曲古菌素A对人胰腺癌PaTu-8988细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察曲古菌素A(tfichostatin A,TSA)对人胰腺癌PaTu-8988细胞增殖及细胞周期的影响.方法 不同浓度(0.1、0.5、2.0 μmol/L)TSA处理人胰腺癌PaTu-8988细胞,并设空白对照组.采用WST-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测细胞周期相关基因p21和cyclin DI mRNA的表达.结果 对照组、TSA 0.1μmol/L、0.5μmol/L和2.0μmol/L组的细胞存活率分别为(100.0±4.2)%、(88.5±4.2)%、(79.7±5.0)%和(64.3±7.2)%,各TSA组均显著低于对照组(P<0.01).TSA 0.1μmoL/L、0.5μmol/L组的细胞以G1期居多,2.0μmol/L组(50.29±7.53)%细胞阻滞在G2/M期.TSA各组p21 mRNA表达值分别为5.29±1.16、7.79±0.41、8.61±0.73,较对照组l,00±0.08显著升高(P<0.01);cyclin DI mRNA表达值分别为1.13±0.12、0.42±0.06、0.19±0.06,较对照组1.00±0.07表达降低(P<0.05).结论 TSA通过上调p21及下调cyclin D1基因的表达,导致细胞周期阻滞.     

二丁基二氯化物尾静脉注射建立大鼠慢性胰腺炎模型

目的探讨经尾静脉注射二丁基二氯化物建立大鼠慢性胰腺炎模型的方法,为慢性胰腺炎纤维化机制研究提供一种合适的动物模型。方法将SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组再分为1,7,14,21,28,60d6个观察点,每个时间点各5只大鼠。实验组大鼠尾静脉注射二丁基二氯化物8mg/kg体重,对照组注射相同剂量的乙醇和甘油溶剂。上述时间点分别处死大鼠,收集血液和胰腺标本。检测血清淀粉酶、脂肪酶、透明质酸浓度。观察胰腺形态,病理改变,胶原染色评价纤维化程度。结果造模后1d胰腺组织水肿,表现为急性中度间质性水肿性胰腺炎;7d炎症加重,表现为腺泡肿胀,散在的腺泡细胞坏死;14d广泛的炎症细胞浸润,伴轻度纤维化;21~28d胶原沉积,纤维化加重,可见大量的纤维结缔组织;60d,胰腺小叶结构破坏,腺泡消失,广泛间质纤维化。结论尾静脉注射二丁基二氯化物是一种简便、有效的大鼠慢性胰腺炎模型制作方法,能为慢性胰腺炎纤维化的研究提供合适的动物模型。     

过氧化物酶增殖物激活受体激动剂(罗格列酮)在大鼠急性坏死性胰腺炎中的防治作用

目的:研究PPAR-γ增殖物激动剂(罗格Yqm)对ANP及合并肺损伤大鼠是否有保护作用.方法:50只健康雄性SD大鼠随机分为5组,正常对照组、假手术组、ANP组、罗格列酮预防组,罗格列酮治疗组.正常对照组,未做任何处理;假手术组,腹腔内注射同等剂量生理盐水;采用大剂量精氨酸腹腔注射诱导ANP模型,预防组于造模前60 min给予罗格列酮10ms/kg,2次,每次间隔30 min,治疗组于造模后60 min给予罗格列酮10 ms/kg,2次,每次间隔30 min.各组于造模后24 h处死大鼠,观察大鼠血清AMY、TNF-α和IL-1β水平变化,同时检测胰腺和肺的组织病理变化和肺组织髓过氧化物酶(MPO)的变化.结果:ANP组AMY、TNF-α、IL-1β和MPO均较对照组和假手术组明显升高(P<0.001);罗格列酮预防和治疗组血清AMY、TNF-α、IL-1β、肺组织中MPO水平较ANP组明显下降,且胰腺和肺的病理损伤也明显减轻(P<0.001)结论:罗格列酮能明显降低ANP的炎症,能明显减少TNF-α、IL-1β的产生,能降低肺组织中MPO含量,对ANP及合并的肺损伤具有保护和治疗作用.     

SHH mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达及意义

目的 检测Sonic Hedgehog(SHH)mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达,探讨SHH mRNA在胰腺癌发生和发展中的作用.方法 收集本实验室保存的6株人胰腺癌细胞系及30例胰腺癌和相应癌旁正常胰腺组织,应用半定量RT-PCR方法检测SHH mRNA的表达.结果 6株人胰腺癌细胞系中均有SHH mRNA高表达;胰腺癌组织SHH mRNA表达率为86.7%,表达强度为0.785±0.070,癌旁正常胰腺组织SHH mRNA表达率为40.0%,表达强度为0.463±0.055,两者具有显著性差异(P＜0.01).SHH mRNA的表达水平与胰腺癌的肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移均无相关性.结论 胰腺癌存在SHH mRNA的高表达,这可能是胰腺癌发生的早期事件.     

健康教育对干预人群健康认知水平的作用

目的 以社区构建糖尿病健康管理技术体系为背景,进一步确立健康教育在该体系中提高糖尿病患者健康认知的重要作用.方法 首先对参加本项目的社区医生进行规范化培训;在天津市6个社区筛查糖尿病高危人群307例,对该人群进行3个月强化及9个月跟踪的健康教育.运用SPSS13.0统计软件包进行数据分析,对主要研究指标进行描述性分析,对于健康教育认知水平得分情况,采取被观察者前后自身对照的方法,进行配对t检验,组间比较运用单因素方差方法.结果 通过系统地健康教育,社区医生健康管理专业水平得到提高;被观察者健康知识认知水平有所提高（教育前平均5.5分,教育后平均12.6分,t=-28.511,P＜0.05）;各年龄组、各文化程度组及各职业组的被观察者对于健康知识的认知水平,均有提高,差别有统计学意义;干预前,不同年龄组（F=4.036,P＜0.05）、不同文化程度组（F=15.27,P＜0.05）及不同职业组（F=9.80,P＜0.05）,组间得分差别均有统计学意义;干预后,不同年龄组组间得分差别无统计学意义（F=0.204,P＞0.05）,不同文化程度组（F=4.71,P＜0.05）及不同职业组（F=4.87,P＜0.05）组间得分差别均有统计学意义.结论 健康教育是糖尿病健康管理技术各项工作的基础,对提升糖尿病高危人群健康知识认知水平有着重要的作用.     

三种胰腺癌细胞株Mesothelin的表达及成瘤速度的比较

目的 比较3种人胰腺癌细胞株在体外和裸鼠体内Mesothelin的表达及裸鼠皮下种植瘤生长速度的差异.方法 培养人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3、PANC1,取对数生长期分别注射于裸鼠左腋窝皮下,每周测量裸鼠皮下种植瘤的长、短径,计算体积,SW1990、BxPC3组裸鼠观察3周,PANC1组裸鼠观察5周;用蛋白质印迹法分别检测3种细胞及裸鼠皮下种植瘤组织中的Mesothelin表达,用免疫组化染色检测3种裸鼠皮下种植瘤组织中Mesothelin表达.结果 人胰腺癌细胞株体外Mesothelin表达的强弱顺序是BxPC3＞ PANC1＞ SW1990,体内种植瘤组织表达的强弱顺序是SW1990＞ BxPC3＞ PANC1.3种人胰腺癌细胞种植于裸鼠皮下的成瘤率均为100％,各组肿瘤的生长速度顺序为SW1990＞ BxPC3＞ PANC1.结论 不同人胰腺癌细胞株Mesothelin的表达量不同,裸鼠皮下种植瘤的生长速度亦不同,两者无相关性.     

三种DNA抽提方法对新鲜血细胞及冻血细胞DNA抽提效能的比较

目的 比较3种血细胞DNA提取方法（进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚抽提方法）对新鲜血细胞及冻血细胞DNA的提取效率及差异。 方法 收集20例胰腺癌患者5 mL外周血标本,经低速离心获得血细胞沉淀后分装,根据保存方式分为新鲜血细胞和冻血细胞。新鲜血细胞不经冻存,在12 h内迅速抽提DNA;冻血细胞在-40℃保存72 h后,室温解冻后抽提DNA。抽提方法分别采用进口试剂盒（Qiagen公司）、国产试剂盒（天根生化科技有限公司）和改良苯酚方法。琼脂糖电泳检测DNA片段的完整性,核酸蛋白检测仪测定DNA纯度和浓度,计算不同抽提方法的DNA得率。 结果 在获得的DNA完整性方面,改良苯酚方法抽提的基因组DNA断裂和降解较少,而进口和国产试剂盒抽提的DNA均有一定程度的降解小片段。在获得DNA的纯度方面,部分冻存血细胞无论应用进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚方法,均表现出一定的污染杂峰。在DNA得率方面,无论新鲜血细胞和冻存血细胞,均是进口试剂盒得率最高,其次为国产试剂盒;冻血细胞的改良苯酚法DNA得率与国产试剂盒相当,新鲜血细胞的改良苯酚法DNA得率最低。在耗时和成本分析中,试剂盒较快但成本较高。 结论 改良苯酚抽提法可获得较进口和国产试剂盒片段更长、更完整的基因组DNA,虽然在得率和耗时方面稍逊色,但其成本较低,可推荐用于大规模、分批次、低成本冻存血细胞的基因组DNA抽提。     

胰腺癌细胞株中NPTX2基因的甲基化情况研究

目的 探讨神经元正五聚蛋白2(NPTX2)基因在胰腺癌中低表达的分子机制.方法 利用甲基化特异性PCR(MSP)方法 检测2例正常胰腺组织及ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、PANC-1、SW1990 等6株胰腺癌细胞株中NFFX2基因的甲基化情况,并对产物进行测序验证.利用DNA甲基化转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-za-dC)处理细胞株ASPC1 及 PANC1,再运用qRT-PCR及SYBR Green荧光掺人甲基化特异性定量PCR法检测NPTX2基凶的mRNA水平及甲基化程度.结果 MSP结果 显示正常胰腺组织中NPTX2基因未发生甲基化,而在6株胰腺癌细胞株中NPTX2基因均有不同程度的甲基化.胰腺癌细胞株ASPC1及PANC-1在5-Aza-dC处理前的甲基化指数(MI)分别为0.964、0.472,mRNA表达的相对值(RQ)分别为5.251和0,而处理后的MI分别为0.531、0.226,RQ分别为5.965和1.076.结论 NPTX2基因启动子的高甲基化是该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一.     

DNMTI siRNA 对人胰腺癌 PaTu8988 细胞周期的调控机制研究

目的 研究沉默DNA甲基转移酶1(DNMTI)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖和细胞周期的影响及可能机制.方法 培养的人胰腺癌PaTu8988细胞分为空白对照组、阴性 siRNA(15nmol/L)组、阴性siRNA(30nmol/L)组、DNMT1 siRNA(15nmol/L)组和DNMT1 siRNA(30nmol/L)组.转染48h后,采用real-time PCR和Western blotting 评价沉默效率和细胞周期调控基因p21的表达情况;WST-8法榆测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期变化.结果 转染48h后,15nmol/L和30nmol/L 浓度的DN-MT1 siRNA均明显抑制了DNMT1 mRNA和蛋白的表达DNMT1 siRNA转染后人胰腺癌PaTu8988细胞增殖受抑制,各组细胞增殖抑制率依次为0%±12.0%、13.7%±8.2%、23.4%±7.3%、17.1%±5.8%和36.9%±14.2%,其中DNMT1 siRNA(30nmol/L)组的细胞增殖抑制率明显高于其他各组(P<0.01);DNMT1 siRNA(15nmol/L)组和DNMT1 siRNA(30nmol/L)组的G2/M期细胞百分率均显著低于其他各组,S期细胞百分率明显高于其他各组(P<0.05);DNMT1 sLRNA(30nmol/L)组细胞周期调控基因p21 mRNA相对表达量明显高于其他各组(P<0.01).结论 DNMT1 siRNA能特异性抑制胰腺癌细胞DNMT1的表达,并抑制细胞增殖、促使细胞出现S期阻滞,其机制可能与上调细胞周期凋控基因p21的表达有关.     

罗格列酮对重症急性胰腺炎合并肺损伤的防治作用

目的 研究抵抗素在过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR-γ)激动剂(罗格列酮)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)及其合并肺损伤防治中的作用及其作用机制.方法 用ELISA法检测大鼠血清淀粉酶(AMY)、抵抗素、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和C.反应蛋白(CRP)的水平变化,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、肺湿/干重比值、胰腺/体质量比值、胰腺和肺组织病理变化;免疫组化检测胰腺组织中抵抗素的表达;实时定量PCR法检测胰腺组织中抵抗素mRNA的水平.结果 罗格列酮预防组和治疗组大鼠血清AMY、抵抗素、TNF-α、IL-1B和CRP水平较SAP组均明显下降(均P＜0.01),预防组和治疗组与对照组相比均有明显升高(均P＜0.01),预防组和治疗组之间相比较有所变化,但两者之间无统计学意义;罗格列酮预防和治疗组胰腺/体质量比、胰腺病理评分、肺组织MPO含量和肺的病理评分较SAP组均明显降低(均P＜0.01);对照组、SAP组、预防组和治疗组大鼠的胰腺组织抵抗素mRNA相对表达量(RQ值)较SAP组明显降低(均P＜0.01),而与对照组相比较均明显升高(P＜0.01),但预防组与治疗组之间差异无统计学意义.结论 罗格列酮对SAP及合并肺损伤有明显的预防和治疗作用.