单眼视觉剥夺鸽不同脑区tubulin和chs rex b 同源基因的差异表达

目的：检测tubulin与chs rex b同源基因在左眼视损毁后鸽脑不同脑区的差异表达,方法：以经消减抑制杂交（suppression subtraction hybridization SSH)方法获得的鸽脑差异表达基因的表达序列标签（expressed sequence tag,EST)为探针,用放射性同位素对其进行标记,藉Northern杂交法分析其mRNA在不同脑区的丰度,结果;与人tubulin有高度同源性及与鸡的chs-rex-b m,RNA有高度同源性的基因 左,右视盖的丰度明显高于左,右前脑,结论：tubulin与rex b同源基因在鸽脑视觉相关脑区的发育过程中可能具有某此独特作用。     

微小RNA在视网膜中的表达及其与视网膜疾病的关系

微小RNA(microRNA.miRNAs)是一类调控基因表达的非编码小RNA.miRNA的表达具有组织特异性,并参与细胞生长、发育、分化、增生以及凋亡等过程.近年来,人们也发现miRNA在视网膜不同细胞中呈特异表达,尽管尚无直接证据,但这些差异表达的miRNA可能与视网膜疾病如视网膜色素变性以及糖尿病视网膜病变的发生发展有着密切的联系.本文对miRNA在视网膜中的特异表达以及miRNA在视网膜疾病中的作用等研究现状进行总结,同时对miRNA在视网膜相关疾病的治疗方面的前景进行探讨.     

Aβ1-40诱导大鼠脑皮质与海马差异表达基因的克隆与鉴定

我们于 2 0 0 1年 3～ 8月以 β 淀粉样蛋白1 4 0 (ｂｅｔａ ａｍｙｌｏｉｄｐｒｏｔｅｉｎ ,Ａβ1 4 0 )注入脑室建立大鼠ＡＤ模型 ,采用抑制消减杂交 (ＳＳＨ)技术构建Ａβ诱导大鼠皮质与海马差异表达的基因文库 ,旨在探讨Ａβ1 4 0 神经元毒性的分子机制。　　一、材料与方法　　 1 ＡＤ模型的建立 :清洁级成年雄性ＳＤ大鼠 2 0只 ,3月龄 ,体重 3 0 0 ｇ左右 ,购自上海ＢＫ实验动物中心 ,分为 2组。采用立体定向仪 (江湾Ⅱ )向实验组大鼠第 3脑室注射Ａβ1 4 0 (Ｓｉｇｍａ美国 ) 10 μｌ(1μｇ/ μｌ) ,脑室立体定向坐标为 :ＡＰ = 1ｍ…     

胰高血糖素样多肽1抑制高糖诱导的高迁移率组蛋白B1表达及机制研究

目的 研究胰高血糖素样多肽1(glucagon like peptide 1, GLP-1)对高糖环境下培养的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells, HRCEC)中,高迁移率组蛋白B1(high mobility group box-1 protein, HMGB1)表达的影响及相关机制。方法 高糖刺激HRCEC不同时间(24h、48h及96h)后,分别使用不同浓度的GLP-1(10mmol/L、100nmol/L及1000nmol/L)刺激HRCEC 96h后,分别通过RT-PCR、ELISA及Western Blot检测HMGB1的mRNA、分泌及蛋白水平。使用高糖和GLP-1刺激细胞1h后,Western Blot检测HMGB1表达相关信号通路(p38 MAPK、JNK和NF-κB)磷酸化水平。结果 相较于正常糖水平,高糖促使HMGB1的mRNA、分泌及蛋白水平显著升高,GLP-1可有效抑制这一效应。高糖可显著性激活p38 MAPK、JNK和NF-κB,而GLP-1则抑制高糖所诱导的这些信号通路激活。结论 GLP-1可能通过抑制高糖刺激下HMGB1的表达及炎症信号通路激活,从而抑制糖尿病视网膜病变的发生及发展。     

LCVS1002诱导大鼠视网膜变性

【立论依据】 Müller细胞的胶质化是很多视网膜变性疾病共有的病理过程,抑制胶质化能够保护视网膜。课题组前期研究表明LCVS1002在早期实验性糖尿病视网膜(diabetic retinopathy)病变大鼠的玻璃体中明显升高,我们推测LCVS1002可能参与了DR的视网膜变性。 【设计思路】 体内试验:检测正常SD大鼠和STZ诱导的糖网病大鼠的视网膜组织中LCVS 1002和GFAP的表达;在SD大鼠过表达LCVS1002以及在DR大鼠视网膜knockdown－LCVS1002检测其视网膜结构和功能的变化。体外试验:以661w细胞为研究对象,检测LCVS1002对神经视网膜作用的可能机制。 【实验内容】 (1)选用正常SD大鼠,采用视网膜免疫荧光方法检测出生后1~6周视网膜LCVS1002、GFAP的表达。(2)选用正常SD大鼠,对照组腹腔注射枸橼酸缓冲液,实验组注射链脲佐菌素(STZ),采用视网膜组织免疫荧光检测造模成功后的第1~7天视网膜LCVS 1002和GFAP的表达。(3)选用正常SD大鼠,在出生后10 d实验组视网膜下腔注射LCVS1002腺相关病毒(AAV2/8),对照组注射相同滴度空病毒载体,采用视网膜电生理、组织免疫荧光和TUNEL方法在4、6周分别检测视功能、LCVS1002、GFAP、Recoverin的表达和视网膜细胞的凋亡情况。(4)LC3-II腺病毒感染661W细胞后24 h,用LCVS1002处理,检测自噬。 【材料】 体内实验材料:雄性SD大鼠,由同济大学医学院实验动物中心提供。体外实验材料:661W细胞系。 【可行性】 实验所用病毒由公司商品化提供,实验所用技术包括视网膜下腔注射、免疫荧光、细胞培养是实验常规技术,能够保证实验顺利开展。 【创新性】 首次证明LCVS1002能够引起DR视网膜变性,参与DR早期的病变,有望作为一个DR的生物标记物(biomarker)。     

美国医学院校生物化学课程的启示

生物化学与分子生物学作为一门医学生的专业基础课,其教学方法也在不断的改进。对美国医学院校生物化学与分子生物学课程的设置、教学方法和考核进行观摩,交流和学习,吸取其特色,结合国内医学院校的自身特点,在授课中加强生物化学基础知识的临床应用,充分应用网络来辅助教学,提高教学效果,努力培养应用型和创新型医学人才。     

成年起病脊肌萎缩症SMN基因外显子7缺失的初探

目的 探讨成年起病的脊肌萎缩症（SMA）患者的运动神经元存活基因SMN的缺失情况。方法 用聚合酶链反应－酶切技术对15例SMA病人及33例正常对照的外显子7进行检测，明显有无缺失。结果 3例SMA的SMN的基因外显子7纯合缺失，其余12例和对照组均阴性。结论 SMN基因外显子7缺失可作为成年起病SMA的辅助诊断，以提示SMA遗传的异质性。     

卡维地洛对大鼠心肌TNF—α、TNF—αR1表达的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心肌凋亡相关基因TNF-α、TNF-αR1表达的影响。方法SD大鼠随机分三组:对照组,阿霉素组,阿霉素 卡维地洛组;阿霉素腹腔注射(ADR 20 mg/kg)制备心肌毒性动物模型;卡维地洛组在注射阿霉素之后立即腹腔注射卡维地洛(Carv2 mg/kg);等量生理盐水用于对照组。于用药后第1、3、5、10、15天采用逆转录聚合酶链反应检测TNF-α,TNF-αR1在心肌细胞中的表达,HE染色检测心肌组织病理改变情况。结果GAPDH为内标,第1、3、5、10天阿霉素组TNF-α表达逐渐增强,TNF-αR1表达逐渐增强;阿霉素 卡维地洛组中TNF-α及TNF-αR1表达均逐渐增强;阿霉素 卡维地洛组与阿霉素组比较:TNF-α及TNF-αR1表达两组比较差异无显著性。HE染色结果:阿霉素组与卡维地洛组比较差异无显著性。结论(1)阿霉素的心肌毒性作用可增强心肌细胞凋亡相关基因TNF-α及TNF-αR1的表达;(2)卡维地洛对凋亡相关基因TNF-α及TNF-αR1的表达无影响;揭示卡维地洛对阿霉素心肌毒性的保护作用不能通过调节TNF-α、TNF-αR1的表达而实现。     

急性冠状动脉综合征患者胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性与血脂水平的关系

目的:探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者胆固醇酯转运蛋白(CETP)TaqIB基因多态性与血脂水平的关系。方法:对236例经冠状动脉造影证实为ACS的患者(ACS组)及54例经冠状动脉造影排除冠心病的患者(对照组)进行研究。采用酶法测定血脂各项水平,采用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析CETP基因中TaqIB基因多态性。结果:与对照组比较,ACS组CETPTaqIB基因型及等位基因频率的分布差异无统计学意义(P>0.05)。B1B2与B1B1基因型比较,HDL-C水平显著增高(P<0.05)。B1B2与B2B2基因型比较各血脂指标间差异无统计学意义。等位基因B2与低HDL-C有关。TG≥1.7mmol/L时不同基因型间各血脂指标差异无统计学意义;但在TG<1.7mmol/L时B1B1基因型的HDL-C水平显著低于B1B2基因型(P<0.05)。结论:B1、B2等位基因频率的分布在ACS组与对照组间差异无统计学意义。TG及TaqIB基因多态性均可影响HDL-C水平。     

液态芯片技术检测Y 染色体微缺失方法的优化

目的优化基于液态芯片检测高通量、快检测Y染色体微缺失的方法。方法以sY84、sY86（AZFa）,sY127、sY134（AZFb）,sY152、sY153（AZFd）,sY242、sY254、sY255（AZFc）等9个Y染色体微缺失的STS位点作为检测区域,以sY14（SRY,男性性别决定基因）位点作内部对照。优化探针引物组合,建立基于液态芯片的多重PCR-技术检测Y染色体微缺失的方法。结果优化的引物对在多重PCR体系中显示特异的扩增效率;多重PCR产物与STS特异的探针微球杂交后,在Luminex上显示非常强的特异性的荧光信号。结论多重PCR-液态芯片技术检测Y染色体微缺失的方法具有高灵敏性、高特异性,高准确性,操作简单,结果可靠,使快速、高通量筛选男性不育症的分子缺陷成为可能。