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31.
目的研究中国南方地区H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因分子特征。方法从Genebank中下载中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒和其他国家或地区的16株代表性H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因序列,利用生物信息学软件DNASTAR5.0进行核酸同源性分析,用MEGA3.1进行核酸和氨基酸序列比对和进化树分析。结果中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA蛋白的重链区和轻链区连接肽的序列为LRERRR—KR,与动物分离的高致病性H5N1亚型禽流感病毒和东南亚地区人禽流感病毒的连接肽相比,减少1个碱性氨基酸;共有8个潜在的糖基化位点,抗原决定簇位点有其独特的特征。基因进化树表明中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因位于单一的进化簇,与动物来源的高致病性禽流感病毒HA基因同源性高。结论中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因分子特征一致,有其显著的独有特点。提示候鸟或其他扩散因素在高致病性H5N1亚型流感病毒HA基因的重配方面扮演了重要的作用。 相似文献
32.
目的 对 2007 年 5 月下旬至 6 月上旬深圳市龙岗区某鞋厂流感暴发流行情况进行病原学研究.方法 采集发热患者的鼻咽拭子 27 份,急性期患者血清标本 17 份和恢复期患者血清标本 12 份.27 份鼻咽拭子标本,采用荧光定量 RT-PCR 方法 、胶体金法、MDCK 细胞培养、鸡胚分离培养方法 进行病原学检测;血清标本采用血清学和血凝抑制试验检测.结果 27 份鼻咽拭子标本中荧光定量 RT-PCR 检测阳性 17 份,阳性率为 62.96%(17/27);胶体金法检测阳性 12 份,阳性率 44.44%(12/27);MDCK 细胞分离培养,其中 2 份鼻咽拭子标本中分离出 2 株 H3N2 亚型流感病毒,阳性率 7.41%(2/27);鸡胚分离培养未分离出流感病毒.6 例病人的双份血清学检测结果 显示:恢复期抗体比较急性期抗体有 4 倍或以上增长. 结论 该起流感样病例暴发流行由 H3N2 亚型流感病毒引起.荧光定量 PCR 法的特异性高、灵敏度好,可用于流感病毒的快速检测. 相似文献
33.
抑瘤素M在毕赤酵母中的表达及活性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建抑瘤素M(oncostatinM,OSM)的酵母表达体系,方法:将人OSM cDNA连入pPIC9K酵母表达载体,转染毕赤酵母(Pichia pastoris),用MD和MM营养缺陷型培养基筛选具有正确表型的重组转化子,用RNA印迹法和蛋白质印迹法鉴定母转化菌株中OSMmRNA转录和OSM相对分子质量。MTT法鉴定OSM蛋白对人黑素瘤细胞生长的抑制活性。结果:构建的毕赤酵母体系可实现人OSM分泌表达,表达量占外分泌蛋白的70%以上,表达蛋白相对分子质量约30000,对黑素瘤细胞生长可产生明显抑制作用。结论:OSM的酵母分泌表达体系表达量可观,表达蛋白集中于培养液上清,便于纯化,是日后进行OSM大规模制备的可行途径。 相似文献
34.
目的了解从黑天鹅分离H5N1亚型流感病毒株血凝素基因特性。方法用RT-PCR扩增目的基因,用PGBM-TVecTor(美国Promeqa公司)412过夜连接重组质检转入dH5α细菌,筛选阳性菌落,酶切鉴定。送六合通公司自动测序,然后进行进化树分析,并推导出基因树序列。结果从黑天鹅分离出H5N1毒株血凝素的重链区与轻链区连接肽的序列为R—E—R—R—R—K—R,即含一串碱性氨基酸,共有8个潜在的糖基化位点,其中6个位于重链区的第9、10、23、165、193和296位点上;其余2个位于轻链区的第154和213位点上。其HA基因进化树与无论从家禽还是从人中分离的均有差异。结论从黑天鹅中分离的H5N1亚型流感病毒为对禽是高致病性的,他的HA基因不同于从人和家禽中分离出的H5N1毒株。 相似文献
35.
耐氟喹诺酮类大肠杆菌mar基因突变的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
目的:研究多重抗生素耐药(Mar)突变型耐药机制对大肠杆菌临床多重耐药株的影响。方法:药敏试验。外膜蛋白的提取与SDS-PAGE;多重耐药株的转化试验;mar区基因的聚合酶链反应(PCR)扩增与PCR产物DNA序列分析。结果:49株临床耐环丙沙星大肠杆菌中有7株出现Mar耐药特异性蛋白Mrp5,以携带野生型gyrA基因的质粒转化临床多重耐药株LC-1,转化前后LC-1对喹诺酮类药耐水平无差异,PCR扩增及DNA序列分析发现,临床株LC-1的marOR基因存在3处突变。结论:对氟喹诺酮耐药的临床分离大肠杆菌中存在Mar耐药机制,LC-1的marR突变可能是该临床株对多种抗生素多重耐药的原因之一。 相似文献
36.
目的 探讨临床分离耐氟喹诺酮志贺菌外排泵Acr AB-Tol C基因及其调控基因mar OR、acr R、sox S突变与耐药性的关系。方法 使用K-B纸片扩散法筛选临床耐药菌,测定加入泵抑制剂羰基氢氯苯腙(CCCP)后萘啶酸、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的变化,PCR扩增外排泵基因acr A、acr B及其调控基因mar OR、acr R、sox S并测序。结果 159株志贺菌中共筛选出11株氟喹诺酮耐药菌株;加入质子泵抑制剂后2株耐药菌株对氟喹诺酮类抗菌药的MIC下降;7株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC不变;2株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC上升。基因测序发现氟喹诺酮耐药菌株外排泵Acr AB-Tol C调控基因mar OR第36、37、38、39位存在CATT碱基缺失。结论 泵抑制剂可部分抑制外排泵的活性。mar OR突变可能与志贺菌对氟喹诺酮类抗菌药耐药有关。 相似文献
37.
38.
金黄色葡萄球菌是社区获得性感染和院内感染的主要致病菌之一。自从1944年从医院分离到了耐青霉素的金黄色葡萄球菌临床株以来,欧洲及世界各地相继报道了许多耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)在院内暴发的事件。上世纪90年代以来开始出现社区获得性MRSA(communityacquired MRSA,CA-MRSA)的报道。 相似文献
39.
目的建立一种利用双碱基延伸法与荧光偏振技术(Fluorescence polarization,FP)快速检测甲型H1N1流感病毒NA基因耐药突变位点的新方法。方法从GenBank随机下载30条甲型HINl的NA(neuraminidase)基因序列,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计3条特异引物,其中一对引物通过RT—PCR用于扩增含有耐药位点H275Y的NA基因,第3条引物是应用双碱基延伸终止法与荧光偏振技术检测NA基因对达菲类药物耐药位点H275Y的突变情况,再随机选取50株甲型HINl流感病毒进行检测,与测序结果进行比对,验证检测结果的准确性。结果50株甲型H1N1流感病毒的NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸,未发生HY的替换,在灵敏度与特异性方面,与传统的基因测序结果一致性均达100%。结论本方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,能实现对耐药位点突变的快速、准确检测,可应用于与SNP相关疾病的快速分型和突变位点的实时监测和临床检测。 相似文献
40.
利用废弃人红细胞批量生产铜、锌超氧化物歧化酶 总被引:1,自引:0,他引:1
本文以干扰素生产中废弃的人红细胞为原料,按乙醇-氯仿沉淀→磷酸氢二钾盐析→丙酮沉淀的操作手续进行了铜、锌超氧化物歧化酶中等规模(300~600毫克)的批量生产。经理化性质鉴定及蛋白纯度分析证实,我们提取的人铜、锌超氧化物歧化酶的比活性和纯度分别可达到2500McCord—Fridovich单位/毫克蛋白和90%以上,聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外吸收光谱等理化性质指标也显示出纯酶的基本特征。 相似文献