在MRSA中鉴定出变异型SCCmec遗传元件

近年来，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus，MRSA）所致感染的发生率无论在医院内或社区中都有很快的上升，给临床治疗带来极大的困难。我们应用PCR及多重引物PCR技术、脉冲场凝胶电泳分析和多位点序列分型（muhilocus sequencing typing，MIST）对8株临床分离的MRSA菌株进行SCCmec及ccr基因的分子分型，分析并了解本地区MRSA的主要型别特点及其遗传背景。     

志贺菌1、2类整合子及ISCR1携带情况与耐药性的关系

目的 了解天津地区志贺菌1类、2类整合子及插入序列共同区(ISCR1)携带情况及其与耐药性的关系。方法 K-B纸片扩散法测定临床分离的159株志贺菌的药敏情况。以煮沸法制备细菌总DNA作为PCR扩增模板。采用PCR方法扩增1类、2类整合子及ISCR1并测序分析。PCR产物直接测序,结果经BLAST程序与Gen-Bank数据库标准株比对分析。结果 159株志贺菌中,53株福氏志贺菌对四环素的耐药率最高88.68%,其次是链霉素81.13%、氯霉素及SMZco均为56.60%,多重耐药率77.36%;106株宋氏志贺菌对氨苄西林的耐药率最高97.17%,其次是SMZco95.28%、四环素83.96%、庆大霉素76.42%,多重耐药率98.11%。1类整合子阳性118株,其中典型1类整合子23株,共有5种基因盒,分别为aad A2、aad A1、dfrⅠ、blaoxa-10及blaoxa-1;非典型1类整合子95株,基因包括int I1、aad A、blaoxa-1和IS1等;2类整合子阳性89株,其基因盒有dfr A1、satl及aad A1;1类、2类整合子同时阳性的菌株70株。未发现ISCR1阳性菌株。整合子阳性菌株中多重耐药率高于整合子阴性菌株(90.65%vs 50%,P<0.05)。结论 1、2类整合子广泛存在于志贺菌中且与志贺菌的多重耐药相关。     

2006～2007年深圳市Victoria系B型流感病毒HA1基因特性的分析

目的：了解2006-2007年深圳市Victoria系B型流感病毒流行情况及HA1基因特性。方法：用狗肾传代细胞（MDCK）和鸡胚进行流感病毒分离,将分离到的Victoria系B型流感毒株进行血凝素HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用SIMMONIC软件和Mega软件对其进行分析。结果：2006-2007年深圳分离培养到的Victoria系流感毒株与同时段的疫苗株B/Malaysia/2506/04、国内代表株B/Shenzhen/155/05的核苷酸同源性极高,没有发生较大的变异;2006-2007年深圳所有的Victoria系株均在134号位点上发生了Ser到Pro的替换。除此之外,还存在个别的氨基酸点变异,部分的变异位点处在HA1区的抗原表位,会导致病毒的抗原性改变。结论：本研究未发现2007年深圳流行的Vic-toria系B型流感毒株与2006年的流行株在HA1片段有明显的氨基酸变异。     

深圳市2008-2009年A型H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶抑制剂耐药性监测

目的 对深圳市2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制剂的耐药性进行监测.方法 根据原始临床样本的采集时间,按周抽取了55株2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒,对其NA片段进行全长测序,选取WHO推荐的疫苗株和部分国内外分离到的H1N1季节性流感病毒作为参考株,运用Mega3.1软件进行种系发生树的构建、耐药相关位点及糖基化位点的分析.结果 对NA片段的序列分析发现2008年有2株(7.1%)出现了H275Y突变,但是2009年则有25株(92.6%)出现了该突变.提示H275Y达菲耐药突变株成为了2009年深圳市社区传播的优势株.同时还发现了一株Q136K变异株,显示对乐感清出现耐药.分子进化分析结果显示,H275Y变异成为了毒株在系统进化树上分布的主要依据.所有的深圳株NA片段上潜在的糖基化位点序列保守.结论 大量H275Y达菲耐药株的出现提示在今后的工作中应当密切关注流感病毒的耐药进展,进一步加强其耐药机制的研究.

Abstract：

Objective To analyze neuraminidase(NA) inhibitor resistance of seasonal H1N1 influenza A viruses isolated in Shenzhen during 2008 to 2009. Methods The NA gene of these viruses were sequenced. Phylogenetic analysis of the sequences was performed with Mega3. 1 software. Results In 2008, most isolates of the seasonal H1 N1 virus were susceptible to neuraminidase inhibitors, but the H275Y mutation in the neuraminidase gene region associated with high-level oseltamivir resistance had been detected in 92.6% of the strains isolated in 2009. Furthermore, a strain with Q136K was found, which showed the resistance to Zanamivir. Conclusion In the light of emerging resistance, close monitoring and understanding of the nature and dynamics of resistance mutations in influenza virus should be a priority.     

2009年广东省深圳市B型流感病毒系统进化及分子变异分析

目的 了解2009年深圳市B型流感病毒的系统进化及分子变异情况。 方法 对2009年深圳市分离的B型流感病毒的时间分布进行统计分析,并通过MEGA等软件对其HA1基因的系统进化及分子变异情况进行研究。 结果 深圳市2009年1-10月均有B型流感病毒流行,3-5月为流行高峰;Victoria系分支D的毒株是优势流行株;与2008 - 2009年度的国际疫苗株相比,Victoria和Yamagata系的HA1分子在其抗原决定簇区均出现了多个氨基酸位点的变异。 结论 2009年深圳市B型流感病毒的流行时间长,一些氨基酸位点的变异并没有导致一个新流行株系的形成。     

用ARIMA模型预测流感的变化趋势

目的探讨ARIMA在建立流感预测模型方面的应用。方法利用深圳市2006—2008年每周的流感样病例（ILI）监测数据建立ARIMA模型,拟合ILI％的变化趋势,用残差序列分析进行模型诊断,用2009年的数据来检验ARIMA模型的预测效果。结果2006—2008年深圳市的ILI％呈季节性周期变化,经模型诊断发现ARIMA（1,0,0）×（1,1,0）模型为最优模型,预测值与实际值的平均相对误差为14．2％。通过对2009年数据的外推,2009年上半年的平均相对误差为15．5％,下半年的平均相对误差为25．5％。结论ARIMA模型可对ILI率进行很好的拟合,建模后的中短期预测效果较好。     

深圳市2005～2008年流感样病例暴发疫情特征分析

目的 了解深圳市流感样病例暴发疫情特征,为科学防控流感提供参考依据。方法回顾性分析深圳市2005～2008年流感样病例暴发疫情资料。结果深圳市2005～2008年累计报告流感样病例暴发疫情282起,累计发病人数3963例,平均罹患率为1．9％。全市六区均有流感样病例暴发疫情报告,234起（83．0％）发生于3-6月;245起（86．9％）发生于中、小学生人群;207起（73．4％）的疫情发病人数规模在15例以下。流感样病例暴发疫情主要由甲乙型流感病毒（80．5％,227／282）引起,其中90起（31．9％）甲型流感阳性、134起（47．5％）乙型流感阳性、3起甲乙型流感混合阳性（1．1％）。所有甲乙型流感PCR检测的阳性标本均立即接种MDCK细胞或鸡胚进行病毒分离培养,共分离流感病毒188株,溯源于71起疫情（71／227,313％）,其中15起为H1N1亚型、17起为H3N2亚型、39起为乙型流感病毒。3月份以乙型流感暴发为主,占72．7％,4月份甲乙型流感逐步更替,5~6月份则以甲型流感为主,占51．9％。结论深圳市流感样病例暴发疫情主要由甲乙型流感病毒引起,主要发生于3～6月,中、小学校是全市流感暴发疫情防控工作的关键所在。     

多重RT—PCR同步快速检测A型和B型流感病毒

目的　建立特异、敏感、快速、同步检测含漱液中A、B型流感病毒的分子生物学检测方法。　方法　以流感病毒A型保守的M基因和流感病毒B型的NS基因为模板分别设计的两对引物 ,用MRT -PCR同时扩增A型M基因和B型NS基因的片断 ,得到相对应的病毒片段 ,根据扩增出的片段的位置和大小来判断含漱液中A、B型流感病毒分型。　结果　用MRT -PCR从 19株A型流感病毒毒株和 11株B型流感病毒毒株分别特异地扩增出M基因 5 0 1bp的片段和NS基因 13 6bp的片段 ,灵敏度可达 1 6× 10 -5TCID5 0 ;对 2份黑天鹅的咽拭子和肺组织标本均检出A型流感病毒M基因 5 0 1bp的片段。　结论　多重逆转录聚合酶链反应能特异、敏感快速的检测A、B型流感病毒。     

内皮细胞型一氧化氮合酶基因多态性与高血压病的相关性研究

目的　探讨内皮细胞型一氧化氮合酶 (endothelialnitricoxidesynthase ,eNOS)基因第 4内含子数目可变性串联重复序列 (variablenumberoftandemrepeatspolymorphism ,VNTR)多态性与高血压病(essentialhypertension,EH)的相关性。方法　依据VNTR位点侧翼序列设计引物 ,PCR方法分别自血压正常 (normotension ,NT)和EH人群基因组DNA扩增VNTR片段 ,琼脂糖凝胶电泳分析VNTR基因型 ,对两组VNTR的基因型与等位基因频率进行统计对比。结果　NT和EH人群eNOS基因VNTR均存在重复 4次、5次和 6次 3种等位基因 ,以及 4/4纯合、4/5杂合、5/5纯合和 5/6杂合 4种VNTR基因型 ,但等位基因与基因型的分布频率存在差异。EH人群重复 4次的等位基因频率 (χ2 =30 80 ,P <0 0 0 0 1 ) ,4/5杂合 (χ2 =2 1 45 ,P <0 0 0 0 1 )和 4/4纯合 (χ2 =4 0 6 ,P <0 0 5)的基因型频率明显高于NT人群。结论　eNOS基因VNTR重复 4次的等位基因与EH相关 ,携带重复 4次等位基因的人具有罹患EH的一定危险性 (χ2 =33 96 ,P <0 0 0 0 1 ,OR =3 2 ,95 %可信区间为 2 0 97～ 4 495)。     

2010-2011年深圳市流感样病例暴发疫情监测分析

目的 对2010-2011年深圳市流感样病例暴发疫情监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防治提供科学依据. 方法 收集全市2010-2011年的流感样病例暴发疫情资料进行分析. 结果 2010-2011年深圳市共报告226起流感样病例暴发疫情.发病总人数为2026人,平均罹患率14.2％.疫情报告最多的月份是12月为64起,其次是3月和4月,分别为56起和39起.226起疫情中有201起(88.9％)为PCR检测流感病毒核酸阳性,经型别鉴定其中乙型171起(85.0％),甲流17起(8.5％),季节性甲型13起(6.5％). 结论 2010-2011年深圳市流感活动属于中等水平,分别在3-4月份和12月份出现流行高峰.