RNA干扰DNA甲基转移酶1对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察以DNA甲基转移酶1(DNA methy transferas 1,DNMT1)基因为靶基因的RNA干扰对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计、合成针对DNMT1基因的siRNA和阴性对照siRNA(N-siRNA).实验分为空白对照组、脂质体组(仅予脂质体)、N-siRNA组(转染30 nmol N-siRNA)、siRNA组(转染30 nmol siRNA).siRNA转染48 h后,实时PCR法检测DNMT1 mRNA水平;WST-8法检测细胞增殖;流式细胞技术检测细胞凋亡.结果 siRNA组DNMT1 mRNA的抑制率为(86.0±4.3)%,明显高于N-siRNA组的(40.1±2.2)%和空白对照组的0(P＜0.01);细胞存活率为(47.6±5.6)%,明显低于N-siRNA组的(68.1±4.1)%和空白对照组的100%(P＜0.01);细胞凋亡率为(14.94±2.89)%,明显高于空白对照组的(7.51±1.12)%、脂质体组的(7.06±0.39)%、N-siRNA组的(8.84±1.44)%(均P＜0.01).结论 siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞DNMT1mRNA的表达,同时抑制细胞增殖、促进细胞凋亡.     

温和高温下胰腺癌细胞株PANC1对吉西他滨耐药性的影响

目的 观察温和高温下胰腺癌细胞株PANC1对吉西他滨敏感性的影响.方法 应用1 μmol/L吉西他滨处理胰腺癌PANC1细胞1h后,分别置37、42、45℃水浴锅孵育1h,再继续培养0、24、48 h.采用CCK-8法检测细胞增殖,AV/PI染色后上流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 42℃及45℃孵育细胞24、48 h后的细胞增殖均较37℃孵育的细胞显著降低(0.96±0.05、0.88±0.03比1.05±0.02;1.28±0.04、0.94±0.04比1.49±0.09;t值分别为4.367、25.120、3.510、12.101,P值均＜0.05),且45℃孵育的细胞增殖显著低于42℃孵育的细胞(t值分别为3.348、11.732,P值均＜0.05).37、42、45℃孵育的吉西他滨处理的PANC1细胞48 h后的细胞凋亡率分别为(7.125 ±0.064)％、(9.985±0.615)％、( 14.845±1.987)％,3组间的差异均具有统计学意义(t值分别为10.320、9.832、4.575,P值均＜0.05).结论 温和高温可以增加PANC1细胞对吉西他滨的敏感性.     

胰腺癌细胞TM4SF1的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 检测5株人胰腺癌细胞株中TM4SF1 mRNA的表达,探讨TM4SF1基因对癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 采用实时PCR方法检测人胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、HPAC、PANC1、AsPC-1的TM4SF1 mRNA表达,并与人正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）的TM4SF1mRNA表达进行比较.应用RNA干扰方法将靶向TM4SF1的siRNA及阴性对照siRNA瞬时转染MPanc96、MiaPaCa-2细胞.采用MTS法检测转染细胞的增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力.结果 胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、PANC1、AsPC-1、HPAC的TM4SF1 mRNA相对表达量分别为1.205±0.073、1.096±0.260、1.382±0.075、1.374±0.363、0.744±0.096,均显著高于HPDE的0.020±0.003（F =22.26,P＜0.01）.与转染阴性对照siRNA的细胞比较,TM4SF1基因表达沉默的MPanc96、MiaPaCa-2细胞的增殖无显著变化,但细胞的迁移力分别降低（62.5±7.6）％、（72.8±4.0）％,侵袭能力分别下降（69.5±5.7）％、（78.6±6.3）％.结论 TM4SF1在人胰腺癌细胞中高表达,并增强胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力.     

125I籽源短时低剂量率照射对胰腺癌神经生长因子表达的影响

胰腺癌组织125I籽源近距离放射治疗是对位置深在的胰腺癌进行内放疗的一种方法，包括在组织内、组织表面或组织附近放置具有放射性的粒子进行治疗，通过放射性粒子持续释放射线来达到最大限度地杀伤肿瘤细胞的作用。     

MicroRNA-196a抑制序列对人胰腺癌PANC1细胞株HOXB8基因表达的影响

目的 观察microRNA-196a(miR-196a)抑制序列转染胰腺癌细胞株PANC1后对其HOXB8基因表达的影响.方法 将PANC1细胞分为对照组、miR-196a抑制序列组和siRNA对照组.采用脂质体法将miR-196a抑制序列及对照siRNA分别转染PANCI细胞.应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染细胞miR-196a及其下游靶基因HOXB8 mRNA和蛋白的表达.结果 转染miR-196a抑制序列后,PANC1细胞miR-196a表达量较siRNA对照组显著减少(0.050±0.054比0.839±0.025,t=3.12,P＜0.05);HOXB8 mRNA表达量较siRNA对照组增高1.57倍(2.20 ±0.07比1.29±0.10,t=3.86,P＜0.05);HOXB8蛋白表达量也显著增强(0.90±0.03比0.40±0.10,t=3.11,P＜0.05).结论 miR-196a可以下调HOXB8基因的表达.     

同种异体骨髓间充质干细胞在急性坏死性胰腺炎大鼠中的迁移和分化

目的 观察同种异体来源的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠中的迁移及分化状况.方法 分离、纯化雄性SD大鼠的骨髓MSCs.按数字表法将雌性SD大鼠分为正常移植组、ANP移植组和ANP组,每组10只.采用腹腔注射L-精氨酸方法制备ANP模型.24 h后2个移植组大鼠经尾静脉输注MSCs.移植后72 h处死大鼠,取胰腺及心脏、肝脏、肾脏组织标本.胰腺组织常规病理检查并评分,采用原位杂交方法检测各组织Y染色体雄性鉴别基因sry片段的存在.结果 分离的MSCs在培养3～5 d内快速分裂增殖,形成集落,传代培养至第3代,CD29+CD44+CD45-细胞群达到95%以上.ANP组大鼠胰腺组织大片坏死,大量炎细胞浸润,病理分值为(10.31±0.85)分,显著高于ANP移植组的(7.30±0.79)分(P＜0.05).移植组大鼠的心脏、肝脏、胰腺、肾脏均可检测到sry基因.正常移植组胰腺组织可见散在分布的sry阳性细胞;ANP移植组胰腺组织可见较多sry阳性细胞,且多聚集于损伤较严重的部位.结论 炎性损伤的胰腺组织可能具有招募MSCs的能力,并能减轻大鼠胰腺局部的炎症反应.     

大鼠急性胰腺炎中脂肪细胞因子水平的变化及其可能意义

目的:检测各种脂肪细胞因子在大鼠急性胰腺炎中的表达及其可能意义?方法:40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组?假手术组?急性水肿型胰腺炎(AEP)组和急性坏死型胰腺炎(ANP)组,AEP组腹腔注射雨蛙素,ANP组腹腔注射精氨酸,正常对照组不予以任何处理,假手术组给予同等剂量的生理盐水腹腔注射,应用ELISA法测定大鼠血清中抵抗素?瘦素?脂联素?肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β水平的变化,同时检测血清中淀粉酶(AMY),计算胰腺/体重比值,观察胰腺组织病理变化?结果:AEP组和ANP组血清淀粉酶?胰腺/体重比值?胰腺组织病理评分?血清抵抗素?瘦素?TNF-α?IL-1β水平均较对照组和假手术组明显升高,两者之间差异显著(P < 0.01);ANP组较AEP组也升高,两者之间有统计学意义(P < 0.01或P < 0.05);而AEP组中脂联素水平为(3.26 ± 0.68) mg/L,ANP组中为(2.27 ± 0.45) mg/L,与正常对照组和假手术组比较明显降低,且ANP组较AEP组也降低,统计学上差异显著(P < 0.01或P < 0.05);血清抵抗素水平与TNF-α?IL-1β水平?胰腺组织病理评分呈正相关,相关系数r为0.711?0.794和0.812(P < 0.01);血清瘦素水平与TNF-α?IL-1β水平?胰腺组织病理评分呈正相关,相关系数r为0.736?0.812和0.785(P < 0.01或P < 0.05),而血清脂联素与TNF-α?IL-1β水平?胰腺组织病理评分呈负相关,相关系数r为-0.796?-0.809?-0.788(P < 0.01或P < 0.05)?结论:脂肪细胞因子与急性胰腺炎发病发展有关,有可能成为预测急性胰腺炎严重性和预后的有用指标之一,其中抵抗素?瘦素的增加可能加重急性胰腺炎病情的进展,而脂联素增加可能起到保护作用,为急性胰腺炎的治疗提供了新的靶点?     

急性坏死性胰腺炎大鼠骨髓间充质干细胞增殖能力的变化

±8.73、17.62±5.65和8.89±3.92,均显著高于对照组的3.83±1.47(P＜0.05);获取的MSCs细胞(CD29+CD44+CD45-)比例分别为(7.61±0.67)%、(6.43±0.54)%、(3.30±0.41)%,ANP 12、24 h获取MSCs比例显著高于对照组的(5.18±0.35)%(P＜0.05).而36 h的MSCs比例显著低于对照组(P＜0.05).结论 ANP不同时间段MSCs数量和增殖能力发生改变,经历了先增加后减少的过程.     

NPTX2甲基化在胰腺癌中的定量检测及诊断应用

目的:检测NPTX2甲基化水平在胰腺癌中变化并评价其用于胰腺癌诊断的价值.方法:在10例胰腺癌组织和10例癌旁正常胰腺组织中,分别应用定量RT-PCR和SYBR Green荧光掺入甲基化特异性定量检测法检测NPTX2 mRNA表达量及CpG岛的甲基化量.应用上述建立甲基化特异性定量检测方法分析NPTX2甲基化在胰腺癌及健康志愿者全血DNA中的差异.结果:NPTX2基因在胰腺癌组织中mRNA表达量低于癌旁正常胰腺组织(RQ,0.276±0.263 vs 3.526±3.037,P=0.001),而其甲基化指数(MI)较癌旁正常胰腺组织高[(9.02±7.52)%vs(1.28±0.98)OA,P=0.003].RQ与MI两者之间存在负相关关系(R=-0.552,P=0.012).NPTX2基因MI在胰腺癌患者全血DNA中显著高于健康人[(1.80±1.76)%vs(0.84±0.45)%,P<0.05].结论:在胰腺癌组织中NPTX2发生高甲基化变化,检测其在临床样品中的MI可辅助用于胰腺癌诊断.     

SHH mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达及意义

目的检测Sonic Hedgehog(SHH)mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达,探讨SHH mRNA在胰腺癌发生和发展中的作用。方法收集本实验室保存的6株人胰腺癌细胞系及30例胰腺癌和相应癌旁正常胰腺组织,应用半定量RT-PCR方法检测SHH mRNA的表达。结果6株人胰腺癌细胞系中均有SHH mRNA高表达;胰腺癌组织SHH mRNA表达率为86.7%,表达强度为0.785±0.070,癌旁正常胰腺组织SHH mRNA表达率为40.0%,表达强度为0.463±0.055,两者具有显著性差异(P<0.01)。SHH mRNA的表达水平与胰腺癌的肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移均无相关性。结论胰腺癌存在SHH mRNA的高表达,这可能是胰腺癌发生的早期事件。