小鼠胚胎干细胞-聚酯复合物在体多分化特性的初步实验观察

目的初步探讨胚胎干细胞聚酯复合物在体多分化特性。方法取BALBc孕鼠3.5d的囊胚,制备内细胞团(ICM)细胞用鼠胚成纤维细胞(MEF)饲养层及条件培养液培养,挑选胚胎干细胞(ES)集落并扩增传代。应用先进快速成形技术(RP)制备聚乳酸聚羟乙酸(PLGA)人工聚酯载体,扫描电镜(SEM)观察其超微结构,并对3mm×3mm×3mm大小的粒度均匀的颗粒型聚酯载体进行Ⅰ型胶原表面修饰。取10只裸鼠,于裸鼠体部左侧皮下植入2粒Ⅰ型胶原表面修饰的颗粒型PLGA聚酯载体并同时复合ES细胞(1×107个)作为实验侧;于裸鼠体部右侧对应部位皮下仅植入2粒Ⅰ型胶原表面修饰的颗粒型PLGA聚酯载体作为对照侧,术后30d取材组织学染色对比观察。结果制备和筛选出生长旺盛、传代稳定的ES细胞。先进RP制备的PLGA聚酯载体具有规则的空间网状支架结构、相互贯通的孔隙及材料表面微孔特征。组织学发现,实验侧植入体内30d,能形成包含各胚层细胞成份的“畸胎瘤”样组织,并可观察到较为典型的软骨细胞、软骨基质以及新生骨,且在多分化新生组织形成的同时载体材料逐渐降解;对照侧术后30d未见多分化新生组织形成,并仍有相对较多的聚酯载体有待降解。实验侧的多分化新生组织形成能力、生物相容性以及聚酯载体的生物可降解性均明显优于对照侧(P<0.01)。结论先进RP技术结合载体材料表面修饰的新工艺,对ES细胞全能分化特性无明显不利影响,将有望适用于以ES细胞为种子细胞的骨、软骨组织工程构建。     

小鼠抗感染重组合异种骨的成骨活性

小鼠抗感染重组合异种骨的成骨活性李桓毅，胡蕴玉，金格勒，吕荣，李雪冰（第四军医大学西京医院骨科研究所，西安７１００３３）关键词庆大霉素，骨移植骨生成中图号Ｒ６８７．３４开放性骨折常伴有骨缺损，而污染伤口禁忌植骨，这一问题涉及的方面较多，本实验仅对复合...     

感觉小体退变过程—动物实验研究

周围神经损伤治疗效果愈早修复愈佳，但多年来由于伤情不同而存在着不同观点。我们用恒猴作实验，以明确其周围神经损伤如不修复，感觉小体何时完成退变过程？实验选用成年恒猴５只，用猴的双手环指作两侧指神经切断不修复，分别于术后８、１２、３０周在光镜下观察感觉小体退变情况。结果如下：８周后感觉小体萎缩，游离神经末梢有断裂现象；第１２周感觉小体萎缩和断裂更加明显；第３０周光镜只能看到残存的感觉小体的痕迹。说明在     

Effect of type I collagen on the adhesion, proliferation, and osteoblastic gene expression of bone marrow-derived mesenchymal stem cells

tificially synthesizedpolymericproductssuchaspolylactide (PLA ) ,polyglycolide (PGA ) ,andtheircopolymersarefrequently usedtissueengineeringmatrixsubstitutivematerials .Unfortunately ,theirapplicationisseriouslyrestrictedfortheirpoorhydrophilicproperty ,weakcelladsorptionforces ,anddifficultyininteractionwithcells .1,2 ThisstudyintendstoevaluatethecapacityofcollagenIinpromotingadhesion ,proliferation ,anddifferentiationofMSCs ,tolayanexperimentalbasisforbonytissueengineering .METHODSPrep…     

注射型骨修复材料诱导成骨活性的研究

目的:了解以纤维蛋白胶(Fibrinsealant,FS)为载体的注射型骨修复材料犤骨形态发生蛋白(BMP)犦异位诱导成骨的作用。方法:实验分组为:实验组b(FS+bBMP)、对照组b(bBMP)、实验组r(FS+rhBMP-2)、对照组r(rhBMP)、对照组FS(FS)及空白对照组。将各组材料注射或植入小鼠肌袋内,采用用放射学、形态学、碱性磷酸酶(ALP)检测等方法对其成骨效应进行研究。结果:在以bBMP为成骨因子的实验区中,实验组b具有高效的骨诱导活性,其成骨量显著高于对照组b、对照组FS及空白对照组(P<0.01);在以rhBMP-2为成骨因子的实验区中,实验组r同样具有高效的骨诱导活性,其成骨量也显著高于对照组r、对照组FS及空白对照组(P<0.01)。结论:以FS为载体复合BMP的注射型骨修复材料具有高效的骨诱导活性。     

碱性成纤维细胞生长因子与重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨能力的量效关系

目的对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)诱导成骨能力的量效关系进行研究.方法280只BALB/c小鼠采用掷硬币方法随机分为8组,每组35只,实验组rhBMP-2的剂量均为0.5 mg,bFGF的剂量分别为0,2,10,40,80,300,500活性单位(IU);设立单纯牛松质骨载体为对照组.按实验设计,分别将rhBMP-2混悬液及bFGF-PVP溶液与牛松质骨载体充分混匀,负压下真空抽吸,冻干.将复合植骨材料植入小鼠右侧股部肌袋内,各组分别于术后3,5,7,9,14,21 d共6个时间点取材,进行组织学、X线分析以及钙含量测定,观察各组的诱导成骨情况.结果①bFGF剂量为10～80IU时,间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成均早于其他各组,成骨量多于其他各组,组织钙含量明显高于其他各组(t=4.44,P＜0.05),提示此剂量bFGF使rhBMP-2的诱导成骨能力明显增强.②bFGF剂量为0,2,300 IU时,各组在间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成以及组织钙含量方面差异均无显著性意义(t=0.73,P＜0.05),提示此剂量bFGF对rhBMP-2的诱导成骨能力无明显影响.③bFGF剂量为500 IU时,术后21d,仅1例标本可见散在的极少量新骨形成,其组织钙含量明显低于其他各组(t=6.15,P＜0.05),提示此剂量bFGF明显抑制了rhBMP-2的诱导成骨能力.④术后21 d,单纯松质骨载体组未见新骨形成.结论bFGF与rhBMP-2诱导成骨能力存在着量效关系.     

快速成形的多孔材料作为骨髓基质细胞支架材料的生物相容性特征

目的:采用体外细胞培养法对聚乳酸/聚羟乙酸共聚物/磷酸三钙(Poly-lactic-co-glycolicacidTri-calciumphosphate,PLGA/TCP)和聚乳酸/聚羟乙酸共聚物(PLGA)的生物相容性进行研究,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。方法:将传代培养的新西兰兔骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)分别接种于快速成形的三维支架材料PLGA和PLGA/TCP,单纯接种细胞作为对照组,于接种后不同时间通过倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长、黏附情况,并绘制细胞生长曲线观察细胞增殖情况。结果:骨髓基质细胞可以在PLGA/TCP和PLGA支架材料表面黏附、生长并连接成片,分泌细胞外基质,对照组与实验组、各实验组之间生长曲线相近,统计学分析无显著性差异。结论:PLGA/TCP和PLGA对兔骨髓基质细胞的形态学、细胞生长增殖等均无影响,具有良好的生物相容性,可作为组织工程的支架材料而安全应用。     

聚酯/磷酸三钙人工骨载体的表面修饰及不同骨移植材料的比较研究

采用热致分相法(TIPS)与熔铸颗粒沥取法(SCPL),实验室条件下制备适宜组分配比(7:3)的聚乳酸-聚羟乙酸/磷酸三钙[PLGA/TCP]复合人工骨载体[PLGA/TCP(L)];另外采用先进快速成形技术(RP)制备相同组分配比(7:3)的PLGA/TCP(RP)复合材料.扫描电镜(SEM)观察人工骨载体的超微结构,并用I型胶原(Col I)对载体材料进行表面修饰.进而复合诱骨生长因子-牛骨形态发生蛋白(bBMP)以制备出仿生活性人工骨.将PLGA/TCP(L)、PLGA/TCP(RP)、牛松质骨脱钙骨基质(DBM)、仿生活性人工骨及OsteoSet(R)人工骨进行多种比较.结果发现,先进RP技术制备的PLGA/TCP(RP)大段人工骨载体结构明显优于实验室常规方法所制备的PLGA/TCP(L)载体.PLGA/TCP(L)载体、DBM、PLGA/TCP(RP)载体及OsteoSet(R)人工骨的孔隙率分别为21.5%、70.4%、58.6%和0%,其中DBM和PLGA/TCP(RP)载体的孔隙率最高(P＜0.01).此外,RP制备的PLGA/TCP(RP)人工骨载体孔径大(350 μm),并与天然DBM的孔径最为接近.PLGA/TCP(L)、PLGA/TCP(RP)人工骨载体经I型胶原表面修饰后[PLGA/TCP(L)-Col I、PLGA/TCP(RP)-Col I],明显改善其对bBMP的亲和力,人工骨载体表面及孔隙内对bBMP的复合能力明显增强,仿生活性人工骨[PLGA/TCP(L)-Col I-bBMP、PLGA/TCP(RP)-Col I-bBMP]的制备效率亦显著提高.其中采用先进RP技术结合载体材料表面修饰新工艺研制的PLGA/TCP(RP)-Col I-bBMP仿生活性人工骨具有与天然骨最接近的空间三维结构,并含有关键的成骨活性因子,因此具有更为广阔的研究与应用前景.     

骨折愈合过程中骨形态发生蛋白1,2,3基因的动态表达

目的　通过观察骨折愈合过程中三种 BMP(1,2 ,3)基因表达量的动态变化 ,明确此三种 BMP是否参与正常骨折愈合过程 ,以及作用时限 .方法　将 48只新西兰兔左前肢桡骨中段制成骨折模型 ,术后随机分为 6个时间组 ,分别于术后1,2 ,3,4,6 ,8wk在骨折处取材 ,分别用 BMP1,2 ,3c DNA作探针进行打点杂交 ,检测 BMP(1,2 ,3) m RNA的表达水平 ,对侧正常桡骨中段作为对照 .结果　 BMP 1,2 ,3三种基因在骨折愈合早期的表达均明显增高 ,峰值位于术后 2 wk,表达量分别为 191,2 85 ,2 13ng· g- 1 ,而正常对照侧分别为 32 ,6 5 ,6 0 ng· g- 1 .结论　 BMP 1,2 ,3均参与骨折的修复过程 ,主要在愈合早期发挥作用