EV71/CA16联合P1基因重组杆状病毒的构建

目的利用昆虫杆状病毒表达系统构建肠道病毒71型及柯萨奇病毒A16型(EV71/CA16)联合P1基因(HP1)重组杆状病毒。方法利用重叠PCR的原理,设计合成HP1基因;HP1基因与载体pFastBac1连接后转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组穿梭杆粒HP1-bacmid;提取纯化重组杆粒转染Sf9细胞,收获重组杆状病毒;以SDS-PAGE、Western blot进行重组蛋白鉴定。结果成功合成HP1基因;完成HP1与pFastBac1载体连接;获得了重组穿梭杆粒HP1-bacmid;并通过转染Sf9细胞,获得具有感染活性的重组杆状病毒;SDS-PAGE电泳结果显示重组病毒感染的Sf9细胞表达了大小约为100×103 Mr的目的蛋白条带,经Western blot鉴定,该条带能与EV71单克隆抗体特异结合。结论成功构建了EV71/CA16联合P1基因重组杆状病毒,为下一步EV71/CA16联合P1蛋白的免疫鉴定奠定基础,并为兼抗EV71、CA16疫苗的研究提供参考。     

2011-2012年深圳市呼吸道腺病毒分子分型及其流行特征

目的了解2011—2012年深圳地区致病性呼吸道腺病毒（AdV）的病原体基因亚型和遗传进化及其流行特征．分析深圳地区呼吸道腺病毒的流行规律和传播途径。方法收集2011年1月至2012年12月深圳地区31个流感样病例监测哨点2822份样本,先用荧光定量PCR方法筛查流感样病例,筛查后的阴性样本进一步进行呼吸道腺病毒等13种常见呼吸道病毒的核酸检测。对检测出的109份腺病毒阳性标本进行病毒分离,感染Hep-2受体细胞后共获得71份AdV稳定细胞毒株,用腺病毒六邻体基因作为靶基因,扩增其中的50份腺病毒阳性标本,纯化扩增产物后直接用于序列分析,在GenBank上进行序列比较,确定其病毒亚型并进行系统进化分析。结果2011—2012年深圳市腺病毒感染患者的高发年龄段人群为小于7岁的儿童,1～2岁婴幼儿发病率最高;4-6月和10—12月为每年发病高峰期。在2822份流感样病例咽拭子标本中,经定量PCR方法确定为AdV核酸阳性共109份,核酸阳性率为3．86％,从109份核酸阳性样本中分离病毒7l份,病毒分离率为68．93％。50份分离的呼吸道腺病毒分子分型结果为1型AdV6例,占12％;2型AdV4例,占8％;3型AdV27例,占54％;4型AdV3例,占6％;5型AdV4例,占8％;7型AdV5例,占10％;另外有复合型AdV（HAdV—un）1例,占2％。结论近两年来深圳地区呼吸道Adv感染以3型为主,腺病毒引起的呼吸道疾病主要发生在每年的4—6月,感染人群主要是1~2岁婴幼儿。     

人端粒酶催化亚基(hTERT)基因第2内含子VNTR序列包含潜在蛋白结合位点

目的：检测中国人端粒酶催化亚基(hTERT)基因第2内含子VNTR多态性，探询VNTR序列是否具有潜在的蛋白结合位点，从而为进一步研究这些VNTR的功能提供线索。方法：采用PCR方法扩增健康中国人外周血淋巴细胞基因组hTERT基因第2内含子多态性VNTR片段，克隆并鉴定，以多态性重复单元做为探针进行凝胶延迟实验，以确定该片段是否存在蛋白结合位点。结果和结论：hTERT基因第2内含子内上游的一个VNTR序列(VNTR2-1st)存在一个潜在蛋白结合位点，该蛋白能够与多态性VNTR DNA序列形成复合物，蛋白结合的关键位点处于42bp重复单元c端的典型E-box基序(CACGTG)，但是c-myc并不参与结合该VNTR2-1st重复单元。此外，利用第6内含子内上游的VNTR(VNTR6-1st)的重复单元做为探针，结果发现该38bp VNTR6-1st重复单元不能与HeLa细胞核蛋白因子结合，从而提示了不同VNTR序列功能的多样性。     

miRNA功能研究进展

miRNA是一类长度为20~25nt的小分子非编码RNA。在线虫、小鼠、人、植物等多种生物中已发现了数百种miRNA。无论在低等的线虫还是在高等的哺乳动物中，miRNA都起着调控基因表达的重要作用。生物信息学分析表明人类全部基因的三分之一都受到miRNA的调控。这表明，miRNA分子实际上是基因调控网络中的核心成分。近来研究发现miRNA与人类的某些疾病密切相关。本文对miRNA分子功能及其研究方法的进展做一概述。     

深圳市新型冠状病毒肺炎应急响应策略和措施效果评价

目的 对深圳市新型冠状病毒肺炎（新冠肺炎）应急响应策略和措施的效果进行评价，明确人口密度高、流动性强的超大城市新冠肺炎策略和措施的有效性。方法 绘制新冠肺炎流行曲线，划分流行期和防控阶段，观察防控措施效果。制作双层阶发病标点地图，明确不同时点传染源的分布和传播风险。建立传播动力学模型，预期发病数与实际发病数对比。新型冠状病毒核酸检测阳性率，反映人群风险水平。借助深圳市人群新冠肺炎相关知识、态度和行为调查结果，估计人群防护和响应能力。结果 深圳市新冠肺炎流行经历了上升期、平台期和下降期，疫情上升快，但高峰期持续时间短，而发病降低的速度快和幅度大；流行曲线虽然呈现人传人现象，但“拖尾”现象不明显。从发病标点地图看，在新冠肺炎防控干预期，传染源分布广泛；人口密度越高的区域，病例数越多；而防控干预措施见效后，传染源减少。从预期发病数对比可见，实际病例数大幅减少。高危险人群新型冠状病毒核酸检测阳性率呈下降趋势，2月16日之后未能检出。市民新冠肺炎知识、态度和行为水平较高，防护能力和应急响应度较高。结论 深圳市早期由部门主导的防控机制发挥了重要作用，但不足以阻断新冠肺炎流行；一级响应策略和措施效果明显，确保了春节后复工复产的启动；对超大城市，采取综合性阻断策略和措施，同样可以控制新冠肺炎的流行。     

深圳市一例人禽流感病例现场流行病学分析

目的 结合人禽流感病例的调查处理探索现场流行病学的应用效果.方法 对一例人禽流感病例开展流行病学调查和密切接触者观察,采用RT-PCR检测咽拭子或气管分泌物H5亚型核酸片段和血清中H5抗体;对气管分泌物中分离到的H5N1病毒进行主要基因片段的测序和分析.按照现场流行病学特征完成处理和控制.结果 根据临床表现和病原学检测结果,确诊为人禽流感病例;患者病前曾到过居住地附近的一间兼营活禽的菜市场,余无可疑接触史;对患者的98名接触者进行医学观察,并对其中的4名进行隔离观察,未发现人与人之间的传播.由患者气管分泌物分离到H5N1病毒[A/Guangdong/02/2006(H5N1)],基因序列分析仍为禽源性特征,但与2005年之前国内分离的病毒株明显不同.病例呈现起病急、进展快和多脏器严重损害等特征,经救治而康复.疫情处理以疾病预防控制和临床专业为技术支撑,注意了政府主导下的多部门参与、公众互动、媒体沟通、与香港交流等,收到了良好的效果.结论 及早发现和病原学确诊是病例成功救治的关键;病毒株仍为禽源性特征,未见人间传播现象,但病毒感染来源和传播因素不明;现场流行病学为突发公共卫生事件应对提供了重要的理论和方法.     

人、牛、猪血铜锌超氧化物歧化酶的纯化及其某些理化性质的鉴定

为进行人、牛、猪铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)免疫学性质差异的比较研究,我们采用经典方法分别提纯了人和牛血 CuZn-SOD,并在经典方法的基础上做了适当改进,从猪血中提取了 CuZn-SOD。经聚丙烯酰胺凝胶电泳、比活性、分子量及紫外吸收光谱等理化性质的鉴定,证实3种不同种属来源的 CuZn-SOD 纯度均一,符合免疫学研究的要求。     

深圳市一起肠道病毒71型引发手足口病流行的基因型别分析

目的 对2004年深圳市一起肠道病毒71型(EV71)引发手足口病流行的基因型别分析.方法 用EV71型特异性引物进行RT-PCR,并对EV71的VPl和VP4基因进行克隆,所得的序列与EV71型A、B、C基因型代表株的核苷酸序列用TreeView和PHYLIP软件(3.6b)进行系统进化分析.结果 4株病毒与C基因型代表株比较接近,VP1区核苷酸同源性在87.8%～92.0%之间,VP4区核苷酸同源性在85.9%～87.4%之间;与A、B基因型代表株比较差异较大,VPI区核苷酸同源性为81.9%～84.2%,VP4区为80.6%～85.0%;4株病毒VP1核苷酸同源性为94.1%～99.8%,VP4同源性为100%,组成一个独立的小分支.结论 对EV71的VPI和VP4区进行基因进化分析,可得出类似的结果 ,4株EV71深圳流行株可命名为C4亚型.