一种研究耐药性整合子整合功能体系的建立

遗传物质在菌种内以及菌种间的水平传播，是细菌获得新耐药性的重要手段。耐药性快速广泛地传播以及在不同菌种间出现非常相似的耐药方式，说明了上述机制的重要性。细菌可以通过基因突变的方式获得耐药性，然而整合子通过捕获多种耐药性基因盒在临床菌株产生多重耐药性上具有重要意义。Hall和Collisl。将整合子定义为由一系列遗传元件构成的能够识别和捕获移动性基因盒的位点特异性重组系统。一个整合子包括编码整合酶（intI）的基因及其临近的重组识别位点（attI）。整合子不一定包括基因盒，但当基因盒整合入整合子时，这些基因盒就成为整合子的一部分。     

全自动血液分析流水线血片复检规则的设置及临床应用探讨

目的探讨通过软件设置合理的血液分析仪复检规则,对血液分析仪检测结果异常的标本进行自动筛选和标记,并用自动推片染色仪进行推片和染色以观察细胞形态学异常,用显微镜计数方法证实血细胞计数的异常,从而达到提高工作效率保证血液分析结果的准确性。方法利用Sysmex XE-2100血液分析仪的报警系统,结合国际实验血液学学会（ISLH）推荐的41条复检规则,并结合本科室实际检测患者的特点,制定出了适合我科的复检规则。并根据美国临床和实验室标准化委员会（CLSI）推荐的白细胞（WBC）分类方法和ISLH推荐血涂片阳性标准,并参照《全国临床检验操作规程》推荐的血细胞计数方法,对1300份标本中符合复检标准的“阳性”样本进行对应的复检,对不符合复检标准的“阴性”样本仅进行形态学检查。结果该套规则的阳性预示值为76．63％,阴性预示值为98．50％,该规则的复检率为28．3l％,诊断特异性为89．34％,诊断灵敏度为96．25％,总有效率为77．15％。结论我室制定的针对XE-2100血液分析仪的复检规则,能够有效地筛选出真正异常样本,使操作人员在有限的时间内对真正异常的标本进行复检,达到提高工作效率,保证血液分析结果准确性的目的。     

新的细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布

目的 研究细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布及对细菌耐药性的影响.方法 随机收集上海华山医院2004、2007和2010年从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌共300株,收集同时期社区健康人群的鼻咽拭子分离鼻腔内定植的金黄色葡萄球菌170株.按照国际通用的MLST以及葡萄球菌A蛋白序列分析(spa typing)方法进行克隆株的鉴定分析.通过苯唑西林MIC值测定方法对MRSA进行检测.采用PCR结合测序方法对金黄色葡萄球菌携带sasX基因情况进行分析,采用纸片琼脂扩散法药敏试验分析临床sasX阳性和sasX阴性金黄色葡萄球菌对抗菌药物的耐药性.结果 300株从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离到的致病性金黄色葡萄球菌克隆分型以ST239(110株,36.7％)和ST5(122株,40.7％)为主.2004至2010年,sasX基因在致病性的金黄色葡萄球菌中的阳性率从17％上升至39％,sasX基因在健康人鼻腔内分离的金黄色葡萄球菌中阳性率平均为0.59％.ST239中sasX的阳性率从47.2％上升至83.8％.携带sasX基因的MRSA百分率从26.4％上升至50.8％,携带sasX基因的MSSA的比率只约占10％.sasX基因阳性组对部分目前临床常用的抗菌药物的耐药性高于sasX基因阴性组.结论 sasX基因主要存在于医院环境内致病性的金黄色葡萄球菌中,SasX可能是金黄色葡萄球菌在医院环境内持续感染毒力因子之一,sasX基因的存在与细菌的耐药有关.     

冷凝集和红细胞碎片对血液分析仪测定干扰案例报道

目的探讨血液检验中红细胞碎片、冷凝集影响因素的分析和处理。方法通过仪器提示的红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞平均体积(MCV)异常红细胞参数的结果,仪器直方图,标记信号,结合血片镜检,去除干扰。结果冷凝集引起红细胞假性降低及MCHC假性升高;红细胞碎片引起红细胞假性降低,影响红细胞MCHC和MCV值,并引起血小板计数假性增高。结论能更及时、有效地发现各种因素干扰血液分析仪测定产生的红细胞参数假性增高或降低,并通过对标本的处理纠正检测结果,为临床提供有价值的数据。     

SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测脑胶质瘤中RASSF1A mRNA

目的　建立检测RASSF1A(RASassociationdomainfamily 1ARASSF1A)mRNA的SYBRGreenⅠ实时定量PCR的方法 ,了解脑胶质瘤中RASSF1A的表达水平 ,研究RASSF1AmRNA的表达和肿瘤恶性程度的关系。方法　构建克隆载体作为定量模板 ,RocheLightCycler 定量检测 4 8例不同恶性程度胶质瘤组织和 6例正常脑组织标本。结果　 4 8例脑胶质瘤组织中有 5例未检出RASSF1AmRNA。与内参照三磷酸甘油醛脱氢酶基因GAPDH(glyceraldehycle 3 phosphatedehydrogenase,GAPDH)比较后 ,RASSF1AmRNA的表达范围从 0 .0 8～ 1.0 0 /μg ,均值为 (0 .5 0± 0 .0 0 4 ) /μg。 6例正常脑组织标本均有RASSF1AmRNA的表达 ,范围从 0 .70～ 1.80 /μg ,均值为 (1.0 5± 0 .0 8) /μg。各期胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织 ,但胶质瘤不同病理级别组之间的差异无显著意义。结论　胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织。成功地建立了SYBRGreenⅠ实时定量检测RASSF1A基因表达方法 ,为研究RASSF1A表达水平下调的机制、表达水平和肿瘤的恶性程度、转移、预后等的关系打下基础     

VEB-3型与VEB-1型超广谱β-内酰胺酶生化特性的比较

目的研究VEB-3型超广谱p内酰胺酶（EsBL）的生化特性，并与VEB-1型ESBL进行比较。方法将blaVEB-3和blaveb-1。基因连接至pET28a载体上，并用重组质粒转化大肠埃希菌BL21进行克隆表达，分别挑选blaVEB-3或blaVEB-1阳性表达的菌落测定p内酰胺类抗生素对其最低抑菌浓度（MfC），同时提取酶蛋白进行等电点和酶动力学分析。结果VEB-3和VEB-1型ESBL具有基本一致MIC和相同的等电点（pI=7．45），但两者的酶动力学性质存在一定的差异：对头孢他啶和头孢噻肟，VEB-3较VEB-1表现出更高的亲和力，两者Km相差一倍左右；对头孢噻吩，VEB-1比VEB-3更具亲和力；而对阿莫西林，VEB-1型ESBL表现出很高的亲和力，而VEB-3仅有低的亲和力，两者Km相差20多倍。结论VEB-3和VEB．1型ESBL具有相同的等电点，不同的动力学参数，blaVEB-1基因中Leu56→Phe突变可能导致了两者酶动力学性质的差异。     

DNA甲基化与人类肿瘤

DNA甲基化不仅是最常见的真核DNA的修饰方式,而且正常的甲基化还维持着细胞和器官的正常功能.如果正常的甲基化模式遭到破坏,就会导致一些疾病的发生,如智力发育迟缓、免疫缺陷、散发性或遗传性肿瘤等.无论是生长调节基因的异常失活,还是整个染色体的去稳定,这些异常甲基化的无序状态都能促进肿瘤细胞的形成.一些基因的异常甲基化还与肿瘤化疗效果和患者的生存期直接相关,因此甲基化与人类肿瘤的关系越来越受到人们的重视.     

肠球菌耐药及临床对策

肠球菌广泛分布于自然界和温血脊椎动物肠道中。临床多见于腹腔和盆腔感染的标本。肠球菌传统地被认为是对人类无害的共栖菌 ,但许多研究证明其具有致病力 ,是医院感染的第二大致病菌和医院菌血症的第三大致病菌[1,2 ] 。近年来 ,由于免疫抑制剂的广泛应用 ,侵入性治疗机会的增     

肠球菌耐药及临床对策

肠球菌广泛分布于自然界和温血脊椎动物肠道中。临床多见于腹腔和盆腔感染的标本。肠球菌传统地被认为是对人类无害的共栖菌，但许多研究证明其具有致病力，是医院感染的第二大致病菌和医院菌血症的第三大致病菌。近年来，由于免疫抑制剂的广泛应用，侵入性治疗机会的增加，以及过度使用氟喹诺酮类和口服头     

trap基因表达在表皮葡萄球菌生物膜形成及附属基因调节(agr)系统活化中的作用

目的研究表皮葡萄球菌trap基因表达与生物膜形成的相关性及其对agr系统的活化作用。方法采用微量板半定量法检测表皮葡萄球菌生物膜表型，二维电泳和高灵敏度的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析比较表皮葡萄球菌标准株蛋白质表达谱，实时定量逆转录PCR检测trap基因和RNAⅢ的转录水平，CLUSTALX对表皮葡萄球菌trap基因与金黄色葡萄球菌序列进行分析，Mega软件构建进化树。结果比较分析形成生物膜的表皮葡萄球菌ATCC 35984株与不形成生物膜的ATCC 12228株生长中期的蛋白质组，发现ATCC 35984株的TRAP蛋白量明显高于ATCC 12228株。转录水平的检测显示ATCC 12228株和生物膜阳性临床SE1457、SE671株的trap基因均低转录，但RNAⅢ的转录水平未降低。SE1457株agr系统突变后，RNAⅢ的转录明显降低，trap基因的转录无变化。RNAⅢ的转录随细菌生长变化而增加，trap基因转录保持不变。trap序列分析显示其在表皮葡萄球菌与金黄色葡萄球菌中较为保守，但存在明显的进化距离。结论在本论文所研究的表皮葡萄球菌菌株中，trap基因的转录和翻译与细菌生物膜的形成不存在直接的调控相关性；并提示TRAP蛋白不是表皮葡萄球菌agr系统活化所必需的细菌产物；表皮葡萄球菌trap基因序列与金黄色葡萄球菌之间存在差异，可能与其功能差异相关。