姜黄素对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的探讨姜黄素（Cur）对表皮生长因子（EGF）诱导的牛晶状体上皮细胞（LEC）增殖的抑制作用及其量效与时效关系。方法MTT测定不同浓度的Cur作用于牛LEC不同时间后细胞增殖的情况，流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Cur作用于牛LEC不同时间后增殖细胞核抗原（PCNA）的表达状况。结果（1）MTT法结果表明，高、中、低不同浓度的Cur作用24h后，其增殖抑制率分别为66．65％、22．43％、8．72％，呈明显的剂量-效应关系，20mg／L的Cur作用6、12、24、48、72h后，其增殖抑制率分别为9．97％、19．81％、22．43％、41．67％、81．59％，呈明显的时间-效应关系。（2）FCM检测表明，Cur对LEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用，也呈明显的时间-效应关系和剂量-效应关系。结论Cur能有效抑制EGF诱导的LEC增殖，可望成为防治后发性白内障的理想药物。     

五味子乙素对晶状体上皮细胞内Ca^2＋ cAMP cGMP的影响

目的：研究旨在探讨五味子乙素对氧化损伤的晶状体上皮细胞内Ca^2＋、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响，从细胞信号转导角度揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制。方法：采用牛晶状体上皮细胞进行晶状体上皮细胞（LEC）原代和传代培养，以含有过氧化氢（H2O2）的培养液孵育LEC复制氧化损伤模型，并加入五味子乙素单体共同孵育。分别采用四甲基偶氮唑兰（MTT）比色测定法观察在不同时间和浓度条件下LEc活性变化，采用荧光分光光度计测定不同时间细胞内钙离子浓度[Ca^2＋]；以及放射免疫分析法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量变化。结果：①H2O2组可引起LEC吸光度值（A）明显下降（P〈0．01），五味子乙素能明显增强氧化损伤的LEC活性，并呈剂量-效应关系和时间-效应关系。②氧化损伤的LEC[Ca^2＋]i升高（P〈0．01）；五味子乙素可以降低由H2O2引起的细胞[Ca^2＋]，的升高，并呈时间一效应关系。③H2O2组cAMP浓废升高；cGMP浓度下降（P〈0．01）；五味子乙素使cAMP水平下调，cGMP水平上升（P〈0．01），并呈时间一效应关系。结论：五味子乙素可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡，其作用机制可能是通过钙信号系统、cAMP信号系统、cGMP信号系统及其相互作用来调节生物学效应。     

密蒙花方对缺氧状态下脐静脉血管内皮细胞VEGF-VEGFR信号转导通路的影响

目的从血管内皮生长因子-血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor,VEGF-VEGFR)信号转导机制方面深入探讨密蒙花方抑制缺氧状态下人血管内皮细胞增殖的作用机制。方法采用人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vasculal endothelial cell,HUVEC)进行体外培养,利用二氯化钴(CoCl2)模拟缺氧状态,同时分别将10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1密蒙花方水提液作用于缺氧状态下的HUVEC24h,采用水溶性四氮唑-8(WST-8)法检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC增殖的影响,采用Westernblot法检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、fms样酪氨酸激酶受体1(fms-like tyrosine kinase-1,Flt-1)、胎肝激酶-1/激酶插入区受体(fetal liver kinase-1/kinase insert domain-containing receptor,Flk-1/KDR)蛋白磷酸化水平的影响。采用免疫组织化学法检测HUVEC内细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)蛋白表达的情况。结果 WST-8法结果显示:缺氧组吸光度值为1.112±0.060,各密蒙花方组吸光度值分别为0.860±0.050、0.567±0.072、0.263±0.057,表明密蒙花方可有效抑制缺氧状态下HUVEC增殖(均为P<0.01)。Western blot结果显示:缺氧组HUVEC内VEGF、Flk-1/KDR蛋白磷酸化水平分别为1.922±0.048、1.341±0.054,较正常组升高,Flt-1蛋白磷酸化水平为1.265±0.065,较正常组降低,密蒙花方可使缺氧状态下HUVEC内VEGF、Flk-1/KDR蛋白磷酸化水平降低,Flt-1蛋白磷酸化水平升高,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。免疫组织化学显示:正常组ICAM-1吸光度值161.416±4.905,缺氧组ICAM-1吸光度值为213.464±10.282,各密蒙花组ICAM-1吸光度值分别为186.841±9.039、171.862±8.202、165.053±6.088。密蒙花方可使缺氧状态下HUVEC内ICAM-1蛋白表达减少。结论下调细胞内VEGF、Flk-1/KDR蛋白磷酸化水平,上调细胞内Flt-1蛋白磷酸化水平,干预细胞内VEGF-VEGFR信号转导通路,是密蒙花方抑制缺氧状态下HUVEC增殖的作用机制之一。     

中药熏蒸疗法联合睑板腺按摩治疗糖尿病性干眼的临床观察

目的运用中药熏蒸法和睑板腺按摩治疗糖尿病性干眼,探讨治疗糖尿病性干眼的新思路、新方法。方法选取2016年中国中医科学院眼科医院眼科门诊糖尿病性干眼患者84例(168眼),随机分为治疗组和对照组,每组42例(84眼)。对照组予人工泪液滴眼,治疗组予中药熏蒸联合睑板腺按摩治疗。观察1个月后症状、泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌试验(SIT)、睑板腺功能变化。结果治疗组显效56眼,有效20眼,无效8眼,有效率90.5%;对照组显效20眼,有效36眼,无效28眼,有效率66.7%,治疗后2组症状评分、BUT、SIT及睑板腺功能比较均有统计学差异(P0.05),治疗组优于对照组。结论中药熏蒸疗法联合睑板腺按摩治疗糖尿病性干眼具有较好的疗效。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞细胞周期的影响

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelialcell,HUVEC)细胞周期的影响。方法体外培养HUVEC,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,采用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测不同浓度密蒙花方水提液(10、20、40 mg/ml)对缺氧状态下HUVEC细胞周期的影响。结果①缺氧组较正常组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,差异具有统计学意义(P<0.01);②各密蒙花方组均较缺氧组G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少(P<0.01),组间具有浓度依赖关系(P<0.01);③密蒙花方组在G0/G1期前还出现了指示细胞凋亡的亚G1期凋亡峰,表明密蒙花方对缺氧状态下的HUVEC具有促凋亡作用。结论密蒙花方抑制HUVEC增殖的作用与阻滞细胞由G1期进入S期,促进细胞凋亡有关。     

高健生辨治糖尿病视网膜病变经验

介绍高健生辨治糖尿病视网膜病变(DR)经验,认为DR是伴随糖尿病气阴两虚向阴阳两虚转化过程中所发生的血行不畅,目络瘀阻,治疗中应把握凉血止血与温阳化气以改善视网膜微循环,从理论和现代药理研究阐述了应用交泰丸治疗DR的机理,并举例予以说明.     

密蒙花方改善早期糖尿病视网膜病变中医症状及其用药安全性的研究

目的评价中药复方密蒙花方对非增殖期糖尿病视网膜病变的中医症状疗效及其用药安全性。方法观察63例患者,中药密蒙花方组31例,对照羟苯磺酸钙组32例,2组患者在均接受糖尿病药物治疗的情况下,服药3个月,治疗前后定期观察患者各项中医症状指标、血液流变性指标,以及肝功能、肾功能等反映用药安全性的指标。结果密蒙花方组患者中医症状改善以及稳定无加重者明显多于对照组(P0.01),总有效率为96.77%。服用密蒙花方患者血流变30/s切变率降低(P0.05),未见肝肾功能下降者。结论中药复方密蒙花方能降低非增殖期糖尿病视网膜病变患者的血液黏度,改善患者全身及局部症状,未见肝肾功能损害,其用药是有效安全的。     

从肺论治视网膜静脉阻塞性黄斑水肿

本文通过分析视网膜静脉阻塞性黄斑水肿（RVO-ME）的病因病机,基于肺的生理功能来论述其产生的机理,依据肺朝百脉,肺主宣发肃降、通调水道,肺与大肠相表里等生理特性,结合气机升降及肺肠相合理论,分析黄斑水肿（ME）与肺的关系,探讨RVO-ME病从肺论治的理论依据。结合临床经验,提出从肺的生理机能论治ME的治疗见解,立足于肺,兼顾其他脏腑,在临证中重视肺与大肠相互为用、相辅相成的关系,肺肠同治,运用宣上通下法治疗,顺应调动两者的气机升降,为RVO-ME临床治疗提供借鉴。     

莪术、三氧化二砷对晶状体上皮细胞增殖及信号转导分子的影响

目的：探讨莪术(RC)、三氧化二砷(As₂O₃)对晶状体上皮细胞(LEC)增殖及细胞信号转导的影响,为防治后发性白内障提供实验依据。方法：采用重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)诱导牛LEC增殖；四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测RC,As₂O₃对LEC增殖的抑制率；流式细胞术(FCM)检测RC,As₂O₃对LEC增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的抑制作用；荧光分光光度法检测LEC内［Ca²⁺］i、放射免疫分析法检测cAMP和cGMP。结果：RC,As₂O₃对rhbFGF诱导的LEC增殖的抑制率增加(P＜0.01)；明显下调rhbFGF诱导增殖的LEC内PCNA蛋白表达(P＜0.01)；使增殖的LEC内［Ca²⁺］i和cAMP显著增高(P＜0.01),cGMP显著降低(P＜0.01)。上述指标均呈剂量-效应关系。结论：RC,As₂O₃能显著抑制LEC增殖；Ca²⁺,cAMP和cGMP细胞信号转导是其抑制LEC增殖的重要分子机制；RC,As₂O₃对防治后发性白内障具有广阔的前景。     

菊花防护晶状体上皮细胞氧化损伤及信号转导机制的实验研究

目的通过菊花影响过氧化氢（H2O2）氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）信号转导的实验研究，探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞和分子机制。方法将传代培养的牛LEC与H2O2共同孵育复制氧化损伤模型，同时加入菊花水提取液孵育后，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性、荧光分光光度法检测LEC内的钙离子浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量，探讨不同浓度菊花及孵育12h、24h和36h的影响。结果①H2O2组LEC活性下降，菊花使氧化损伤的LEC活性显著增高（P〈0．01），呈浓度依赖关系和时间依赖关系。（②H2O2组LEC的[Ca^2＋]i升高，菊花使氧化损伤所致的LEC的[Ca^2＋]i显著降低（P〈0.01），并呈时间-效应关系。③H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降，菊花可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0．01）、cGMP水平显著升高（P〈0．01），也呈时间-效应关系。结论通过[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号转导系统及其相互作用调节生物学效应，可能是菊花防护LEC氧化损伤及减少细胞凋亡的细胞和分子生物学机制。