EB病毒基因Z2A原核表达载体的构建与表达(英文)

目的构建EB病毒基因LMP2A、BZLF1重组分泌性表达质粒Ag85B,然后将它成功转化成卡介苗。方法分别用PCR扩增Ag85B信号序列和LMP2A和BZLF1融合基因,将Ag85B信号序列与大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261重组构建获得质粒pMVS。然后将LMP2A和BZLF1融合基因Z2A与质粒pMVS重组获得质粒pMVZ2A,将其电转化卡介苗,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其结果进行分析。结果信号序列与LMP2A和BZLF1融合基因被正确插入分泌表达载体pMV261。重组质粒经限制性内切酶双酶切、PCR扩增、基因测序等鉴定。蛋白纯化后可得到一条带。结论 pMVZ2A在BCG中能够分泌表达,本研究为获得抗结核杆菌和EB病毒的双价疫苗奠定了基础。     

GM-CSF与BZLF1融合基因修饰的重组BCG的构建与表达

目的将人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因(GM-CSF)与EB病毒即刻早期基因(BZLF1)重组为融合基因GCBF,并转化入卡介苗(BCG)中进行表达。方法用随机引物Oligo(d T)15进行RT-PCR,分别获得人GM-CSF和BZLF1编码序列的c DNA。将纯化GM-CSF和BZLF1 PCR扩增产物插入分泌表达载体p MV261,并转化入感受态细胞Escherichia coli DH5α(E.coli DH5α),在LB培养基上进行卡那霉素抗性选择,测序正确的序列进行剪接式重叠延伸,将目的基因GM-CSF和BZLF1编码经多肽接头(Gly4Ser)3序列连接,构建融合基因GCBF,将GCBF克隆至p MV261,转化感受态细胞E.coli DH5α,在LB培养基平板上进行卡那霉素抗性选择,阳性克隆提取质粒后转化感受态BCG,western-blot检测GCBF在r BCG中的表达。结果目的基因GM-CSF和BZLF1 RT-PCR产物大小分别为461 bp和788bp,与预期值一致。构建的重组质粒经双酶切、扩增及测序鉴定证实,融合基因GCBF(1209bp)正确插入载体,成功转化入BCG感受态细胞,且被正确表达。结论融合基因GCBF修饰的r BCG构建及表达成功,为进一步探讨r BCG杀伤EB病毒阳性肿瘤的免疫活性研究奠定了实验基础。     

医学微生物学设计性实验教学模式的实践

为了深化高校实验教学改革,将设计性教学模式引入医学微生物学实验教学中,强调应使学生首先掌握基本实验技能,再选择合适题目开展设计教学活动,鼓励学生设计与生活实际联系的实验项目.通过与验证性实验教学模式相比,设计性教学模式更能培养学生独立思考和创新能力.     

人及多种动物胆汗诱导出细菌L型的实验研究

利用人与狗、猪、家兔、豚鼠、鸡等动物胆秀导出大肠杆菌，绿脓植 菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌的Ｌ型。实验表明上述动物可作为细菌Ｌ型与胆系感染关系研究的动物模型，且人及动物胆汁也可作为革兰氏阴性细菌Ｌ型诱导及其保存的一种较为理想的方法。     

蛋白胨的质量对靛基质试验的影响

靛基质试验是细菌学实验鉴别大肠杆菌、沙门氏菌等常用的生化试验之一,蛋白胨是靛基质试验所用培养基的主要成分,其质量好坏直接影响实验结果。多年来我们用不同厂家生产的蛋白胨做靛基质试验,结果玫瑰红靛本质的颜色有深有浅,出现的速度也快慢不一,快的30秒,慢的达30分钟,为了选择比较可靠的蛋白胨,最近我们用现有的4种不     

植物硅酸体的研究进展

植物硅酸体是充填于高等植物组织细胞中的非晶质二氧化硅矿物。在禾本科植物中含量丰富。现概述植物硅酸体这门新兴学科的国内外研究进展，并介绍植物硅酸体分析在中药鉴定等方面的初步应用。     

细菌L型感染与男性不育关系的探讨

目的：探讨细菌Ｌ型感染与男性不育的关系。方法：对６２例男性精液进行了细菌Ｌ型培养，并对分离到的细菌进行了药敏分析。结果：检出细菌Ｌ型１３株，其中同时检出细菌型６株，７例仅分离出Ｌ型。在检出的１３株细菌Ｌ型中，经返祖鉴定为金黄色葡萄球菌６株、表皮葡萄球菌３株、大肠杆菌３株，棒状杆菌１株结论：提示细菌Ｌ型感染与男性不育存在一定关系。     

PCR检测慢性淋球菌感染的临床应用

<正>近年来国内淋病的发病率明显上升,据报道,淋球菌感染约占男性秘尿系感染的30.1％,急性淋病的实验室诊断,分泌物常规涂片及淋病奈瑟氏菌培养大多能正确诊断,但慢性淋病的诊断颇为困难,分泌物涂片不可靠(尤其女性),可造成假阳性;细菌培养阳性率偏低,常会引起漏诊,且繁琐费时,不利于快速诊断,我们采用PCR技术与培养法和涂片法同时对58例可疑慢性淋病患者的分泌物进行淋球菌检测,旨在探讨聚合酶链反应对慢性淋病的诊断价值。     

GM-SCF与LMP2A融合基因GC2A重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的:构建人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因与EB病毒基因LMP2A融合基因GC2A的重组腺病毒表达载体。方法:将构建的融合基因GC2A定向亚克隆至质粒pAdTrack-CMV上,经酶切及电泳检测后,PmeL酶切pAdTrack-CMV-GC2A,与质粒pAdEasy-1一起电转化E.coli.BJ5183,筛选重组菌,经PacⅠ酶切鉴定后用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组腺病毒vAd-GC2A,采用pAdTrack-CMV-GC2A中报告基因GFP的表达,观测其表达情况。结果:采用内切酶Bg1Ⅱ和EcoRⅤ对质粒pAdTrack-CMV-GC2A进行双酶切分析,电泳后可观察到约1 961和9 200bp的片段。重组腺病毒载体经PacⅠ酶切后观察到约33kb的DNA片段和4.5kb的DNA片段,说明pAdTrack-CMV-GC2A和pAdEasy-1的重组发生在ori和右臂区,pAd-GC2A经PacⅠ酶切线性化后,磷酸钙法转染293细胞,56h后在荧光倒置显微镜下可看到有绿色荧光出现,说明已转染成功,并能在293细胞中表达。结论:融合基因GC2A正确插入,真核表达载体vAd-GC2A成功构建,在293细胞中包装获得重组腺病毒。