组蛋白去乙酰化酶1在胰腺癌表达及临床意义

目的 探讨胰腺癌组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)表达的临床意义.方法 收集30例胰腺癌和相应癌旁组织,应用实时定量PCR和免疫组织化学方法检测HDAC1的表达,并分析胰腺癌HDAC1表达与临床病理参数的关系.结果 胰腺癌HDAC1 mRNA表达指数为2.60(0.42～12.81),癌旁组织为1.02(0.19～3.58),两组表达有显著差异(P=0.001).胰腺癌HDAC1蛋白表达阳性细胞率为(56±26)%,癌旁组织为(6±6)%,相差显著(P=0.000).以阳性细胞率平均值56%为界,高表达(≥56%)18例,低表达(＜56%)12例.胰腺癌HDAC1高表达和肿瘤TNM分期、淋巴结转移相关.结论 胰腺癌HDAC1高表达提示肿瘤可能已属晚期,预后不良.     

二丁基二氯化物尾静脉注射建立大鼠慢性胰腺炎模型

目的 探讨经尾静脉注射二丁基二氯化物建立大鼠慢性胰腺炎模型的方法,为慢性胰腺炎纤维化机制研究提供一种合适的动物模型.方法 将SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组再分为1,7,14,21,28,60 d 6个观察点,每个时间点各5只大鼠.实验组大鼠尾静脉注射二丁基二氯化物8 mg/kg体重,对照组注射相同剂量的乙醇和甘油溶剂.上述时间点分别处死大鼠,收集血液和胰腺标本.检测血清淀粉酶、脂肪酶、透明质酸浓度.观察胰腺形态,病理改变,胶原染色评价纤维化程度.结果 造模后1 d胰腺组织水肿,表现为急性中度间质性水肿性胰腺炎;7 d炎症加重,表现为腺泡肿胀,散在的腺泡细胞坏死;14 d广泛的炎症细胞浸润,伴轻度纤维化;21 ～ 28 d胶原沉积,纤维化加重,可见大量的纤维结缔组织;60 d,胰腺小叶结构破坏,腺泡消失,广泛间质纤维化.结论 尾静脉注射二丁基二氯化物是一种简便、有效的大鼠慢性胰腺炎模型制作方法,能为慢性胰腺炎纤维化的研究提供合适的动物模型.     

^125Ⅰ粒子短时低剂量率照射对胰腺癌Capan-2细胞神经浸润的影响

目的 观察^125I粒子短时低剂量率照射对胰腺癌Capan-2细胞神经浸润的影响,并探讨其分子机制.方法 建立胰腺癌Capan-2细胞和大鼠背根神经节（DRG）共培养及Capan-2或DRG单培养模型.通过125I粒子低剂量率照射平板对3种模型进行照射,以相应未照射模型作为对照.倒置显微镜下观察癌细胞、DRG的生长,图像分析软件计算神经突和癌细胞集落占据的表面积,ELISA法检测细胞培养上清液和基质胶溶解液中神经生长因子（NGF）及转化生长因子α（TGF-α）浓度,RT-PCR法检测胰腺癌Capan-2细胞神经营养因子-3（NT-3）mRNA表达.结果 共培养模型中DRG发出的神经突向癌细胞定向、集中生长,而癌细胞沿神经突的方向生长.经125I粒子照射后这种定向、集中和互逆的生长受到一定程度的抑制.共培养组第5天所增加的神经突表面积为290.15±12.08,较DRG单培养组的124.83±6.96显著增加（P＜0.01）,经照射后的神经突表面积减少到201.53±12.20（P ＜0.01）;所增加的Capan-2细胞表面积为300.47±12.99,较Capan-2细胞单培养组的199.30±8.60显著增加（P＜0.01）,经照射后的Capan-2细胞表面积减少到202.35±7.97 （P ＜0.01）.共培养组不表达NT-3mRNA,经照射后NT-3mRNA表达量为0.68±0.04（P ＜0.05）.共培养组培养上清液中NGF及TGF-α浓度分别为（27.56 ±13.73）、（40.86±20.73） ng/ml,经照射后分别升高到（94.98±33.80）、（157.54±83.76） ng/ml,差异有统计学意义（P＜0.05或＜0.01）.共培养组基质胶溶解液中NGF及TGF-α浓度分别为（60.42 ±33.03）、（64.39±21.52） ng/ml,经照射后分别升高到（132.52±53.01）、（138.38±83.58） ng/ml,其中NGF的差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 125I粒子短时低剂量率照射可以抑制胰腺癌和神经的交互作用,其机制可能与癌细胞促神经浸润介质NGF、TGF-α和NT-3等表达上调有关.     

肽核酸钳制-PCR/K-ras突变检测方法在结直肠癌组织中的诊断应用

目的 确定本实验室建立的肽核酸钳制(PNA)-PCR/K-ras突变检测方法的阳性判断标准,并评价其对结直肠癌组织的诊断价值。方法 将含K-ras基因12密码子突变的质粒和野生质粒以不同比例(突变/总体：0,1/3 200,1/1 600,1/800,1/400,1/200,1/100)混合作为标准样品,独立配制6个批次并分别进行PNA-PCR/K-ras突变检测,收集K-ras突变CT值及K-ras总体CT值,计算ΔCT值(突变CT值-总体CT值),采用ROC曲线分析突变CT值和ΔCT值诊断K-ras突变的最适Cut-off值,联合两者最适Cut-off值,设定该方法的最终阳性判断标准。分别采用该方法和直接测序法对35例结直肠癌组织及对应癌旁组织进行K-ras突变检测并比较分析。结果 突变模板浓度为1/800及以上的标准样品突变CT值和ΔCT值与阴性标准品之间差异存在统计学意义(P<0.05);突变CT值和ΔCT值的最适Cut-off值分别为41.7和15.4。最终阳性判断标准为突变CT值≤41.7或ΔCT值≤15.4,对应的ROC曲线下面积为0.955(P=0.001),以此判断标准,各标准样品 (0,1/3 200,1/1 600,1/800,1/400,1/200,1/100)的阳性检测率分别为0%、66.7%、83.3%、100%、100%、100%、100%,检测下限为1/800。在结直肠癌及癌旁组织标本中,该方法阳性检测率为45.7%(32/70),与直接测序法(18.6%,13/70) 比较差异具有统计学意义(P=0.000)。结论 PNA-PCR/K-ras突变检测方法具有较高的检测灵敏度,在结直肠癌组织样本中具有较直接测序法更高的阳性检出率。     

缺氧状态下人胰腺癌细胞对吉西他滨反应的实验研究

目的:观察缺氧状态对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响并分析其相关机制。方法:将人胰腺癌细胞SW1990分为常氧组、缺氧组、常氧+吉西他滨组和缺氧+吉西他滨组。MMT法检测各组细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡、Real-time PCR和Western blot分别检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、多药耐药基因(MDR-1)mRNA和蛋白的表达。结果:与常氧+吉西他滨组相比,低氧+吉西他滨组的细胞增殖率明显增加,细胞凋亡率显著下降(P<0.05);低氧组和低氧+吉西他滨组HIF-1α蛋白表达分别显著高于常氧组(P<0.05或P<0.01);与常氧组相比,低氧组和低氧+吉西他滨组的MDR1 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:缺氧状态可增加人胰腺癌细胞SW1990对吉西他滨的化疗抵抗,其机制与缺氧环境可诱导HIF-1α和MDR1基因表达有关。     

抵抗素在大鼠急性胰腺炎中的表达

目的检测抵抗素在大鼠急性胰腺炎（AP）中的表达,探讨其与胰腺病理改变的关系。方法40只SD大鼠按数字表法随机分为正常组、假手术组、急性水肿性胰腺炎（AEP）组和急性坏死性胰腺炎（ANP）组。AEP组腹腔注射雨蛙素,ANP组腹腔注射精氨酸,正常组未做任何处理,假手术组腹腔注射等容量生理盐水。测定大鼠血清淀粉酶、抵抗素、TNF-α、IL-1β、C反应蛋白（CRP）水平,记录胰腺／体重比值,观察胰腺组织病理变化,免疫组化法检测胰腺组织抵抗素蛋白表达,实时定量PCR法检测胰腺组织抵抗素mRNA表达。结果抵抗素主要定位于胰腺腺泡细胞的胞质内。AEP组血清淀粉酶水平、胰腺／体重（g／kg）比值、胰腺组织病理评分、抵抗素mRNA表达量及血清抵抗素、IL-1β、TNF-α和CRP水平分别为（4377±343）U／L、（8．67±1．43）、（5．39±0．26）、（2．04±0．19）、（10．21±1．34）ng/ml、（184．18±45．24）pg／ml、（194．24±44．81）pg／ml、（3586±63）ng／ml;ANP组分别为（6750±322）U／L、（9．33±1．76）、（7．81±0．28）、（3．29±0．30）、（15．14±0．84）ng／ml、（349．31±94．54）pg／ml、（315．59±37．04）pg／ml、（4345±244）ng／ml。两组均显著高于假手术组的（1442±183）U／L、（4．34±0．42）、（1．10±0．21）、（0．88±O．08）、（5．13±0．74）ng/ml、（108．74±31．03）pg／ml、（106．44±21．31）pg／ml和（2895±165）ng／ml（P〈0．01）,且该两组间差异也有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）。血清抵抗素水平与CRP、TNF-α、IL-1β水平及胰腺组织病理评分均呈正相关,相关系数r分别为0．711、0．871、0．794和0．812（P〈0．01）。结论抵抗素与AP的发生、发展有关,其检测结果可能是评估AP严重程度的有价值的指标之一.     

抵抗素在大鼠急性胰腺炎中的表达

目的 检测抵抗素在大鼠急性胰腺炎(AP)中的表达,探讨其与胰腺病理改变的关系.方法 40只SD大鼠按数字表法随机分为正常组、假手术组、急性水肿性胰腺炎(AEP)组和急性坏死性胰腺炎(ANP)组.AEP组腹腔注射雨蛙素,ANP组腹腔注射精氨酸,正常组未做任何处理,假手术组腹腔注射等容量生理盐水.测定大鼠血清淀粉酶、抵抗素、TNF-α、IL-1β、C反应蛋白(CRP)水平,记录胰腺/体重比值,观察胰腺组织病理变化,免疫组化法检测胰腺组织抵抗素蛋白表达,实时定量PCR法检测胰腺组织抵抗素mRNA表达.结果 抵抗素主要定位于胰腺腺泡细胞的胞质内.AEP组血清淀粉酶水平、胰腺/体重(g/kg)比值、胰腺组织病理评分、抵抗素mRNA表达量及血清抵抗素、IL.1β、TNF-α 和CRP水平分别为(4377 ±343)U/L、(8.67 ±1.43)、(5.39 ±0.26)、(2.04 ±0.19)、(10.21 ±1.34)ng/ml、(184.18 ±45.24)pg/ml、(194.24 ±44.81)pg/ml、(3586 ±63)ng/ml;ANP组分别为(6750 ±322)U/L、(9.33 ±1.76)、(7.81 ±0.28)、(3.29 ±0.30)、(15.14 ±0.84)ng/ml、(349.31 ±94.54)pg/ml、(315.59 ±37.04)pg/ml、(4345 ±244)ng/ml.两组均显著高于假手术组的(1442 ±183)U/L、(4.34±0.42)、(1.10 ±0.21)、(0.88 ±0.08)、(5.13 ±0.74)ng/ml、(108.74 ±31.03)pg/ml、(106.44 ±21.31)pg/ml和(2895 ±165)ng/ml(P<0.01),且该两组间差异也有统计学意义(P<0.01或P<0.05).血清抵抗素水平与CRP、TNF-±、IL-1β水平及胰腺组织病理评分均呈正相关,相关系数r分别为0.711、0.871、0.794和0.812(P<0.01).结论 抵抗素与AP的发生、发展有关,其检测结果可能是评估AP严重程度的有价值的指标之一.     

曲古菌素A对人胃癌细胞增殖和细胞周期的作用

目的 观察曲古菌素A(TSA)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其可能的机制.方法 TSA干预人胃癌SGC-7901细胞24 h后.采用四甲基偶氮唑盐法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期,实时PCR检测细胞周期素D1和p21 mRNA的表达情况.结果 经TSA干预24 h后,人胃癌SGC-7901细胞增殖受抑制,TSA 0.1、0.5和2.0μmol/L组抑制率分别为3.52%±6.11%、13.29%±4.13%和14.24%±2.80%;同时TSA 0.5μmol/L组(71.26%±0.51%)和TSA 2.0μmol/L组(71.03%±0.12%)的G0/Gl期细胞比例明显高于对照组(51.12%±1.17%);TSA 0.5μmol/L组(13.55%±0.44%)和TSA 2.0 μmol/L组(10.63%±0.63%)的S期细胞比例明显低于对照组(34.60%±0.60%).出现G0/G1细胞周期阻滞.TSA干预后细胞周期相关基因细胞周期素D1 mRNA表达下调和p21 mRNA表达上调.结论 TSA通过调控细胞周期相关基因细胞周期素D1和p21的表达,抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,引起G0/G1期细胞周期阻滞,最终影响肿瘤细胞的生长.     

温和高温下胰腺癌细胞株PANC1对吉西他滨耐药性的影响

目的 观察温和高温下胰腺癌细胞株PANC1对吉西他滨敏感性的影响.方法 应用1 μmol/L吉西他滨处理胰腺癌PANC1细胞1h后,分别置37、42、45℃水浴锅孵育1h,再继续培养0、24、48 h.采用CCK-8法检测细胞增殖,AV/PI染色后上流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 42℃及45℃孵育细胞24、48 h后的细胞增殖均较37℃孵育的细胞显著降低(0.96±0.05、0.88±0.03比1.05±0.02;1.28±0.04、0.94±0.04比1.49±0.09;t值分别为4.367、25.120、3.510、12.101,P值均＜0.05),且45℃孵育的细胞增殖显著低于42℃孵育的细胞(t值分别为3.348、11.732,P值均＜0.05).37、42、45℃孵育的吉西他滨处理的PANC1细胞48 h后的细胞凋亡率分别为(7.125 ±0.064)％、(9.985±0.615)％、( 14.845±1.987)％,3组间的差异均具有统计学意义(t值分别为10.320、9.832、4.575,P值均＜0.05).结论 温和高温可以增加PANC1细胞对吉西他滨的敏感性.     

胰腺癌细胞TM4SF1的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 检测5株人胰腺癌细胞株中TM4SF1 mRNA的表达,探讨TM4SF1基因对癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 采用实时PCR方法检测人胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、HPAC、PANC1、AsPC-1的TM4SF1 mRNA表达,并与人正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）的TM4SF1mRNA表达进行比较.应用RNA干扰方法将靶向TM4SF1的siRNA及阴性对照siRNA瞬时转染MPanc96、MiaPaCa-2细胞.采用MTS法检测转染细胞的增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力.结果 胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、PANC1、AsPC-1、HPAC的TM4SF1 mRNA相对表达量分别为1.205±0.073、1.096±0.260、1.382±0.075、1.374±0.363、0.744±0.096,均显著高于HPDE的0.020±0.003（F =22.26,P＜0.01）.与转染阴性对照siRNA的细胞比较,TM4SF1基因表达沉默的MPanc96、MiaPaCa-2细胞的增殖无显著变化,但细胞的迁移力分别降低（62.5±7.6）％、（72.8±4.0）％,侵袭能力分别下降（69.5±5.7）％、（78.6±6.3）％.结论 TM4SF1在人胰腺癌细胞中高表达,并增强胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力.