弓形虫SAG2基因体外扩增、克隆及在耻垢分支杆菌中的表达

目的体外扩增弓形虫RH株表面抗原2(SAG2)基因,并构建大肠杆菌-分支杆菌穿梭质粒ps3000-SAG2,构建重组耻垢分支杆菌,免疫接种小鼠,通过检测免疫小鼠血清中的弓形虫抗体,证明SAG2重组蛋白在耻垢分支杆菌中有表达。方法采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增弓形虫RH株的SAG2基因,克隆入pGEMT载体,然后构建亚克隆ps3000-SAG2大肠杆菌-分支杆菌穿梭质粒,经电转化方法,将SAG2基因的穿梭质粒转化到耻垢分支杆菌(Mycobacterium smegmatismc2155)中,用重组耻垢分支杆菌免疫小鼠,Western-blotting方法检测免疫小鼠血清中的弓形虫抗体。结果成功扩增了弓形虫的SAG2基因;正确构建穿梭质粒ps3000-SAG2,免疫印迹分析,免疫小鼠血清能所识别SAG2重组蛋白。结论耻垢分支杆菌在小鼠体内表达出了重组蛋白SAG2,具有抗原性,刺激小鼠机体产生出了抗弓形虫的抗体,为下一步弓形虫重组BCG(Bacilli Calmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础。     

2型糖尿病影响因素非条件Logistic回归分析

目的 探讨深圳市40岁以上人群2型糖尿病的危险因素，为制定相关干预政策及措施提供依据。方法 采用病例对照研究方法，对研究因素进行单因素及多因素非条件Logistic回归分析。结果 糖尿病家族史、高血压、高血脂、工作压力是2型糖尿病的危险因素；而文化程度、运动锻炼是保护因素。结论 在社区人群中，培养健康的生活方式，早期、及时地控制血压、血脂和体重是预防2型糖尿病发生的重要措施。     

2型糖尿病易感基因研究进展

2型糖尿病（DM）属于复杂遗传病，即多种基因和环境因素共同参与了DM的致病过程。环境因素参与发病的提示在于同一种族在不同生存环境中2型DM发病危险性有明显差异；而家族聚集性、同卵双生子发病的较高一致性以及在某些种族人群（如Pima印地安人、太平洋岛国居民、墨西哥裔美国人）中的高发率均强烈提示2型DM具有明显的遗传易感性，遗传因素在2型DM的发生和发展中起着重要作用，尽管目前对大多数普通型2型DM来说，这种作用尚不清楚。揭示2型DM的遗传基础，不仅可以从分子水平上提高对疾病发病机制的认识，并且对2型DM的诊断、预防和治疗具有十分重要的意义。笔者就当前2型DM易感基因的研究及其进展作一综述。     

SARS冠状病毒S蛋白部分序列2的克隆与表达

目的 构建SARS冠状病毒棘突蛋白部分序列2(S2)的原核表达质粒，分析其在大肠杆菌中的表达状况。方法 采用逆转录聚合酶链式反应技术从SARS冠状病毒基因组中扩增出编码S蛋白的第2170到2814位碱基的基因片段，克隆至pMD18-T载体，PCR筛选阳性克隆并测序。用限制性内切酶消化后，目的片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2，转化大肠杆菌．JM109，PCR和双酶切鉴定转化菌落。将阳性菌落经IPTG诱导，SDS—PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达。结果 RT—PCR扩增出S2特异片段，经测序与GenBank比对存在1处碱基突变。S2基因片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2构建成重组表达质粒，并在JM109中表达了S2融合蛋白。结论 成功构建了SARS冠状病毒S2的重组表达质粒，并在大肠杆菌中表达了S2融合蛋白。     

弓形虫GRA4和SAG2基因重组BCG疫苗免疫保护性的比较研究

目的 比较弓形虫致密颗粒蛋白4（GRA4）基因和表面抗原2（SAG2）基因的重组卡介苗（BCG）对小鼠的免疫保护效果。 方法 108只SPF级雌性BALB/c小鼠随机分成6组：PBS组、BCG空白菌组、BCG?鄄空白载体组、BCG?鄄SAG2组、BCG-GRA4组和BCG-SAG2+GRA4组,每组18只。每鼠分别注射对应液体/疫苗100 μl,共2次,间隔2周。接种前尾静脉采血,接种后4、6、8周每组分别剖杀3只,取脾和眼眶血检测细胞因子、IgG与IgM抗体,T淋巴细胞亚群计数,淋巴细胞转化率等。末次免疫后3周,每组剩余小鼠分别腹腔接种RH株弓形虫速殖子50个进行攻击感染,观察各组小鼠存活时间。 结果 弓形虫SAG2和GRA4重组BCG疫苗均能诱导小鼠产生免疫应答。第4周时,BCG-GRA4+SAG2免疫组小鼠的CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺ 的比值最高,为14.06%±1.17%。第6周时,BCG-GRA4+SAG2免疫组小鼠的IgG抗体水平最高, 为0.18±0.02。第8周时,BCG-SAG2免疫组小鼠的IgM抗体水平最高,为0.82±0.05;弓形虫速殖子攻击后,BCG-SAG2组平均存活8.61 d,PBS对照组平均存活7.33 d,3个免疫组小鼠比其他3组的平均存活时间长1 d。 结论 弓形虫重组BCG疫苗具有一定的免疫保护性。