腺病毒介导的LacZ基因在培养许旺细胞中的表达

目的 观察腺病毒介导的LacZ基因在培养许旺细胞中的表达。方法 用报告基因LacZ重组腺病毒感染原代培养的许旺细胞，X-gal组织化学染色检测LacZ基因的表达。结果 用LacZ重组腺病毒感染培养的许旺细胞时，有较好的量效关系和时效关系。当感染增殖率分别为200、100时，24、48h后接近100％的许旺细胞被感染。而且感染后许旺细胞的形态无明显异常，增殖能力也没有受到影响。结论 腺病毒介导的LacZ基因可转入体外培养的许旺细胞并高效表达，同时许旺细胞的生长特性并不受影响，为腺病毒介导神经营养因子等基因治疗促进外周周围神经损伤再生奠定了基础。     

腺病毒介导的LacZ基因在大鼠坐骨神经的表达

目的 :观察腺病毒介导的LacZ基因在大鼠坐骨神经雪旺细胞 (Schwanncells ,SCs)的表达。方法 :大鼠坐骨神经内直接注射报告基因LacZ重组腺病毒 (Ad LacZ) ,X gal组织化学染色检测LacZ基因的表达 ,采用LEICAM 5 5 0型图像分析仪对坐骨神经切片X gal染色强弱进行定量评价。结果 :将滴度为 1× 10 8PFU /ml的Ad LacZ病毒液 10 μl注入坐骨神经 2d后即可检测到LacZ的表达 ,7～ 14d表达显著增加 (与 2d组比较P <0 .0 1) ,7d组与 14d组表达量无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,2 8d时SCs蓝染又减弱 (与 7d组和 14d组比较P <0 .0 1)。注射生理盐水的对照组X gal染色阴性。结论 :腺病毒介导的LacZ基因可转入活体动物坐骨神经内并高效表达 ,表明腺病毒介导神经营养因子等基因治疗有促进周围神经损伤再生的作用。     

Anti-infective reconstituted bone xenograft used for primary bone grafting to repair contaminated defect in the radius in dogs

Objective: To investigate the effect of anti-infective reconstituted bone xenograft as a primary graft to repair a segmental with severe contamination. Methods: A canine model of contaminated defect of 1.5 cm in size in the radius was used, in which antiinfective reconstituted bone xenograft or reconstituted bone xenograft was implanted as a primary graft followed by internal fixation. The effectiveness of the two grafting materials in repairing a contaminated segmental defect was compared. Resuits: The animals which had received implant of anti-infective reconstituted bone xenograft should largely healed defects 6 months after operation while the defects implanted wit]h reconstituted bone xenograft remained unrepaired witla bone infection. Conclusions: Besides its strong osteoinductive and osteoconductive activity, anti-infective reconstituted bone xenograft is highly antibacterial and can be used as a primary graft to repair the severely contaminated segmental defect.     

复合rhBMP_2的异种骨(rhBMP_2/BCB)与骨膜联合移植修复兔桡骨节段性骨缺损

目的　探讨复合基因重组人ＢＭＰ２ 的异种骨（ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ） 移植及其与骨膜联合移植修复节段性骨缺损的效果。方法　将ｒｈＢＭＰ２ 与去抗原牛松质骨载体（ＢＣＢ）复合,制成ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ;并采用兔桡骨干１．５ ｃｍ 缺损的动物模型,通过Ｘ线、生物力学、骨密度、组织学等检测手段,比较单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植、ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 与带血运骨膜联合移植及ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 与游离骨膜联合移植修复节段性骨缺损的疗效。结果　（１） 单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 移植,可在１６ 周使节段性骨缺损基本修复,其修复机制与过程和重组异种骨相似;（２）ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与带血运骨膜联合移植,８ 周即可修复骨缺损,其修复机制与骨折修复相仿,包括膜内成骨和软骨成骨两种机制;（３）ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与游离骨膜联合移植,在骨缺损修复早期（ ≤１２ 周） ,其成骨速度及成骨质与量均优于单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植,约在１２ 周使骨缺损基本修复。结论　上述三种方法均可有效地修复节段性骨缺损,但以ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与带血运骨膜联合移植较为理想。该方法同时具有良好的骨生成、骨传导和骨诱导作用。     

血管组织床对自体移植静脉影响的实验研究

旨在探索血管组织床对自体移植静脉的影响。选１１只健康家犬，将其双侧股静脉倒置移植于同侧股动脉之间，行三定点褥式连续端端吻合，确认血管通畅后，分别置于健康肌肉内及皮下，观察两种条件下移植静脉的通畅情况，应用微机图像分析技术测量内膜增生程度及血管壁显微结构成分相对含量的变化。结果表明：①皮下组术后１周１条静脉发生假性动脉瘤，术后１６周２条静脉栓塞，肌肉组无合并症发生；②皮下组术后４周～１６周内膜增生趋势明显（Ｐ＜０．０５）；③移植血管壁显微结构成分相对含量两组无显著差异（Ｐ＞０．０５）。认为，皮下覆盖可能是导致移植早期血管过度扩张及移植后期血管内膜过度增生的重要因素。提示在临床上，应尽可能应用健康肌肉覆盖移植血管。     

大鼠脊髓损伤局部空洞瘢痕的量化分析

目的: 对脊髓损伤后形成的空洞和瘢痕进行量化分析。方法: 成年雄性SD大鼠 32只, 随机分为术后7、14、21和 28d4组。切断大鼠T9 平面脊髓制备脊髓完全横断损伤模型, 术后相应时间灌注取材, 切片行HE、天狼猩红染色以及GFAP (胶质细胞酸性蛋白 )、NF (神经丝蛋白 ) 免疫荧光染色。计算机图像分析测算脑膜瘢痕面积, 胶质瘢痕面积, 空洞直径和脊髓残端间距。结果: 脑膜瘢痕面积为 0. 052mm2, 胶质瘢痕面积为 0 .026mm2。脑膜瘢痕面积接近胶质瘢痕的 2倍, 差异显著 (P<0. 05)。脑膜瘢痕和胶质瘢痕主要成分均为Ⅰ型胶原。在胶质瘢痕内可见NF阳性标记的再生神经纤维, 而在脑膜瘢痕中却全然没有, NF标记的再生神经纤维无法逾越脑膜瘢痕。结论:空洞和瘢痕形成了再生神经纤维无法逾越的巨大障碍, 脑膜瘢痕要甚于胶质瘢痕。在脊髓损伤修复中移植桥接脊髓就成为必须。     

组织工程骨软骨复合物的构建与形态学观察

目的探讨采用组织工程技术构建骨软骨复合物的可行性。方法将骨髓基质细胞(BMSCs)成诱导软骨后接种于快速成形的三维支架材料聚乳酸／聚羟乙酸共聚物(PLGA)构建组织工程软骨，经成骨诱导的BMSCs接种于聚乳酸／聚羟乙酸共聚物／磷酸三钙(PLGA／TCP)构建组织工程骨，在体外分别培养2周后，将两种工程化组织及两者以无损伤线缝合形成的组织工程骨软复合体分别植入自体股部肌袋，术后8周取材，行组织学观察。结果术后组织学观察表明。组织工程软骨在体内可形成软骨组织组织工程骨在体内可形成骨组织，两者的复合体在体内可形成骨软骨复合物。结论以骨髓基质细胞为种子细胞、以快速成形的生物降解材料为支架体外构建的组织工程骨软骨复合物，可在体内形成骨软骨组织，有望用于骨软骨缺损的修复。     

显微CT与组织切片技术在骨形态计量研究中的比较

[目的]通过比较显微CT技术与组织切片技术在骨形态计量分析中的差异,探讨显微CT在骨形态三维结构研究方面的技术优势.[方法]分别应用显微CT和组织切片技术分析不同类型的骨组织标本,并从标本处理、表达形式与测试指标等方面比较两者的差异.[结果]显微CT在反映骨组织三维结构特征和对骨组织"量"与"质"变化的精确测量方面明显优于组织切片技术;而组织切片技术对反映标本局部的细胞形态和生长发育变化等方面则更具优势.[结论]显微CT技术在标本处理、表达形式两方面均提供了全新的测试手段,通过结合组织切片技术能够更加理想地反映骨组织形态和结构的特点.     

Micro-CT evaluation and histological analysis of screw-bone interface of expansive pedicle screw in osteoporotic sheep

Objective： To investigate the properties of screwbone interface of expansive pedicle screw （EPS） in osteoporotic sheep by micro-CT and histological observation.
Methods： Six female sheep with bilateral ovariectomyinduced osteoporosis were employed in this experiment. After EPS insertion in each femoral condyle, the sheep were randomly divided into two groups： 3 sheep were bred for 3 months （Group A）, while the other 3 were bred for 6 months （Group B）. After the animals being killed, the femoral condyles with EPS were obtained, which were three-dimensionally-imaged and reconstructed by micro-CT. Histological evalu-ation was made thereafter.
Results： The trabecular microstructure was denser at the screw-bone interface than in the distant parts in expan-sive section, especially within the spiral marking. In the non- expansive section, however, there was no significant differ-ence between the interface and the distant parts. The regions of interest （ROI） adjacent to EPS were reconstructed and analyzed by micro-CT with the same thresholds. The three-dimensional （3-D） parameters, including tissue min- eral density （TMD）, bone volume fraction （BVF, BV/TV）, bone surface/bone volume （BS/BV） ratio, trabecular thickness （Tb.Th）, and trabecular separation （Tb.Sp）, were sig- nificantly better in expansive sections than non-expan-sive sections （P 〈 0.05）. Histologically, newly-formed bony trabeculae crawled along the expansive fissures and into the center of EPS. The newly-formed bones, as well as the bones at the bone-screw interface, closely contacted with the EPS and constructed four compartments. Conclusions： The findings of the current study, based on micro-CT and histological evaluation, suggest that EPS can significantly provide stabilization in osteoporotic cancellous bones.     

雌激素替代治疗对去卵巢骨质疏松大鼠腺垂体滤泡星形细胞中S-100、Cx43蛋白表达的影响

目的研究雌激素替代治疗(estrogen replacement therapy,ERT)对去卵巢骨质疏松(ovariectomized osteoporosis,OVX-OP)大鼠腺垂体滤泡星形(folliculo-stellate,FS)细胞中神经组织蛋白S-100、间隙连接蛋白Cx43表达的影响.方法采用10月龄、未孕产SD雌性大鼠60只,随机分为卵巢切除组(OVX)、假性手术对照组(Sham)和卵巢切除+雌激素替代治疗组(OVX+ERT),每组20只.于术后6周末应用双能X线骨吸收测量法(DEXA)检测Sham组和OVX组大鼠L4-6骨密度(bone min-eral density,BMD).OVX+ERT组大鼠于OVX术后第7～12周按照每周1 mg/kg体重的剂量给予尼尔雌醇,于术后12周末检测大鼠L4-6BMD.制备各组大鼠腺垂体标本切片,应用间接免疫荧光法结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)定位和定量分析腺垂体FS细胞中S-100、Cx43的表达.结果术后6周末Sham组L4-6BMD(0.211±0.013)g/cm2及术后12周末的OVX+ERT组L4-6 BMD(0.204±0.010)g/cm2均明显高于术后6周末OVX组L4-6 BMD(0.193±0.006)g/cm2(P＜0.01).S-100蛋白定位于FS细胞的胞浆中,Sham组、OVX组和OVX+ERT组中S-100蛋白表达的阳性率分别为80%、85%和85c%,差异无显著性意义(P＞0.05).Cx43蛋白免疫荧光阳性信号定位于相邻的FS细胞以及相邻的FS细胞与内分泌细胞的胞浆中和(或)胞膜上.Sham组、OVX组和OVX+ERT组中Cx43蛋白表达的阳性率分别是90%、25%和75%,Sham组和OVX+ERT组Cx43蛋白表达的阳性率均显著高于OVX组(P＜0.005).结论SD大鼠OVX术后6周出现骨质疏松;尼尔雌醇能早期有效地防止OVX大鼠腰椎骨量的丢失.三组间S-100表达的稳定性证实FS细胞数量与OVX-OP的发生及ERT的治疗效应无明显相关;而OVX组及OVX+ERT组中FS细胞上Cx43蛋白表达的下降和相对增强则分别与雌激素缺乏导致骨质疏松发生及骨质疏松ERT的治疗效应密切相关.