PCR-DGGE技术检测β珠蛋白外显子Ⅰ及相邻片段突变的研究

目的 建立用于分析β珠蛋白基因外显子1及相邻片段突变的变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术。方法 应用巢式PCR扩增20例β地贫病人的β珠蛋白基因外显1及相邻片段，通过垂直DGGE及time—travel DGGE确定并优化平行DGGE条件，然后对样本进行平行DGGE分析。结果 20例样本β珠蛋白外显子1及相邻片段上的三种突变均能被检出。结论 所建立PCR—DCGE技术可用于准确检测β珠蛋白基因外显子1及相邻片段突变。     

恶性疟MSP-2、CSP多价DNA疫苗免疫小鼠应答类型研究

目的：探讨恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面蛋白-2(MPS-2)和环子孢子蛋白(CSP)组成的DNA多价疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答的特性及抗感染的保护性免疫机制。方法：将重组真核表达质粒pBK/CSP和pBK/MSP-2经骨骼肌注射BALB/c小鼠，小鼠经多价疫苗免疫8wk后，用流式细胞仪分析脾脏T淋巴细胞的分化，并体外培养脾脏细胞，用夹心ELISA法测定IFN-γ和IL-2的产生；用血清学方法测定免疫鼠IgG抗体的动态变化。结果：与对照组相比，疫苗组CD^4 cd^8 淋巴细胞有显的增高，体外培养的脾脏细胞IFN-γ有一个高浓度的分泌。同时，免疫鼠血清对疟原虫抗原都表现了一个较高水平的IgG类抗体反应。结论：恶性疟原虫FCC-1/HN，pBK/MSP-2和pBK/CSP多价疫苗诱导了一个以细胞免疫为主的免疫应答类型。     

吡喹酮治疗链状带绦虫病和缩小膜壳绦虫病初步临床报告

我们于1980年9月在新洲县人民医院配合下,治疗了3例链状带绦虫(Taenia Solium亦名猪肉绦虫)病患者和1名缩小膜壳绦虫(Hymenolepis diminuta亦名长膜壳绦虫)病患者,现报导如下: 朱××, 5岁;蔡××,16岁;程××,11岁。入院后再次进行了粪检,详细询问病史和体检。如既往病史,有无皮下结节,神智状态及神经反射,营养和发育情况;体温、心律、心率、肺、血压、心电图、肝功能、血常规、尿常规均进行了检查。3例患者所检查的各项指标均属正常。治疗药物吡喹酮,为湖北省医药工业研究所提供,批号800909,每片含量为100毫克。患者在服药前一天的晚餐,只进软食,翌晨6时空腹服吡喹酮,剂量按20毫克/公斤     

恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面抗原2(MSA-2)基因在卡介苗BCG中的表达

目的 :裂殖子表面抗原 2基因 (Merozoitesurfaceantigen 2 ,MSA2 )是恶性疟原虫的一种保护性抗原 ,为研究其重组BCG疫苗的保护作用 ,首先探讨携带有恶性疟原虫FCC 1 HN株MSA2基因的重组分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG MSA2在卡介苗 (BacillusCalmetteGuerin ,BCG)中的表达情况。方法 :采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG MSA2导入BCG中 ,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组BCG培养于Middlebrook 7H9Broth (M7H9)培养基 ,并添加 10 %M7H9EnrichmentADC和 0 0 5 %Tween80 ,4周后于 4 5℃进行诱导表达 ,表达产物进行十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS PAGE)及免疫印迹 (Western blot)分析。结果 :SDS PAGE及Western blot分析结果均显示在约 31kDa的位置上可见明显的蛋白条带 ,并与MSA2基因编码序列推断的分子量相符。结论 :恶性疟原虫裂殖子表面抗原 2可在BCG中表达 ,这些结果将为恶性疟原虫多价BCG疫苗的研制提供科学依据     

恶性疟原虫FCC—1／HN株环子孢子蛋白基因在耻垢分枝杆菌M.Smegmatis mc^2155中的表达

目的 探讨恶性疟原虫环子孢子蛋白基因在耻垢分枝杆菌M.Smegmatis mc^2155中的表达。方法 采用电穿孔转化法将重组大肠杆菌－分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG/CSP导入耻垢分枝杆菌M.Smegmatis mc^2155,重组分枝杆菌培养48－72h后于45℃诱导表达30min,表达产物进行SDS-PAGE芨免疫印迹分析。结果 SDS－PAGE及免疫印迹分析结果均显示在约42kDa的位置上可见明显的蛋白条带。结论 恶性疟原虫环子孢子蛋白可在分枝杆菌中表达。     

弓形虫表面抗原SAG2基因片段的克隆与原核表达

目的　扩增弓形虫主要表面抗原 (SAG2 )编码基因片段并进行重组表达。方法　设计合成 1对引物 ,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列 ,以低熔点琼脂糖回收纯化 ,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后 ,再插入表达载体 pGEX - 4T - 2 ,经PCR和双酶切筛选 ,测序验证后 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并用SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果　从弓形虫核酸提取物中扩增出约 477bp的SAG2基因 ,构建成功了重组质粒 pGEX - 4T - 2 -SAG2 ;SAG2基因在大肠杆菌中得到高效表达。SDS -PAGE电泳 pGEX - 4T - 2 -SAG2的融合蛋白条带的分子量约为 42kD ,Westen -blot显示融合蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论　GST融合表达载体的构建和SAG2基因片段成功表达 ,为进一步为SAG2重组疫苗及重组诊断抗原的研制奠定了基础。