中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因特性

目的研究中国南方地区H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因分子特征。方法从Genebank中下载中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒和其他国家或地区的16株代表性H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因序列，利用生物信息学软件DNASTAR5．0进行核酸同源性分析，用MEGA3．1进行核酸和氨基酸序列比对和进化树分析。结果中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA蛋白的重链区和轻链区连接肽的序列为LRERRR—KR，与动物分离的高致病性H5N1亚型禽流感病毒和东南亚地区人禽流感病毒的连接肽相比，减少1个碱性氨基酸；共有8个潜在的糖基化位点，抗原决定簇位点有其独特的特征。基因进化树表明中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因位于单一的进化簇，与动物来源的高致病性禽流感病毒HA基因同源性高。结论中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因分子特征一致，有其显著的独有特点。提示候鸟或其他扩散因素在高致病性H5N1亚型流感病毒HA基因的重配方面扮演了重要的作用。     

流感样病例暴发流行的病原学研究与方法比较

目的 对 2007 年 5 月下旬至 6 月上旬深圳市龙岗区某鞋厂流感暴发流行情况进行病原学研究.方法 采集发热患者的鼻咽拭子 27 份,急性期患者血清标本 17 份和恢复期患者血清标本 12 份.27 份鼻咽拭子标本,采用荧光定量 RT-PCR 方法 、胶体金法、MDCK 细胞培养、鸡胚分离培养方法 进行病原学检测;血清标本采用血清学和血凝抑制试验检测.结果 27 份鼻咽拭子标本中荧光定量 RT-PCR 检测阳性 17 份,阳性率为 62.96%(17/27);胶体金法检测阳性 12 份,阳性率 44.44%(12/27);MDCK 细胞分离培养,其中 2 份鼻咽拭子标本中分离出 2 株 H3N2 亚型流感病毒,阳性率 7.41%(2/27);鸡胚分离培养未分离出流感病毒.6 例病人的双份血清学检测结果 显示:恢复期抗体比较急性期抗体有 4 倍或以上增长. 结论 该起流感样病例暴发流行由 H3N2 亚型流感病毒引起.荧光定量 PCR 法的特异性高、灵敏度好,可用于流感病毒的快速检测.     

抑瘤素M在毕赤酵母中的表达及活性鉴定

目的：构建抑瘤素M（oncostatinM,OSM)的酵母表达体系,方法：将人OSM cDNA连入pPIC9K酵母表达载体,转染毕赤酵母（Pichia pastoris),用MD和MM营养缺陷型培养基筛选具有正确表型的重组转化子,用RNA印迹法和蛋白质印迹法鉴定母转化菌株中OSMmRNA转录和OSM相对分子质量。MTT法鉴定OSM蛋白对人黑素瘤细胞生长的抑制活性。结果：构建的毕赤酵母体系可实现人OSM分泌表达,表达量占外分泌蛋白的70％以上,表达蛋白相对分子质量约30000,对黑素瘤细胞生长可产生明显抑制作用。结论：OSM的酵母分泌表达体系表达量可观,表达蛋白集中于培养液上清,便于纯化,是日后进行OSM大规模制备的可行途径。     

一株从死亡黑天鹅中分离出HSN1亚型流感病毒株血凝素基因特性的研究

目的了解从黑天鹅分离H5N1亚型流感病毒株血凝素基因特性。方法用RT-PCR扩增目的基因，用PGBM-TVecTor（美国Promeqa公司）412过夜连接重组质检转入dH5α细菌，筛选阳性菌落，酶切鉴定。送六合通公司自动测序，然后进行进化树分析，并推导出基因树序列。结果从黑天鹅分离出H5N1毒株血凝素的重链区与轻链区连接肽的序列为R—E—R—R—R—K—R，即含一串碱性氨基酸，共有8个潜在的糖基化位点，其中6个位于重链区的第9、10、23、165、193和296位点上；其余2个位于轻链区的第154和213位点上。其HA基因进化树与无论从家禽还是从人中分离的均有差异。结论从黑天鹅中分离的H5N1亚型流感病毒为对禽是高致病性的，他的HA基因不同于从人和家禽中分离出的H5N1毒株。     

耐氟喹诺酮类大肠杆菌mar基因突变的研究

目的：研究多重抗生素耐药（Mar)突变型耐药机制对大肠杆菌临床多重耐药株的影响。方法：药敏试验。外膜蛋白的提取与SDS－PAGE;多重耐药株的转化试验;mar区基因的聚合酶链反应（PCR）扩增与PCR产物DNA序列分析。结果：49株临床耐环丙沙星大肠杆菌中有7株出现Mar耐药特异性蛋白Mrp5,以携带野生型gyrA基因的质粒转化临床多重耐药株LC－1,转化前后LC－1对喹诺酮类药耐水平无差异,PCR扩增及DNA序列分析发现,临床株LC－1的marOR基因存在3处突变。结论：对氟喹诺酮耐药的临床分离大肠杆菌中存在Mar耐药机制,LC－1的marR突变可能是该临床株对多种抗生素多重耐药的原因之一。     

志贺菌属外排泵AcrAB-TolC及其调控基因突变与氟喹诺酮耐药性的关系

目的 探讨临床分离耐氟喹诺酮志贺菌外排泵Acr AB-Tol C基因及其调控基因mar OR、acr R、sox S突变与耐药性的关系。方法 使用K-B纸片扩散法筛选临床耐药菌,测定加入泵抑制剂羰基氢氯苯腙(CCCP)后萘啶酸、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的变化,PCR扩增外排泵基因acr A、acr B及其调控基因mar OR、acr R、sox S并测序。结果 159株志贺菌中共筛选出11株氟喹诺酮耐药菌株;加入质子泵抑制剂后2株耐药菌株对氟喹诺酮类抗菌药的MIC下降;7株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC不变;2株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC上升。基因测序发现氟喹诺酮耐药菌株外排泵Acr AB-Tol C调控基因mar OR第36、37、38、39位存在CATT碱基缺失。结论 泵抑制剂可部分抑制外排泵的活性。mar OR突变可能与志贺菌对氟喹诺酮类抗菌药耐药有关。     

活性氧对蛋白质抗原与其相应抗体反应性增强的效应

牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶经Ｈ＿２Ｏ＿２和抗坏血酸－Ｆｅ￣（３＝）处理后与其相应抗体的反应及与抗狗、抗猪和抗人红细胞铜锌超氧化物歧化酶抗体的交叉反应均显著增强；Ｈ＿２Ｏ＿２－Ｃｕ￣（２＋）和抗坏血酸－Ｆｅ￣（３＋）处理后人血清白蛋白及人ＩｇＧ与其相应抗体的反应也显著增强。结果提示活性氧所致蛋白质抗原与其相应抗体反应的增强可能与某些自身免疫性疾病中抗原抗体复合物的形成有关．     

社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株的遗传学分析

金黄色葡萄球菌是社区获得性感染和院内感染的主要致病菌之一。自从1944年从医院分离到了耐青霉素的金黄色葡萄球菌临床株以来，欧洲及世界各地相继报道了许多耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）在院内暴发的事件。上世纪90年代以来开始出现社区获得性MRSA（communityacquired MRSA，CA-MRSA）的报道。     

双碱基延伸法结合荧光偏振法快速检测新甲型HINl耐药位点方法的建立

目的建立一种利用双碱基延伸法与荧光偏振技术（Fluorescence polarization,FP）快速检测甲型H1N1流感病毒NA基因耐药突变位点的新方法。方法从GenBank随机下载30条甲型HINl的NA（neuraminidase）基因序列,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计3条特异引物,其中一对引物通过RT—PCR用于扩增含有耐药位点H275Y的NA基因,第3条引物是应用双碱基延伸终止法与荧光偏振技术检测NA基因对达菲类药物耐药位点H275Y的突变情况,再随机选取50株甲型HINl流感病毒进行检测,与测序结果进行比对,验证检测结果的准确性。结果50株甲型H1N1流感病毒的NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸,未发生HY的替换,在灵敏度与特异性方面,与传统的基因测序结果一致性均达100％。结论本方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,能实现对耐药位点突变的快速、准确检测,可应用于与SNP相关疾病的快速分型和突变位点的实时监测和临床检测。     

利用废弃人红细胞批量生产铜、锌超氧化物歧化酶

本文以干扰素生产中废弃的人红细胞为原料,按乙醇-氯仿沉淀→磷酸氢二钾盐析→丙酮沉淀的操作手续进行了铜、锌超氧化物歧化酶中等规模(300～600毫克)的批量生产。经理化性质鉴定及蛋白纯度分析证实,我们提取的人铜、锌超氧化物歧化酶的比活性和纯度分别可达到2500McCord—Fridovich单位/毫克蛋白和90％以上,聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外吸收光谱等理化性质指标也显示出纯酶的基本特征。