RNAi抑制Survivin基因表达对乳腺癌SKBr-3细胞放射敏感性影响的研究

目的:研究利用RNA干扰抑制Survivin基因的表达对人乳腺癌SKBr-3细胞放射敏感性的影响。方法:构建针对Sur-vivin基因的RNA干扰真核表达载体pSU-PER-S1并转染SKBr-3细胞,分别用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Survivin mR-NA和蛋白表达水平的变化;流式细胞仪检测细胞周期;平板克隆形成实验计算细胞存活率,用单击多靶数学模型进行曲线拟合做图,求曲线参数D0、Dq和N值,比较细胞放射敏感性变化。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,pSUPER-S1转染后的SKBr-3细胞中Survivin mRNA和蛋白水平显著下降;流式细胞仪检测结果显示,转染后的SKBr-3细胞G1期阻滞明显〔(74.03±8.91)%〕,高于对照组〔(44.21±12.03)%〕,S期细胞数减少〔(17.11±4.96)%〕,低于对照组〔(43.12±8.64)%〕,P<0.05;经不同剂量γ射线照射后的细胞存活曲线拟合作图后发现,转染后的细胞D0、N和Dq值均下降(D0=1.29,N=4.9,Dq=2.6),与对照组相比(D0=1.56,N=14.85,Dq=5.21)差异有统计学意义(P<0.05),提示细胞放射增敏感性增加。结论:利用RNA干扰技术抑制Survivin基因在乳腺癌SKBr-3细胞中的表达可以增加其对放疗的敏感性。     

磷脂酰肌醇-3-羟基激酶抑制剂LY294002对肝细胞生长因子促人结肠癌细胞SW620增殖和迁移行为的影响

目的探讨磷脂酰肌醇-3-羟基激酶(PI3K)抑制剂LYZ94002在肝细胞生长因子(HGF)促进结肠癌细胞SW620增殖、侵袭中所起的作用。方法分别用噻唑蓝比色法(MTT)、流式细胞术及划痕实验检测结肠癌细胞增殖、细胞周期、凋亡及移行情况。结果 (1)MTT法结果显示,LY294002≥20μmol/L实验组与对照组吸光度(OD)值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)流式细胞术结果显示,LY294002≥20μmol/L实验组与对照组凋亡率及增殖指数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)划痕实验结果显示,LY294002≥40μmol/L实验组与对照组移行距离比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PI3K信号通路抑制剂能够阻断HGF对人结肠癌细胞增殖、凋亡、移行的促进作用。     

胃癌淋巴结转移灶对顺铂体外化疗的药敏性及多种耐药相关因子的表达

目的:探讨胃癌淋巴结转移灶对顺铂(DDP)的体外化疗药敏性及其组织中多种耐药因子的表达.方法:对54例胃癌组织及相应转移淋巴结的肿瘤细胞进行MTT法原代细胞培养体外化疗药敏性实验,检测肿瘤细胞对DDP的体外化疗药敏性;采用免疫组织化学方法检测原发灶、淋巴结转移灶组织中P-gp、GST-π、P53、Survivin、Bcl-2和Bax 6种多药耐药相关因子的表达情况.结果:CDDP对淋巴结转移灶肿瘤细胞的抑制率为(26.10±10.03)%,与原发灶的(27.04±8.37)%比较,差异无统计学意义(t=0.530,P=0.597).胃癌原发灶GST-π表达水平越高药物抑制率越低(β=-2.937,P=0.010);转移淋巴结中P53表达水平越高药物抑制率也越高(β=2.015,P=0.026),Survivin、Bcl-2表达水平越高药物抑制率越低(β分别为-2.652和-3.466,P=0.046和0.002).P-gp、GST-π、Bcl-2和Bax在淋巴结转移灶中的表达程度高于原发灶(Z=2.414,P=0.016;Z=2.218,P=0.026;Z=2.096,P=0.036;Z=3.175,P=0.001);胃癌原发灶、淋巴结转移灶中P-gp、P53、Bcl-2及Bax的表达均呈止相关(rs=0.342,P=0.011;rs=0.712,P<0.001;rs=0.455,P=0.001;rs=0.311,P=0.022).结论:影响胃癌原发灶和淋巴结转移灶中DDP药敏性的耐药相关因子不同.     

康莱特对人肺腺癌细胞A549增殖活性影响的实验研究

目的 观察薏苡仁注射液(康莱特)对人肺腺癌细胞细胞增殖的影响,探讨康莱特抗肺腺癌细胞的作用及机制.方法 A549细胞,分别加入5,10,15,20,25μl/ml康菜特,对照组加等量生理盐水,分别孵育24,48 h,MTT方法测定生长抑制率,流式细胞术测定细胞周期的变化.20 μl/ml康莱特孵育48 h后,收集细胞,RT-PCR、Western blot分别测定PC-NA、P21、P27和P53 mRNA和蛋白的表达.结果 MTT比色法结果显示康莱特对A549细胞具有明显的增殖抑制作用,流式细胞术结果显示康莱特处理后,G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;20μl/ml康莱特处理A549细胞48 h后,PCNA mRNA和蛋白表达显著下降,P21、P27及P53的mRNA和蛋白表达显著上升.结论 康莱特可通过下调PCNA表达、上调细胞周期抑制蛋白P21和P27,以及P53表达,进而影响细胞周期,发挥其抑制肺腺癌细胞增殖的作用.     

薏苡仁注射液对肺腺癌细胞多药耐药性逆转作用的机制研究

目的 观察薏苡仁注射液(康莱特)对人肺腺癌细胞A549多药耐药性(MDR)逆转作用,并对其机制进行探讨.方法 体外培养人肺腺癌细胞系A549并以不同剂量康莱特进行处理,磺酰罗丹明(sulphorhodamine B,SRB)染色法检测药物对各组细胞的抑制率;反转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测多药耐药因子多药耐药基因1(MDR1)、生存素(Survivin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA在各组中表达情况;蛋白质印迹(Western blot)法检测P-糖蛋白(P-gp)、Survivin、Bcl-2、Bax蛋白水平表达,将各组结果进行比较.结果 4组肺腺癌细胞A549的抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05).其中,与空白对照组比较,康莱特低、中、高剂组抑制率降低,差异均有统计学意义(P<0.05).康莱特中、高剂组抑制率比较,差异亦有统计学意义(P<0.05).康莱特低、中、高剂组MDR1、P-gp、Survivin、Bcl-2表达降低,Bax表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 康莱特可抑制肺腺癌细胞生长,该药具有明显的逆转肺腺癌多药耐药性的作用,该作用是通过调节多药耐药因子的表达而实现的.     

胃癌组织铂类药物体外化疗药敏性与多种耐药相关因子表达的关系

目的 探讨铂类药物对胃癌组织的药物抑制率与多种耐药相关因子表达的关系及意义。方法 对68例胃癌新鲜肿瘤组织进行肿瘤细胞原代培养,以顺铂（CDDP）、奥沙利铂（L-OHP）行化疗药敏性实验,并对肿瘤组织行P-gp、GST-π、P53、Survivin和Bcl-2、Bax免疫组化染色。结果 L-OHP对肿瘤细胞的抑制率高于CDDP（t=2.76,P<0.05）。CDDP对胃癌细胞的药物抑制率与GST-π呈负相关（P<0.05）;L-OHP药物抑制率与P-gp、GST-π、Survivin表达呈负相关（均P<0.05）。结论 胃癌的CDDP和L-OHP化疗药敏性存在差异,影响两者药敏性的主要耐药因子也不相同。     

赤芍总苷对人黑色素瘤细胞A375血管生成因子VEGF和Ang-2的影响

目的探讨赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素-2(Ang-2)表达的影响。方法体外培养人黑色素瘤A375细胞,分别加入12.5、25、50、100、200mg/LTPG,对照组加入等量生理盐水,孵育24h、48h后,MTT方法测定生长抑制率;RT-PCR、Western blot分别测定TPG处理48h后VEGF和Ang-2 mRNA和蛋白的表达。结果 MTT结果显示TPG对黑色素瘤细胞增殖有显著抑制作用;RT-PCR、Western blot结果显示,TPG可显著抑制人黑色素瘤细胞VEGF、Ang-2 mRNA水平及蛋白水平的表达。结论 TPG具有显著的抗黑色素瘤瘤血管生成的作用,其机制可能与下调VEGF、Ang-2的表达有关。     

肺癌患者三维适形放疗护理体会

肺癌是当今世界严重威胁人类健康和生命的恶性肿瘤之一,它的发病率在多数国家都有明显增长的趋势,据估计全世界每年新增100万左右肺癌患者.肺癌是目前在我国增长率的最快恶性肿瘤之一,在我国许多大城市,肺癌跃居恶性肿瘤发病率第一位[1].     

薏苡仁注射液(康莱特)联合顺铂对人肺腺癌细胞A549抑制作用及机制

目的:探讨薏苡仁注射液(康莱特)联合化疗药物顺铂(CDDP)对人肺腺癌细胞A549抑制作用的机制.方法:体外培养人肺腺癌细胞系A549并以康莱特、顺铂进行处理,SRB法检测药物对各组细胞的抑制率;逆转录-聚合酶链反应法检测多药耐药因子MDR1、Bcl-2和Bax mRNA在各组中表达情况;Western blot法检测P-gp、Bcl-2、Bax蛋白水平表达;同时检测康莱特对正常细胞的作用.将各组结果进行比较.结果:康莱特组A549细胞存活率较对照组明显降低,康莱特联合顺铂导致细胞存活率进一步下降(均P<0.05),而康莱特对正常细胞无明显抑制作用(P>0.05);康莱特导致A549细胞MDR1和Bcl-2 mRNA水平、蛋白水平均较空白对照组降低(均P<0.05),而Bax mRNA和蛋白水平则升高(均P<0.05);康莱特与顺铂联合作用于A549细胞时这一变化更为显著(均P<0.01);康莱特对正常细胞系的耐药因子则无明显作用(均P>0.05).结论:康莱特可抑制肺腺癌细胞生长,该药具有明显的逆转肺腺癌多药耐药性的作用,与化疗药物联合使用可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.