AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进鼻咽癌细胞的增殖

目的：探讨Ig 样结构域 2 黏附分子（adhesion molecule with Ig like domain 2,AMIGO2）在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞增殖中的作用及其机制。方法: 选用2017年9月至11月福建省肿瘤医院收集的10例NPC组织和10例正常鼻 咽黏膜上皮组织标本,以及NPC细胞系CNE-1、CNE-2、SUNE-1、 6-10B、 C666-1和人永生化鼻咽黏膜上皮细胞株NP69, 用qPCR法 检测NPC组织和细胞中AMIGO2 mRNA的表达。构建慢病毒载体干扰AMIGO2表达, 用qPCR法验证其干扰效率; 用CCK-8 法、克隆形成及流式细胞术检测干扰AMIGO2表达对NPC细胞增殖、克隆形成和凋亡的影响, 用 Western blotting 检测干扰 AMIGO2 表达对 NPC 细胞增殖及 PI3K/AKT/mTOR 信号通路相关标志蛋白表达的影响。结果: AMIGO2在NPC组织和 CNE-2和SUNE-1细胞中高表达（均P<0.01）。慢病毒AMIGO2感染后,CNE-2和SUNE-1细胞的AMIGO2干扰效率均达50%以 上。干扰AMIGO2表达,显著降低CNE-2和SUNE-1细胞增殖及克隆形成能力（均P<0.01）、明显提高细胞的凋亡率（均P<0.01）; 降低 SUNE-1 细胞中PI3K、AKT和mTOR磷酸化蛋白的表达水平 （均P<0.01）、下调survivin 和 PCNA 蛋白的表达水平（均P<0.01）。 结论：AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进NPC细胞增殖并抑制其凋亡,提示AMIGO2可能是NPC治疗的潜 在靶点。     

分化抑制因子1和3通过Wnt/β联蛋白和Shh通路共同调节结直肠癌细胞的干性

目的 探讨分化抑制因子3(Id3)协同Id1对结直肠癌细胞干性的影响,并阐明其可能的机制.方法 应用慢病毒感染系统Id1短发夹RNA(shRNA)质粒构建Id1单基因敲减(sh-Id1)、sh-Id3和双基因敲减(sh-Id1Id3)的肠癌HCT116细胞株,荧光显微镜下观察荧光强度,实时荧光定量PCR和Western...     

西妥昔单抗应用中严重皮肤毒性一例

患者男性,47岁,治疗前诊断为结肠癌,肝和腹膜后淋巴结转移。既往接受5-氟尿嘧啶、亚叶酸钙和奥沙利铂（FOLFOX方案）化疗,被证实疾病进展。患者没有不可控制的内科疾病。此次接受的西妥昔单抗（初始剂量为400mg／m^2,之后每周250mg／m^2）联合5-氟尿嘧啶、亚叶酸钙和伊立替康（FOLFIRI方案）的治疗是通过右颈内中心静脉导管输入的。患者首先在固定中心静脉导管的胶贴（商品名：优韧宁,法国优格公司生产,约7cm×4cm）及其周围出现红斑。     

应用血袋法采集脐血的方法探讨

脐血即采自和胎儿已断离的胎盘和脐带的血。自本世纪30年代以来,人们一直关注通常被废弃的脐带血,并试图将之用于临床。随着对脐血的基础研究的日益深入,80年代起,脐血开始应用于临床,并在治疗再生障碍性贫血、白血病等方面,取得一定的疗效。由于脐血含有丰富的原始造血细胞,可用于支持骨髓重建,使受体获得长期造血功     

HCC患者VEGF水平检测的临床应用

目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平与原发性肝细胞癌(HCC)和病毒性肝炎的相关性.方法 选用酶联免疫吸附定量法检测30例原发性肝癌患者和32例病毒性肝炎患者血清的VEGF水平.结果 HCC组血清VEGF表达水平(193.9±104.1)ng/L分别与急性肝炎组(148.5±70.6)ng/L和慢性肝炎组(136.1±40.1)以及对照组(13214±47.8)比较,均有显著性差异(P<0.01).发现肝肿瘤>5cm的患者血清VEGF水平比其直径<5cm直径的患者显著增高,提示血清VEGF水平随肿瘤大小而增加.结论 检测原发性肝癌和不同肝炎患者血清的VEGF水平对判断肝病的恶性程度及肿瘤大小有临床意义.     

流式细胞微球阵列术检测肝癌组织中细胞因子水平及其意义

目的应用流式细胞微球阵列术(CBA)检测原发性肝细胞癌组织中细胞因子的表达水平,探讨细胞因子改变在肝癌组织免疫微环境中的意义。方法收集36例原发性肝细胞癌的癌组织及非癌组织标本,采用流式细胞术检测组织中浸润免疫细胞的比例,CBA检测肝癌组织和非癌组织中Th1(IL-2、TNF-α、IFN-γ)、Th2(IL-4、IL-6、IL-10)、IL-17A细胞因子水平,并比较分析。结果肝癌组织中IL-6、IL-10和TNF水平分别为(292.49±325.29)pg/ml、(6.09±3.88)pg/ml和(9.55±5.60)pg/ml,比正常非癌组织的(6.82±2.69)pg/ml、(2.99±0.60)pg/ml和(3.50±0.77)pg/ml显著升高(P均<0.01),肝癌组织IL-2、IL-4及IL-17A水平分别为(4.73±0.26)pg/ml、(3.25±0.26)pg/ml和(2.05±0.29)pg/ml,显著低于正常非癌组织(P均<0.01)。而IFN-γ水平虽然较正常非癌组织高,但差异无统计学意义(P>0.05)。肝细胞癌患者CD3+T细胞、CD4+Th细胞在癌组织中的比例均高于相应的非癌组织,而CD8+细胞在癌组织中的比例较低(P<0.05);不同病理分期的细胞因子水平无统计学差异(P>0.05)。结论肝癌组织中抗肿瘤效应性细胞比例下降,Th1/Th2比例失衡,且向Th2方向漂移,导致肿瘤的发生、发展。肝癌组织微环境中细胞因子水平与肿瘤病理分期无关。     

TPO、PDGF、IL-11在脐血巨核细胞生长和分化中的作用

目的 比较血小板生成素（TPO）、血小板源性生长因子（PDGF）、白细胞介素-11（IL—11）在促进巨核系增殖、分化及成熟过程中的不同效果，初步探讨巨核细胞分化过程中相关信号通路蛋白的表达。方法用免疫磁珠法分离纯化脐血CD34^＋细胞，在液体培养体系中经TPO、PDGF-BB、干细胞因子（SCF）、IL-1β、IL-3、IL-6及IL—11等细胞因子组合的诱导，检测有核细胞（NC）总数和CD41^＋、CD61^＋表达，蛋白印迹实验（Westernblot）分析巨核细胞分化过程中相关信号通路蛋白的表达。结果 TPO对巨核系的扩增效果明显强于PDGF和IL-11，而PDGF、IL—11的扩增效果差别不大；含IL—11的因子组，NC及CD41^＋、CD61^＋细胞的总数都有明显增加，但CD41^＋、CD61^＋细胞比例不高；脐血CD34^＋细胞在TPO、SCF、IL-1β、IL-3、IL-6及IL—11等因子作用下，随着培养时间的延长，促分裂原活化蛋白激酶42／激酶44（MAPKp42／p44）蛋白表达并无明显改变，蛋白激酶B蛋白亦未见明显变化，但磷酸化的p42和p44的表达却明显增加。结论 在体外诱导脐血CD34^＋细胞向巨核系定向分化过程中，TPO起着最重要的作用；TPO联合其他造血生长因子刺激脐血CD34^＋细胞向巨核细胞分化和增殖过程中，刺激了MAPKp42／p44分子的磷酸化，从而激活和维持巨核细胞的增殖。     

CIK细胞的体外扩增及其抗肿瘤特性的研究

目的　观察CIK细胞的体外增殖能力及其抗肿瘤特性。方法　用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞 ,加入不同的细胞因子 (IFN、IL 1、IL 2、CD3 mAb) ,诱导生成CIK细胞 ,观察CIK细胞的扩增情况 ,用流式细胞仪检测其表面标志 ,MTT法测定其杀瘤活性。结果　CIK细胞具有较强的扩增能力 ,经过 30天培养 ,总的细胞数可扩增至 70多倍 ;CIK细胞是一群异质细胞群 ,CD3 + CD56+ 细胞为其主要的效应细胞 ,经过 30天培养显著增加 ,为 (39 90± 8 6 3) % ,其绝对值可增加 30 0 0多倍 ;CIK细胞具有较强的杀瘤能力 ,在第 10天时杀瘤活性为6 0 6 9% ,显著高于LAK、CD3 AK细胞 ,在第 2 0天时达到最高值 ,为 78 92 %。结论　CIK细胞具有较强的扩增和杀瘤能力 ,可为过继免疫治疗提供新的手段。     

PLGA 纳米微粒对树突状细胞表型和功能的影响

目的:探讨用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)制备的纳米微粒对树突细胞的表型及功能的影响。方法:用复乳溶剂蒸发法制备纳米微粒(NP)及包含有黑色素瘤抗原肽gp100-154-162的纳米颗粒(NP-gp100-154-162),用扫描电镜、Nano Plus粒度测定仪检测NP表征。用外周血单核细胞诱导树突细胞(DC),用纳米微粒负载树突细胞,共聚焦显微镜和流式细胞仪检测DC细胞对NP的摄取情况及DC摄取NP后的表型变化。用混合淋巴细胞反应(MLR)检测负载NP的DC及单纯DC刺激同种异体淋巴细胞增殖反应;免疫斑点法(ELISPOT)检测负载NP-gp100-154-162的DC刺激效应细胞分泌IFN-γ的能力,观察纳米微粒对DC递呈抗原的影响。结果:PLGA-NP为圆形,粒径约为180～230 nm,该纳米微粒能被DC有效摄取;负载PLGA-NP后DC表面标志HLA-DR、CD80、CD86、CD83等明显增加;混合淋巴细胞反应结果显示负载纳米微粒的DC(DC/NP)能刺激T细胞增殖,刺激指数(SI)显著高于单纯DC组和单纯纳米微粒组。ELISPOT检测显示:DC细胞负载NPgp100-154-162在第4天时刺激效应细胞产生分泌IFN-γ的斑点数显著高于其在第2天时产生的斑点数,二者均显著高于DC负gp100-154-162产生的斑点数,表明纳米微粒能促进DC成熟,增强DC递呈抗原的能力。结论:PLGA纳米微粒能促进DC成熟和活化,增强并延长DC对抗原的递呈作用,提高树突状细胞免疫应答能力。     

Survivin表位肽诱导CTL免疫学效应及杀瘤效应研究

目的:探讨Survivin HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位SV20-28、SV23-31、SV88-96、负载DC诱导CTL免疫学效应和杀瘤活性。方法:从外周血中分离PBMC诱导DC,用Survivin高亲和性SV20-28、中等亲和性SV23-31及低亲和性表位肽SV88-96负载DC并诱导CTL;用酶联免疫斑点法(ELISPOT),检测CTL细胞IFN-γ的分泌情况;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测其对靶细胞的杀伤作用。结果:Survivin高亲和性表位SV20-28和中等亲和力表位SV23-31负载DC诱导的CTL能产生分泌IFN-γ细胞,在ELISPOT试验中效靶比为1∶1时产生的斑点数分别为183.42±16.07、76.08±8.42,显著高于阴性对照组斑点数,P0.05;而低亲和力表位SV88-96诱导的CTL未能产生明显的IFN-γ分泌细胞。高亲和力及中等亲和力表位肽诱导的CTL能以MHCⅠ限制方式杀伤Survivin阳性细胞,在效靶比为50∶1、25∶1、12.5∶1时的杀伤率分别为(62.40±5.16)%、(44.0±2.32)%、(26.53±1.07)%和(33.42±4.76)%、(25.16±2.64)%、(15.83±1.57)%,显著高于阴性对照组:(5.59±0.16)%、(4.76.0±0.32)%、(2.93±0.07)%;而低亲和力表位肽SV88-96诱导的免疫细胞对靶细胞没有明显的杀伤作用。结论:Survivin表位肽负载DC可有效诱导出CTL,Survivin表位肽SV20-28、SV23-31可有效诱导CTL产生免疫反应,并能以MHCⅠ限制方式杀伤Survivin阳性细胞。