健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体MIF调控肝Kupffer细胞TGF-β1表达的研究

目的 通过细胞实验研究健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体(CT26-exo)中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对肝Kupffer细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法 采用CT26-exo干预肝Kupffer细胞,反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝Kupffer细胞中TGF-β1 mRNA表达;进一步采用小干扰核糖核酸(siRNA)干扰技术敲低CT26细胞MIF基因表达后,用其外泌体干预Kupffer细胞,RT-PCR及酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Kupffer细胞TGF-β1表达;用不同浓度的健脾消癌方含药血清干预后,采用RT-PCR及蛋白免疫印迹法(WB)检测CT26细胞及其外泌体中MIF表达;用含药血清干预后的CT26-exo干预Kupffer细胞,RT-PCR及ELISA检测Kupffer细胞TGF-β1表达量。结果 CT26-exo干预后,小鼠Kupffer细胞TGF-β1 mRNA表达升高(P<0.05);敲低CT26细胞MIF基因表达后,其外泌体对Kupffer细胞中TGF-β1的上调作用减弱(P<0.05);20%的健脾消癌方含药...     

T抗原检测在溃疡性结肠炎中的临床意义

有关T抗原检测在结、直肠腺癌和息肉中的临床意义我们已作过报道[1，2]。但T抗原在溃疡性结肠炎（溃给）中的阳性率及其临床意义尚无较系统的报道。我们对28例演给病人及100例对照者的直肠粘液中的T抗原作了检测，并讨论了T抗原检测在清结中的临床意义对象与方法溃结组均为本院门诊病人。因持续或反复发作的粘液血便、腹痛等在本院作结肠镜检查。每例病人的结、直溃疡数均》3个，溃疡周围粘膜充血水肿。部分病人的结、直肠粘膜呈细颗粒状，质脆易出血。结肠镜活检病理示粘膜急性炎症、溃疡，5例病人有隐窝脓肿或杯状细胞减少。全部病人临…     

荧光定量RT-PCR检测人组织因子 mRNA

目的　建立检测组织因子 (tissuefactor ,TF)mRNA荧光定量的方法 ,了解组织中TF的表达水平 ,研究TFmRNA的表达与肿瘤的关系。方法　构建克隆载体 pUC TF作为定量模板 ,在GeneAmp 5 70 0型检测仪上定量检测 4 2例不同恶性程度胶质瘤组织标本 ,5例正常脑组织标本和人恶性胶质瘤细胞株U 2 5 1。结果　 4 2例肿瘤组织均有mRNA的表达 ,范围从 3 .6× 10 5～ 8.8× 10 7拷贝 / μgRNA ,均值为 2 .9× 10 6 拷贝 / μgRNA ,且拷贝数与恶性程度成正比 ;5例正常脑组织中 ,1例检测不出 ,其他 4例的强度为 3 .8× 10 3～ 5 .1× 10 4拷贝 / μgRNA ,均值为 6.2× 10 3拷贝 / μgRNA ;胶质瘤细胞株U 2 5 1的强度为 2 .8× 10 6 拷贝 / μgRNA。 结论　成功地建立了荧光定量检测TF基因表达方法 ,检测结果可用绝对拷贝数表示 ,定量准确可靠。TFmRNA荧光定量测定方法的建立为研究TF与胶质瘤等肿瘤恶性程度及转移的关系打下了基础     

鲍曼不动杆菌基因同源性研究

目的分析鲍曼不动杆菌的基因同源性,并对其进行分子分型。方法采用重复序列聚合酶链反应技术（rep—PCR）,分别以基因外重复回文序列（REP）和肠杆菌基因间重复一致序列（ERIC）为引物,对122株鲍曼不动杆菌基因组DNA进行扩增并分型。结果REP—PCR将鲍曼不动杆菌分为14种基因型（A～N）。其中H型含98株,为主要的流行型别,并可分为6个亚型;ERIC—PCR将菌株分为13种基因型（A’～M’）,其中L’型100株,为主要的流行型别,并可分为5个亚型。其余菌株在其他基因型中均为零星分布。结论在鲍曼不动杆菌基因同源性分析中,REP—PCR的分辨率较ERIC—PCR高;同时表明我院存在着某一基因型鲍曼不动杆菌的感染流行,估计该型菌株可能以克隆株的形式播散。     

罗氏电化学发光检测系统检测泌乳素的方法学评价及参考范围建立

目的按美国病理家协会（CAP）对实验室的要求,对罗氏电化学发光系统检测泌乳素（PRL）的方法进行评估和建立本实验室的参考区间。方法取中、低值患者混合血清,分别进行批内20次和连续20 d检测,统计分析批内变异系数（CV）和日间CV;用不同浓度低值血清连续检测10 d,统计分析检测功能灵敏度;将高、低值血清按一定比例混合,检测PRL,回归分析确定测量范围;将中值血清按一定比例稀释后检测PRL,分析稀释后样本和原始样本结果的符合程度,得出临床可报告范围（CRR）;取292名健康人群样本检测PRL,统计分析建立参考范围。结果中、低值批内CV分别为0.95%、1.16%,日间CV分别为2.39%、3.14%;功能灵敏度为0.065μg/L;分析测量范围（AMR）为0.105-452.88μg/L;CRR为0.065-4 528.80μg/L;本实验室的参考区间男性为3.86-22.80μg/L,女性为4.61-30.74μg/L。结论本系统检测性能符合CAP要求,参考区间上限略高于厂家提供的参数,说明厂家提供的参考区间不可直接引用。     

健脾消癌方对结肠癌外泌体诱导HFL1活化成CAFs的影响

目的:探讨健脾消癌方对人结肠癌细胞(HCT116)来源外泌体诱导正常人胚肺成纤维细胞(HFL1)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化的影响。方法:以13.1 g·kg~(-1)的健脾消癌方灌胃SD大鼠以制备含药血清,采取超高速离心法分别提取含10%无外泌体血清培养的HCT116细胞外泌体及含20%健脾消癌方含药血清培养的HCT116细胞外泌体,纳米颗粒跟踪分析仪(Zetaview)检测外泌体的粒径分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定外泌体的标志蛋白凋亡转接基因2互作蛋白X(Alix),热休克蛋白70(HSP70),肿瘤易感基因101蛋白(TSG101),荧光显微镜观察HFL1对细胞膜染色试剂盒(PKH67)标记的外泌体的摄取情况;将HFL1细胞分6组:空白组,转化生长因子-β1(TGF-β1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体4 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体4 mg·L~(-1)组,均干预48 h,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白和mRNA的表达水平。结果:Zetaview检测粒径分布主要集中在50～100 nm,结合标志蛋白Alix,HSP70和TSG101的表达证实其为外泌体,HFL1细胞与外泌体共孵育后,荧光显微镜下可看到大量外泌体被HFL1细胞所摄取;与空白组比较,TGF-β1组和TGF-β1联合HCT116外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA表达水平升高(P0.05);与TGF-β1联合HCT116外泌体组比较,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA水平下降(P0.01)。结论:人结肠癌细胞外泌体联合TGF-β1可诱导HFL1活化成CAFs,健脾消癌方可通过影响α-SMA的表达水平而降低HFL1的活化能力从而达到拮抗结肠癌肺转移的作用。     

临床生化试剂盒质量评估方法

当前市售出现了许多生化试剂盒,如何判断其质量优劣成为保证检验质量的首要问题。本文根据作者多年来研制,鉴定和使用临床生化试剂盒的经验,从试剂盒的线性测定范围、准确度、精密度,干扰物试验、稳定性五个方面介绍生化试剂盒的评估法。     

凋亡调节蛋白的表达与K562／VCR多药耐药性的关系

目的探讨K562/VCR细胞中凋亡调节蛋白表达的变化与其多药耐药性(MDR)的关系。方法通过免疫细胞化学法和免疫印迹法(westernblot)对凋亡调节蛋白Bcl-2、Bcl-X     

臭牡丹黄酮类化合物通过调控CXCR4对A549转移能力的影响

目的:探讨臭牡丹黄酮类化合物通过调控CXCR4对A549转移能力的影响。方法:采用siRNA技术将A549细胞CXCR4基因沉默后,设立实验分组,为A549对照组、A549+臭牡丹黄酮组、A549-CXCR4沉默组、A549-CXCR4沉默+臭牡丹黄酮组。每组加入100ng/ml的SDF-1处理48h后,Transwell检测各组A549细胞侵袭能力,Western Blot法检测各组CXCR4、MMP-9蛋白表达情况。结果:与A549对照组相比,加入臭牡丹黄酮后A549其体外侵袭能力下降,沉默CXCR4后,A549细胞侵袭能力显著下降,差异均有统计学意义(P 0. 01);与A549对照组相比,A549+臭牡丹黄酮组能降低CXCR4和MMP-9的表达,A549-CXCR4沉默组与A549-CXCR4沉默+臭牡丹黄酮组CXCR4和MMP-9的表达明显降低。结论:臭牡丹黄酮类化合物通过下调CXCR4表达,降低MMP-9蛋白表达,进而降低A549侵袭能力可能是其治疗肺癌的作用机制之一。     

SHV-12型超广谱β-内酰胺酶特性的研究

目的研究SHV-12型超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的特性。方法将blaSHV-12基因连接至pET28a载体上，并用重组质粒转化大肠埃希菌BL21进行克隆表达，挑选blaSHV-12阳性表达的菌落，提取其酶蛋白进行等电点测定和酶动力学分析。结果SHV-12型ESBL等电点为8．2。同时，在所测的几种抗生素中，该酶时头孢他啶和头孢噻肟的Km相同且最小；对头孢噻吩，有着最大的Vmax／Km；而对阿莫西林，表现出最大的Km和最低的Vmax。结论SHV-12型ESBL对头孢他啶和头孢噻肟具有高的亲和力，而对头孢噻吩有最大的催化效能。