耐氟喹诺酮类大肠杆菌mar基因突变的研究

目的：研究多重抗生素耐药（Mar)突变型耐药机制对大肠杆菌临床多重耐药株的影响。方法：药敏试验。外膜蛋白的提取与SDS－PAGE；多重耐药株的转化试验；mar区基因的聚合酶链反应（PCR）扩增与PCR产物DNA序列分析。结果：49株临床耐环丙沙星大肠杆菌中有7株出现Mar耐药特异性蛋白Mrp5，以携带野生型gyrA基因的质粒转化临床多重耐药株LC－1，转化前后LC－1对喹诺酮类药耐水平无差异，PCR扩增及DNA序列分析发现，临床株LC－1的marOR基因存在3处突变。结论：对氟喹诺酮耐药的临床分离大肠杆菌中存在Mar耐药机制，LC－1的marR突变可能是该临床株对多种抗生素多重耐药的原因之一。     

志贺菌属外排泵AcrAB-TolC及其调控基因突变与氟喹诺酮耐药性的关系

目的 探讨临床分离耐氟喹诺酮志贺菌外排泵Acr AB-Tol C基因及其调控基因mar OR、acr R、sox S突变与耐药性的关系。方法 使用K-B纸片扩散法筛选临床耐药菌,测定加入泵抑制剂羰基氢氯苯腙(CCCP)后萘啶酸、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的变化,PCR扩增外排泵基因acr A、acr B及其调控基因mar OR、acr R、sox S并测序。结果 159株志贺菌中共筛选出11株氟喹诺酮耐药菌株;加入质子泵抑制剂后2株耐药菌株对氟喹诺酮类抗菌药的MIC下降;7株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC不变;2株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC上升。基因测序发现氟喹诺酮耐药菌株外排泵Acr AB-Tol C调控基因mar OR第36、37、38、39位存在CATT碱基缺失。结论 泵抑制剂可部分抑制外排泵的活性。mar OR突变可能与志贺菌对氟喹诺酮类抗菌药耐药有关。     

荧光定量RT-PCR快速检测B型流感病毒的研究

目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与普通RT-PCR法进行比较。结果:B型流感病毒检测反应的灵敏度为5.0×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为107.8%,5种非B型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论:本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。     

活性氧对蛋白质抗原与其相应抗体反应性增强的效应

牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶经Ｈ＿２Ｏ＿２和抗坏血酸－Ｆｅ￣（３＝）处理后与其相应抗体的反应及与抗狗、抗猪和抗人红细胞铜锌超氧化物歧化酶抗体的交叉反应均显著增强；Ｈ＿２Ｏ＿２－Ｃｕ￣（２＋）和抗坏血酸－Ｆｅ￣（３＋）处理后人血清白蛋白及人ＩｇＧ与其相应抗体的反应也显著增强。结果提示活性氧所致蛋白质抗原与其相应抗体反应的增强可能与某些自身免疫性疾病中抗原抗体复合物的形成有关．     

辐射所致DNA损伤与修复的免疫学检测方法

免疫学方法经诸多研究者努力,现已发展成为检测辐射所致DNA损伤与修复的主要方法之一,并在实际应用中显示出特异性强、敏感性高、样品用量低等显着优点。本文结合基本原理与应用实例介绍了这一方面的研究概况。     

社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株的遗传学分析

金黄色葡萄球菌是社区获得性感染和院内感染的主要致病菌之一。自从1944年从医院分离到了耐青霉素的金黄色葡萄球菌临床株以来，欧洲及世界各地相继报道了许多耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）在院内暴发的事件。上世纪90年代以来开始出现社区获得性MRSA（communityacquired MRSA，CA-MRSA）的报道。     

双碱基延伸法结合荧光偏振法快速检测新甲型HINl耐药位点方法的建立

目的建立一种利用双碱基延伸法与荧光偏振技术（Fluorescence polarization,FP）快速检测甲型H1N1流感病毒NA基因耐药突变位点的新方法。方法从GenBank随机下载30条甲型HINl的NA（neuraminidase）基因序列,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计3条特异引物,其中一对引物通过RT—PCR用于扩增含有耐药位点H275Y的NA基因,第3条引物是应用双碱基延伸终止法与荧光偏振技术检测NA基因对达菲类药物耐药位点H275Y的突变情况,再随机选取50株甲型HINl流感病毒进行检测,与测序结果进行比对,验证检测结果的准确性。结果50株甲型H1N1流感病毒的NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸,未发生HY的替换,在灵敏度与特异性方面,与传统的基因测序结果一致性均达100％。结论本方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,能实现对耐药位点突变的快速、准确检测,可应用于与SNP相关疾病的快速分型和突变位点的实时监测和临床检测。     

利用废弃人红细胞批量生产铜、锌超氧化物歧化酶

本文以干扰素生产中废弃的人红细胞为原料,按乙醇-氯仿沉淀→磷酸氢二钾盐析→丙酮沉淀的操作手续进行了铜、锌超氧化物歧化酶中等规模(300～600毫克)的批量生产。经理化性质鉴定及蛋白纯度分析证实,我们提取的人铜、锌超氧化物歧化酶的比活性和纯度分别可达到2500McCord—Fridovich单位/毫克蛋白和90％以上,聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外吸收光谱等理化性质指标也显示出纯酶的基本特征。     

大肠杆菌外膜表达金属硫蛋白增强重金属镉吸附能力

随着工农业的不断发展，重金属污染日益严重，尤其是土壤和水源中重金属可在农作物和水生动植物中产生累积效应，对人类健康构成潜在威胁。与其他污染物有所不同的是重金属不能被化学或生物降解，因此对它的治理更加困难和复杂。传统上对重金属污染的治理主要采用物理、化学或机械的方法，这些方法不仅造成人力、物力和财力上的极大     

深圳市2006年流行性感冒流行特征分析

目的了解深圳市流感流行动态,探索流行规律,为流感的防治提供科学依据。方法每周统计监测点流感样病例（ILI）数据,采集ILI鼻咽拭子标本,用鸡胚和MDCK细胞同时进行流感病毒分离,采用血凝抑制实验进行流感病毒型别鉴定和测定血清抗体。结果深圳市全年共报告流感样病例（ILI）112651例,占监测门急诊就诊病例总数的6.27%;共分离出病毒154株,病毒分离率为5.33%,其中H1N1亚型103株、B（Victoria）型48株、H3N2亚型3株;共报告流感样病例暴发疫情25起,88%集中在中小学校;一般人群血清抗体GMT水平,甲型均低于1∶40,乙型均低于1∶20。结论深圳市流感监测结果可靠,2006年流感流行高峰为3～6月,H1N1、B（Victoria）为主要流行株。一般人群各型流感抗体水平均偏低。