新生小牛视网膜水平细胞生长发育特性的体外实验

目的：研究新生小牛视网膜水平细胞在体外培养中的生长发育规律。 方法：分离培养新生小牛视网膜神经细胞,将培养10、20、30和40 d的细胞进行免疫细胞化学染色,采用Calbindin-D28K抗体标记视网膜水平细胞,用图像分析系统定量测量阳性细胞的免疫反应强度。 结果：培养10 d的水平细胞还不具备典型的形态特征,培养20 d时阳性细胞的形态特征与成熟的水平细胞一致。培养30 d和40 d的水平细胞的形态特点和培养20 d时相似。定量分析显示体外培养20 d时阳性细胞免疫反应强度较10 d时有增加趋势。体外培养30 d和40 d时,阳性的水平细胞免疫反应强度较培养10 d和20 d时均明显减弱。 结论：体外培养20 d的视网膜水平细胞具备成熟的形态特征,免疫反应强度较强,是发育良好的神经元。     

眼缺血综合征临床特征分析

目的分析眼缺血综合征（OIS）的临床特征,提高此病发现率和诊断率。方法回顾分析32例（33只眼）患者的临床资料。所有患者均进行病史询问、视力测定、眼压检查、裂隙灯显微镜、直接检眼镜、双目间接检眼镜、联合90D非接触镜、全视网膜广角接触镜和三面镜检查,其中18只眼接受荧光素眼底血管造影（FFA）,计数资料以百分比（%）表示,统计眼缺血综合征临床特征。结果眼缺血起病隐匿,年龄段55～65岁,男女比例基本相当;主要症状：一过性黑矇（84.8%）、视力下降（69.7%）等,主要体征为：视网膜中周部点状出血（63.3%）、静脉扩张（33.3%）、动脉狭窄（27.2%）等;主要FFA表现：臂-视网膜循环时间延长、动静脉充盈时间差延长,血管壁（主要为小动脉臂）着染、微血管瘤、无灌注区等;患者预后差,目前治疗手段仅能缓解症状,对视力改善甚微。结论眼缺血起病隐匿,应予重视,做到早期诊断与治疗。     

缺氧、氧化应激对视网膜色素上皮细胞增殖及葡萄糖调节蛋白78表达的影响

目的　观察缺氧、氧化应激对体外培养的视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞增殖的影响及ＧＲＰ７８表达的变化。方法　体外培养人ＲＰＥ细胞,采用ＣｏＣｌ２诱发细胞缺氧模型、Ｈ２Ｏ２诱发氧化应激模型。实验分为量-效关系组:细胞分别经浓度为１００μｍｏｌ?Ｌ－１、２００μｍｏｌ?Ｌ－１、４００μｍｏｌ?Ｌ－１、８００μｍｏｌ?Ｌ－１的ＣｏＣｌ２、Ｈ２Ｏ２作用１２ｈ,用ＭＴＴ法检测细胞增殖情况;时-效关系组:在ＣｏＣｌ２浓度为２００μｍｏｌ?Ｌ－１、Ｈ２Ｏ２浓度为４００μｍｏｌ?Ｌ－１的基础上,分别选取药物作用８ｈ、１２ｈ、１６ｈ３个时间点收集细胞,采用免疫细胞化学染色检测ＧＲＰ７８蛋白的表达情况。结果　量-效关系组:不同浓度ＣｏＣｌ２组ＲＰＥ细胞活性与空白对照组相比均明显下降（均为Ｐ＜０．０５）;４００μｍｏｌ?Ｌ－１及８００μｍｏｌ?Ｌ－１Ｈ２Ｏ２组细胞存活率较空白对照组均明显下降（均为Ｐ＜０．０５）。时-效关系组:空白对照组ＧＲＰ７８表达阳性细胞率为（５．４±３０）％;ＣｏＣｌ２作用８ｈ、１２ｈ、１６ｈＧＲＰ７８阳性细胞率分别为（３４２±７１）％、（５４．４±９．１）％、（３４．７±６．８）％;Ｈ２Ｏ２作用８ｈ、１２ｈ、１６ｈＧＲＰ７８阳性细胞率分别为（３７．８±７１）％、（５７．４±５．１）％、（４２．５±３．９）％。经统计学分析,ＣｏＣｌ２、Ｈ２Ｏ２处理８ｈ后,ＲＰＥ细胞中ＧＲＰ７８表达均较空白对照组明显升高（均为Ｐ＜００１）,作用１２ｈ时ＧＲＰ７８的表达量最高,作用１６ｈ时ＧＲＰ７８的表达量又有下降。结论　ＧＲＰ７８可以作为ＲＰＥ细胞缺氧、氧化应激的生化标志物,ＧＲＰ７８的表达变化与细胞应激状态有一定依赖关系。     

苏拉明联合地塞米松对体外培养的视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的:探讨苏拉明(suramin,Sur)联合地塞米松(dexamethasone,Dex)对体外培养的猪视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的影响。方法:选择0.05,0.1,0.2,0.4g/L Sur单独作用及联合0.2g/LDex作用于RPE细胞4d,MTT比色法检测对RPE细胞增殖的影响;0.2g/L Sur和0.2g/L Dex分别作用于RPE细胞,流式细胞术检测细胞周期变化;Sur浓度为0.2g/L,0.4g/L及0.2g/L Sur联合0.2g/L Dex时,透射电镜观察细胞超微结构情况。结果:MTT比色法检测表明各浓度Sur对RPE细胞有抑制作用(P<0.05),呈剂量效应关系;0.2g/L Dex与各浓度Sur联合应用对RPE细胞的抑制率由单独应用Sur的16.0%,27.3%,40.5%,64.1%增至42.3%,52.1%,65.6%,78.8%。流式细胞检测提示Sur将细胞阻滞于G2/M期(P<0.01);Dex将细胞阻滞于S期(P<0.01)。透射电镜结果显示,Sur浓度为0.2g/L时,单独应用及联合0.2g/L Dex应用,RPE细胞结构无明显变化,而Sur0.4g/L时,细胞表面微绒毛减少,细胞核皱缩。结论:Sur联合Dex能有效抑制体外培养的RPE细胞增殖。     

视网膜静脉阻塞患者血浆中血栓素B2和6—酮—前列腺素F1α含量变化

应用放射免疫方法测定了１６例视网膜中央静脉阻塞和１８例视网膜分支静脉阻塞患者及２１例正常对照者血浆中血栓素Ｂ２和６－酮－前列腺素Ｆ１α的含量。结果表明，ＣＲＶＯ组和ＢＲＶＯ组血浆中ＴｘＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α比值均较对照组增大。ＣＲＶＯ组以ＴｘＢ２含量增高为主，提示ＣＲＶＯ的发生主要与血小板聚集活性增高、血液流变学和血流动力学改变有关，ＢＲＶＯ组则以６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量降低为主，提示     

多裂孔视网膜脱离的手术治疗

多裂孔视网膜脱离在治疗上有一定的复杂性,手术成功率往往低于单一裂孔的视网膜脱离。我院于１９９１年８月～１９９６年８月共收治孔源性视网膜脱离病人４３９例（４４５眼）,其中多裂孔性视网膜脱离１３８例（１４１眼）占３１．７％。手术根据视网膜裂孔的数目、形态...     

葡萄糖调节蛋白78真核表达载体及稳定转染人视网膜色素上皮细胞株的构建

背景：葡萄糖调节蛋白78是存在于内质网上最多的分子伴侣蛋白,具有保护细胞对抗细胞调亡的作用。 目的：构建携带并正确表达外源性人葡萄糖调节蛋白78基因的重组真核表达载体,建立葡萄糖调节蛋白78基因稳定转染的人视网膜色素上皮细胞系。 方法：扩增人葡萄糖调节蛋白78全长编码序列,将该目的基因与真核表达载体PEGFP-N1进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,以PCR方法鉴定阳性克隆,并进行测序和分析比对,获得融合蛋白表达质粒载体pEGFP-grp78。通过阳离子脂质体介导将重组质粒pEGFP-grp78转染入体外培养的人视网膜色素上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达细胞系。 结果与结论：体外培养的人视网膜色素上皮细胞株作为真核细胞表达系统,经荧光显微镜和RT-PCR方法检测,G418筛选的稳定转染细胞系中GFP大量表达,葡萄糖调节蛋白78 mRNA的表达量是正常视网膜色素上皮细胞的4倍左右,表示脂质体介导的pEGFP-grp78质粒成功转染视网膜色素上皮细胞,并高效稳定表达葡萄糖调节蛋白78。     

全反式维甲酸对人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）对体外培养人视网膜色素上皮（RPE）细胞增生的抑制作用及机制。 方法：采用传代培养的人RPE细胞,分成不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6和10^-5 mol•L ^-1的ATRA）和不同时间点（6、12、24、48、72和96 h）给药组,通过活细胞计数法、MTT比色法和流式细胞术分别检测ATRA对人RPE细胞增生的影响。 结果：ATRA给药组细胞生存率低于非给药组（P<0.01）。细胞增生的抑制率与药物剂量及时间呈正相关 (r₁=0.9926,P<0.05; r₂=0.9647,P<0.05)。与非给药组比较,ATRA给药组 RPE细胞周期中G₁期细胞增加（P<0.05),而G₀/G₁期细胞数明显减少(P<0.05）。结论：ATRA可能通过阻滞人RPE细胞周期对RPE细胞增生具有剂量依赖和时间依赖的抑制作用。