荧光定量RT-PCR在流感病毒检测上的应用

目的　探讨实时荧光定量RT PCR检测方法在流行性感冒检测诊断上的意义。方法　收集集体暴发疑似流感、SARS患者的咽拭子标本 16起 2 0 7份和双份血清标本 10 4份 ,应用荧光定量RT PCR检测方法、MDCK细胞培养法和血凝抑制试验进行病原学和血清学检测。结果　 2 0 7份集体暴发疑似流感、SARS患者的咽拭子标本中用荧光定量RT PCR检测 ,阳性 79份。阳性率 38 16 % (79 2 0 7)。MDCK细胞培养 ,16起中有 13起共 14 5份咽拭子有 6 2份标本阳性。阳性率 2 9 95 % (6 2 2 0 7)。两者的阳性率差异有显著意义 (χ2 =8.6 4 ,P <0 0 0 5 )。有 9起 10 4份成功的采集了双份血清 ,经HI试验有 6 4份双份血清与H3N2亚型抗原产生血抑 4倍增长 ,阳性率 6 1 5 4 % (6 4 10 4 )。结论　荧光定量RT PCR方法检测流感病毒能够在 3～ 4h内得出结果、且操作方便、特异性强、灵敏度高。因此我们认为实时荧光定量RT PCR方法 ,可作为一种快速的流感病毒检测诊断方法。     

用pProEXHT载体进行人FLT3配体基因的表达与产物的亲和层析纯化

目的 :探讨寡聚组氨酸多肽与目标蛋白融合基因的表达及其产物的金属离子螯合亲和层析纯化方法。方法 :将人FLT3配体 (FL)胞外段cDNA连入 pProEXHT载体 ,转入大肠杆菌实现表达。分离包涵体并进行复性处理后 ,通过Ni2 离子螯合亲和层析纯化融合蛋白表达产物。结果和结论 :6×组氨酸 FL融合蛋白的表达量约占菌体蛋白总量的 15% ,用Ni2 离子螯合亲和层析纯化表达产物 ,一次过柱的纯度可达 90 %以上 ,操作程序简便省时 ,是日后FL基因工程产品大规模制备的可行途径     

深圳市活禽市场活禽经营人员H7N9禽流感病毒抗体水平及感染危险因素调查

目的调查深圳市活禽市场活禽经营人员H7N9禽流感病毒抗体水平,探讨感染危险因素。方法在对活禽市场活禽经营人员问卷调查的基础上,采集血样,用血凝抑制试验检测H7N9禽流感病毒抗体,采用单因素分析和多因素logistic回归对H7N9病毒感染的危险因素进行分析。结果250名活禽市场活禽经营中,男性141人,女性109人,年龄中位数为41岁, 38人（15.2%）H7N9病毒抗体阳性（滴度≥1：160）,男、女各19人。问卷调查发现,236人（94.4%）主要接触鸡,169人（67.6%）接触过鸭,120人（48.0%）接触过鹅,105人（34.1%）接触过鸽子,单因素分析显示接触鸭子、鹅和鸽子为H7N9病毒感染的高危因素,进一步多因素logistic回归分析结果显示,接触鸭子为H7N9病毒感染的高危因素（OR=3.85,95%CI：1.44-10.35,P=0.007）,活禽暴露时间,暴露方式和流感疫苗接种等因素对H7N9病毒感染的影响没有显著性(P>0.05)。结论活禽市场活禽经营人员中存在这一定数量的隐性感染者,接触鸭子为H7N9病毒感染的危险因素 。     

SAPHO综合征15例临床分析

目的:归纳分析SAPHO综合征临床特点。方法:回顾分析15例患者临床资料、实验室检查、影像学检查、治疗及转归。结果:15例患者中女性10例,男性5例,发病年龄26~65岁。骨关节损害表现为前胸壁受累14例,脊柱受累9例,骶髂关节受累7例,外周关节受累5例。除2例患者无皮疹外,其余13例患者均出现掌跖脓疱病。15例患者均给予非甾体抗炎药(NSAIDs),10例加用糖皮质激素及抗风湿药物(DMARDs),3例应用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)拮抗剂。结论:SAPHO综合征临床并非少见,早诊断、早治疗,多数病情可得到有效缓解。     

带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统的初步构建

目的构建带TAP标签流感病毒8质粒反向遗传包装系统，以期应用于流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理的研究。方法两步RT—PCR方法扩增流感病毒8基因，人工合成TAP基因序列，并采用3次PCR的方法融合TAP基因和NP基因。将流感病毒8基因和NP—TAP基因克隆于反向遗传载体PIVVⅡ-1，阳性克隆用PCR和序列测定进行鉴定。结果经PCR和序列分析鉴定，筛选到了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传阳性克隆。结论成功构建了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统，为进一步研究流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理奠定了基础。     

OSM对黑色素瘤的抑制作用与基因-放射治疗效果

目的：通过细菌内同源重组,制备含绿荧光（GFP）基因的CD腺病毒,初步观察其体外杀瘤作用。方法：先构建含CD基因的腺病毒梭载体pAdTrack-CMV-CD,与骨架载体pAdEasy-1在细菌内重组为pAd-CD,经293细胞包装为增殖缺陷性腺病毒,体外感染人结肠癌细胞株LoVo,并给予前药5－FC,观察其体外杀瘤效果。结果：pAdTrack-CMV-CD和同源重组的pAd-CD经酶切鉴定正确,pAd-CD转染293细胞,包装扩散腺病毒后,感染LoVo细胞,予5－FC治疗,4d后在荧光温微镜下观察到转染LoVo和未转染细胞胞均被杀死,并且 这种旁观者效应不依赖于细胞间接解。结论：细菌内质粒同源重组法可以高效制备含绿荧光（GFP)基因的CD腺病毒,体外腺病毒介导CD／5－FC可以杀伤肿瘤细胞,其旁观者效应不依赖于细胞间接触。     

深圳市流感预警机制的应用与探讨

目的　制定符合深圳市特点的流行性感冒（流感）预警机制,尽可能降低流感暴发或流行带来的社会经济损失。 方法　以分析2007年1-8月全市的流感样病例（influenza?鄄like illness, ILI）警戒曲线、流感病毒分离曲线、ILI暴发疫情曲线为基础,应用三级预警机制指标评价流感活动的实际变化趋势。结果　全市ILI监测、病毒分离监测、ILI暴发疫情三者的变化趋势较为一致,均于6月中下旬出现高峰,三级预警机制具有一定的实际指导意义。 结论　深圳市的流感三级预警机制具有较好的灵敏性和可操作性,可为科学防控流感提供重要支持。     

深圳市2002和2003年人群血清流感抗体检测

目的 了解深圳市部分人群的流感病毒抗体水平，为预防和控制疫情提供依据。方法 2002年10月-2003年10月共两次采集人群血清308份，应用近几年国际、国内及广东省流感病毒代表株，以微量半致敏血凝抑制方法进行抗体检测。结果 人群对各型及亚型毒株的抗体阳性率均有上升，其中对A／New Caledonia／20／99（H1N1）的抗体阳性率由40．6％上升至62．1％；对B／HongKong／2001的抗体阳性率由23．8％上升至76.5％；对B／Victoria／504／2000的抗体阳性率由21.3％上升至79．7％；对A／Panama／2007／99（H3N2）的抗体阳性率分别由77．4％升至80．4％。结论 应加强流感病毒抗原变异株和人群流感病毒抗体水平的监测。     

癌基因突变产物的免疫学诊断与治疗意义

癌基因与抑癌基因突变产物是目前肿瘤免疫学研究的热点和前沿领域。本文在简介癌基因突变类型的基础上，着重就其产生物的免疫学诊断与治疗意义进行了阐述和讨论。