流感样病例暴发流行的病原学研究与方法比较

目的 对 2007 年 5 月下旬至 6 月上旬深圳市龙岗区某鞋厂流感暴发流行情况进行病原学研究.方法 采集发热患者的鼻咽拭子 27 份,急性期患者血清标本 17 份和恢复期患者血清标本 12 份.27 份鼻咽拭子标本,采用荧光定量 RT-PCR 方法 、胶体金法、MDCK 细胞培养、鸡胚分离培养方法 进行病原学检测;血清标本采用血清学和血凝抑制试验检测.结果 27 份鼻咽拭子标本中荧光定量 RT-PCR 检测阳性 17 份,阳性率为 62.96%(17/27);胶体金法检测阳性 12 份,阳性率 44.44%(12/27);MDCK 细胞分离培养,其中 2 份鼻咽拭子标本中分离出 2 株 H3N2 亚型流感病毒,阳性率 7.41%(2/27);鸡胚分离培养未分离出流感病毒.6 例病人的双份血清学检测结果 显示:恢复期抗体比较急性期抗体有 4 倍或以上增长. 结论 该起流感样病例暴发流行由 H3N2 亚型流感病毒引起.荧光定量 PCR 法的特异性高、灵敏度好,可用于流感病毒的快速检测.     

狗肝铜锌超氧化物歧化酶的纯化及理化性质鉴定

<正> 超氧化物歧化酶(SOD)是广泛存在于生物界的金属酶类,它催化超氧化物自由基O_2~r转变为O_2H_2O_2的歧化反应,是生物体抗氧化损伤的重要保护酶。按所含金属的不同,SOD分为,Cu,Zn-SOD,Mn-SOD,和Fe-SOD。Cu,Zn-SOD存在于需氧生物的细胞浆中,     

双碱基延伸法结合荧光偏振法快速检测新甲型HINl耐药位点方法的建立

目的建立一种利用双碱基延伸法与荧光偏振技术（Fluorescence polarization,FP）快速检测甲型H1N1流感病毒NA基因耐药突变位点的新方法。方法从GenBank随机下载30条甲型HINl的NA（neuraminidase）基因序列,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计3条特异引物,其中一对引物通过RT—PCR用于扩增含有耐药位点H275Y的NA基因,第3条引物是应用双碱基延伸终止法与荧光偏振技术检测NA基因对达菲类药物耐药位点H275Y的突变情况,再随机选取50株甲型HINl流感病毒进行检测,与测序结果进行比对,验证检测结果的准确性。结果50株甲型H1N1流感病毒的NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸,未发生HY的替换,在灵敏度与特异性方面,与传统的基因测序结果一致性均达100％。结论本方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,能实现对耐药位点突变的快速、准确检测,可应用于与SNP相关疾病的快速分型和突变位点的实时监测和临床检测。     

单纯微创手术与调强放射治疗原发性I期鼻咽癌的疗效比较

背景与目的 "美国国家癌症综合网络"指南建议将调强放射治疗(intensity-modulated radiotherapy,IMRT)作为新诊断鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的主要治疗方法,但放疗相关并发症和相对较高的医疗费用仍困扰着患者。内镜下鼻咽切除术(endoscopic nasopharyngectomy,ENPG)已成功用于复发性鼻咽癌的治疗,无辐射且医疗费用相对较低。在本文中,我们对ENPG能否作为局限性I期NPC的有效治疗方法进行了探讨。方法从2007年6月至2017年9月,10例新诊断为局限性I期NPC的患者自愿在中山大学肿瘤防治中心接受了ENPG治疗。同时,收集了329例接受IMRT治疗的I期NPC患者数据作为参考队列。比较两组的生存结局、生活质量(quality of life,QOL)和医疗费用。结果经过中位随访59.0个月(95%CI:53.4–64.6)后,接受ENPG治疗的10例患者均未出现死亡、局部复发或远处转移。接受ENPG治疗的患者的5年总生存率、局部无复发生存率、区域无复发生存率和无远处转移生存率与接受IMRT治...     

一株从死亡黑天鹅中分离出HSN1亚型流感病毒株血凝素基因特性的研究

目的了解从黑天鹅分离H5N1亚型流感病毒株血凝素基因特性。方法用RT-PCR扩增目的基因，用PGBM-TVecTor（美国Promeqa公司）412过夜连接重组质检转入dH5α细菌，筛选阳性菌落，酶切鉴定。送六合通公司自动测序，然后进行进化树分析，并推导出基因树序列。结果从黑天鹅分离出H5N1毒株血凝素的重链区与轻链区连接肽的序列为R—E—R—R—R—K—R，即含一串碱性氨基酸，共有8个潜在的糖基化位点，其中6个位于重链区的第9、10、23、165、193和296位点上；其余2个位于轻链区的第154和213位点上。其HA基因进化树与无论从家禽还是从人中分离的均有差异。结论从黑天鹅中分离的H5N1亚型流感病毒为对禽是高致病性的，他的HA基因不同于从人和家禽中分离出的H5N1毒株。     

抑瘤素M在毕赤酵母中的表达及活性鉴定

目的：构建抑瘤素M（oncostatinM,OSM)的酵母表达体系,方法：将人OSM cDNA连入pPIC9K酵母表达载体,转染毕赤酵母（Pichia pastoris),用MD和MM营养缺陷型培养基筛选具有正确表型的重组转化子,用RNA印迹法和蛋白质印迹法鉴定母转化菌株中OSMmRNA转录和OSM相对分子质量。MTT法鉴定OSM蛋白对人黑素瘤细胞生长的抑制活性。结果：构建的毕赤酵母体系可实现人OSM分泌表达,表达量占外分泌蛋白的70％以上,表达蛋白相对分子质量约30000,对黑素瘤细胞生长可产生明显抑制作用。结论：OSM的酵母分泌表达体系表达量可观,表达蛋白集中于培养液上清,便于纯化,是日后进行OSM大规模制备的可行途径。     

荧光定量RT-PCR快速检测B型流感病毒的研究

目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与普通RT-PCR法进行比较。结果:B型流感病毒检测反应的灵敏度为5.0×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为107.8%,5种非B型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论:本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。     

耐氟喹诺酮类大肠杆菌mar基因突变的研究

目的：研究多重抗生素耐药（Mar)突变型耐药机制对大肠杆菌临床多重耐药株的影响。方法：药敏试验。外膜蛋白的提取与SDS－PAGE;多重耐药株的转化试验;mar区基因的聚合酶链反应（PCR）扩增与PCR产物DNA序列分析。结果：49株临床耐环丙沙星大肠杆菌中有7株出现Mar耐药特异性蛋白Mrp5,以携带野生型gyrA基因的质粒转化临床多重耐药株LC－1,转化前后LC－1对喹诺酮类药耐水平无差异,PCR扩增及DNA序列分析发现,临床株LC－1的marOR基因存在3处突变。结论：对氟喹诺酮耐药的临床分离大肠杆菌中存在Mar耐药机制,LC－1的marR突变可能是该临床株对多种抗生素多重耐药的原因之一。     

志贺菌属外排泵AcrAB-TolC及其调控基因突变与氟喹诺酮耐药性的关系

目的 探讨临床分离耐氟喹诺酮志贺菌外排泵Acr AB-Tol C基因及其调控基因mar OR、acr R、sox S突变与耐药性的关系。方法 使用K-B纸片扩散法筛选临床耐药菌,测定加入泵抑制剂羰基氢氯苯腙(CCCP)后萘啶酸、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的变化,PCR扩增外排泵基因acr A、acr B及其调控基因mar OR、acr R、sox S并测序。结果 159株志贺菌中共筛选出11株氟喹诺酮耐药菌株;加入质子泵抑制剂后2株耐药菌株对氟喹诺酮类抗菌药的MIC下降;7株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC不变;2株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC上升。基因测序发现氟喹诺酮耐药菌株外排泵Acr AB-Tol C调控基因mar OR第36、37、38、39位存在CATT碱基缺失。结论 泵抑制剂可部分抑制外排泵的活性。mar OR突变可能与志贺菌对氟喹诺酮类抗菌药耐药有关。     

2010年深圳市流感流行病学分析

目的 对2010年深圳市流感监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防治提供科学依据.方法 收集全市31家监测单位的流感样病例数据、病原学检测结果和暴发疫情资料进行分析.结果 2010年深圳市的流感样病例百分比(ILI％)为5.43％.2010年全市共采集日常监测ILI咽拭标本4 031份,分离出445株流感病毒,阳性率为11.0％,其中14株季节性H1N1亚型(3.1％),42株季节性H3N2亚型(9.4％),171株甲型H1N1亚型(38.4％),213株B(Victoria,47.9％)亚型,5株B(Yamagata,1.1％)亚型.2010年全市报告了89起ILI暴发疫情,发病总人数741人,流感PCR检测阳性79起,其中季节性甲型6起(6.8％),乙型67起(75.3％),甲型H1N1流感6起(6.8％).结论 2010年深圳市流感活动较低,未出现明显的高峰.