVM)的增殖活性.方法 22例AMD病人的CNVM,用免疫组化的方法分析增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞核因子(NF-κB)、c-fos在CNVM中的表达.结果 活动期CNVM的血管内皮细胞与消退期、静止期CNVM的血管内皮细胞对比,PCNA、NF-κB、c-fos均有较高的表达;在静止期CNVM的血管内皮细胞PCNA、NF-κB、c-fos无表达或表达较少(P＜0.01).消退期CNVM的色素细胞与活动期、静止期CNVM的色素细胞对比,PCNA、NF-κB、c-fos均有较高的表达(P＜0.01).消退期CNVM的巨噬细胞与活动期、静止期CNVM的巨噬细胞对比,PCNA、NF-κB、c-fos均有较高的表达(P＜0.01).静止期CNVM的成纤维细胞与活动期、消退期CNVM的成纤维细胞对比,PCNA、NF-κB、c-fos均有较高的表达(P＜0.01).结论 细胞增殖活性的细胞核内基因PCNA、NF-κB、c-fos的表达与CNVM的病理分期(活动期、消退期、静止期)具有明显的相关性.     

不同诱导条件对体外培养视网膜色素上皮细胞表达肝细胞生长因子的影响

目的 验证视网膜色素上皮细胞是肝细胞生长因子的分泌细胞,在蛋白水平检测不同诱导条件对人视网膜色素上皮细胞表达肝细胞生长因子的影响.方法 分别应用体积分数为0.1的胎牛血清、50%巨噬细胞调理液、与单核细胞共培养的方法 诱导视网膜色素上皮细胞,24 h后撤掉各刺激因素继续培养.通过细胞免疫化学方法 检测各种培养条件下肝细胞生长因子在视网膜色素上皮细胞中的表达情况.结果 细胞免疫化学结果 显示,有无诱导因素情况下,视网膜色素上皮细胞中肝细胞生长因子的表达均呈阳性.结论 视网膜色素上皮细胞是肝细胞生长因子的分泌细胞,有无诱导因素情况下,均分泌肝细胞生长因子.