福建省非小细胞肺癌患者EGFR基因突变分析

 目的　检测福建省非小细胞肺癌（NSCLC）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况。方法　提取50例NSCLC患者新鲜癌组织及其对应的正常组织标本的DNA，用EGFR基因巢式聚合酶链反应（PCR）及脱氧核糖核酸（DNA）测序技术分析NSCLC患者EGFR基因突变情况。结果　50例NSCLC患者的正常组织EGFR第19、21外显子均为野生型，而50例NSCLC患者的癌组织EGFR基因突变检出率为26 ％（13／50）。第19外显子缺失突变10例，第21外显子替代突变3例。结论　福建省NSCLC患者EGFR突变以19外显子突变为主。     

血清蛋白质谱模型的建立及在乳腺癌诊断中的应用

目的建立健康女性人群、乳腺癌患者血清蛋白质谱模型，并探讨对乳腺癌诊断的临床意义。方法应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术，以弱阳离子交换芯片（CM10）结合血清蛋白质，分析60例乳腺癌患者、60例健康对照女性的血清样本，得到其蛋白质谱，用BioMarker Pattern软件分析蛋白质谱图，建立分类树模型并进行盲筛验证。结果乳腺癌患者与健康对照女性比较，筛选出12个差异蛋白质峰（P〈0．001），其中6个标志蛋白呈高表达，6个标志蛋白呈低表达。BioMarker Pattern软件在设定条件下自动选取3个标志蛋白用于建立乳腺癌诊断的分类树模型，此模型灵敏度为91.90％，特异度为81．25％。结论利用SELDI—TOF—MS技术可筛选出乳腺癌患者和健康对照女性血清蛋白质谱存在的差异蛋白质峰，可作为乳腺癌检测、随访监测的指标。     

围手术期成分输血对食管癌患者CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的影响

目的探讨围手术期成分输血对食管癌患者CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的影响,为临床合理输血提供实验依据。方法收集2011年7月至2012年5月期间食管癌根治手术患者50例,按围手术期输血与否及输血成分分为A、B、C、D、E 5组,每组10例:A组围手术期不输血,B组围手术期输入异体滤白悬浮红细胞,C组围手术期输异体悬浮红细胞,D组围手术期输异体滤白新鲜冰冻血浆,E组围手术期输异体新鲜冰冻血浆,另选10例健康人作为对照。分别于手术前、术后2、5、10d外周静脉采血。采用鼠抗人单克隆抗体CD4-FITC/CD25-PECy5/CD127-PE标记Treg细胞,经流式细胞仪检测,Treg细胞比例以CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞/CD4+T百分率表示。结果 A、B、D组术后2dTreg细胞比例开始增加,至术后5～10d恢复到术前水平。C、E组术后2dTreg细胞比例增加,至术后10d仍未恢复正常,且C、E组术后各时间段Treg细胞比例均分别高于B和D组(P<0.05)。结论围手术期滤白细胞输血对食管癌患者术后免疫功能无显著影响,输非滤白成分血可造成一定程度的免疫抑制。     

细胞因子诱导激活的杀伤细胞联合化疗治疗晚期结直肠癌的临床观察

 目的 评价细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）联合化疗治疗晚期大肠癌的临床疗效。方法 取外周血50 ml,分离单个核细胞,体外经IL-2、IFN-γ、抗CD3单抗、IL-1刺激培养8天后获得CIK细胞。CIK联合化疗组、行单纯化疗的同期配对晚期大肠癌组患者各50例,比较近期疗效及生存率,流式细胞术检测回输CIK前后患者免疫学指标,并观察其生活质量改善情况及不良反应。结果 CIK细胞治疗前患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞比例分别为54.779±14.228%、30.821±11.554%、16.676±6.256%、18.705±9.347%,治疗后分别为65.236±14.901%、37.292±8.880%、25.229±6.711%、22.950±8.9323%,较治疗前均显著提高(P<0.05);CIK联合化疗组患者生活质量明显改善,不良反应轻微;CIK联合化疗组的疾病控制率(DCR)率为64%（32/50）高于单纯化疗组的40%（20/50）(P<0.05),CIK联合化疗组与单纯化疗组生存率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 CIK联合化疗可增强晚期大肠癌患者免疫功能,提高患者生活质量,有较好的临床疗效。     

CARMA3基因敲减对结肠癌细胞HCT116生长和侵袭转移的抑制

目的:探讨CARMA3基因在人结肠癌细胞HCT116生长和侵袭转移中的作用及其机制。方法:选取高表达CARMA3的人结肠癌细胞株。应用慢病毒技术敲减CARMA3基因,puromycin筛选后构建稳定转染的HCT116-sh CARMA3细胞株。Real-time PCR和Western blot鉴定mRNA和蛋白表达的抑制情况。WST-1法和RTCA S16系统分析细胞增殖情况。集落形成实验观察集落形成。流式细胞术检测细胞周期。显微镜下观察上皮-间充质转化(EMT)形态变化。划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力的改变。Western blot分析相关分子变化,探讨可能机制。结果:4株人结肠癌细胞株中HCT116细胞的CARMA3 mRNA和蛋白表达量最高,构建稳定沉默CARMA3的HCT116-sh CARMA3细胞株,其中HCT116-sh CARMA3-93细胞中CARMA3的mRNA和蛋白受抑制最明显,将其作为细胞模型。相比于对照组,HCT116-sh CARMA3-93细胞形态发生EMT逆转,其增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显下降(P0.01)。HCT116-sh CARMA3-93的G_0/G_1细胞所占比例明显升高,S期细胞比例相应下降(P0.05)。信号通路分子Bcl10和NF-κB表达明显下调,MALT-1变化不明显;细胞周期相关蛋白cyclin D1显著下调,cyclin A表达略有下降;侵袭转移相关分子MMP-2和MMP-9的表达下调,MMP-7未见改变,TIMP-1和TIMP-2的表达上调;EMT相关分子E-cadherin的表达水平升高,N-cadherin、Snail、Slug和Twist的表达水平呈不同程度降低。结论:CARMA3可通过改变细胞周期和侵袭转移分子的表达、调控EMT来影响结肠癌细胞HCT116的生长和侵袭转移。这可能与NF-κB信号通路发生改变有关。     

SELDI-TOF-MS技术筛选鼻咽癌血清肿瘤标志物

摘要：目的筛选鼻咽癌患者血清蛋白差异表达并建立诊断模型,分析不同临床特征患者的血清蛋白质谱差异。方法应用SELDI技术分析102例鼻咽癌患者及118例健康对照的血清样本,Biomarker Wizard和Biomarker Pattern 软件分析两组之间的差异,建立分类树诊断模型并进行盲筛验证;进一步分析鼻咽癌不同临床分型及EB病毒感染状态对患者血清蛋白质表达谱的影响。结果发现鼻咽癌与健康对照之间有25个血清蛋白质谱峰差异有统计学意义（P<0.01), 13个蛋白峰表达下调,12个蛋白峰表达上调。经Biomarker Pattern 软件建立分类树模型,盲法验证其敏感度为97.56％,特异性为88.89％,准确率达92.63％;上行型和下行型鼻咽癌之间发现M/Z为10286Da、7569Da及8149Da的3个血清蛋白质峰差异有统计学意义（P<0.05);EB阳性和EB阴性鼻咽癌间M/Z为9354Da及4596Da的2个血清蛋白质峰差异有统计学意义（P<0.05)。结论SELDI-TOF-MS 技术可筛选出鼻咽癌差异性蛋白并建立鼻咽癌诊断的分类树模型,有望成为鼻咽癌早期诊断的辅助指标;并且用SEDLI技术可以发现一些与鼻咽癌临床特征相关的血清蛋白差异峰。     

IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-17A在肝癌组织中表达及其与乙肝病毒感染的关系

目的:研究Th17(IL-17A)在肝细胞癌发生发展中的作用,尤其与乙肝病毒感染的关系。方法:收集39例原发性肝细胞癌患者的癌与非癌组织,应用流式细胞微球阵列术(CBA)检测IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-17A细胞因子水平,并与患者临床资料进行统计比较分析。结果:肝癌组织中IL-2、IL-4、IFN-γ表达水平好[分别为(4.61±0.28)、(3.37±0.58)、(3.08±1.08)pg/ml]显著低于非癌组织[分别为(5.57±0.59)、(3.77±0.70)、(3.69±1.20)pg/ml],而IL-6、IL-17A水平[分别为(280.09±254.68)、(2.66±1.66)pg/ml]显著高于非癌组织[分别为(6.58±1.92)、(1.49±0.98)pg/ml],同时无论癌组织还是非癌组织,高乙肝病毒载量(>1 000 U/ml)的组织IL-17A的表达[(3.45±1.86)pg/ml]显著高于低病毒载量(<1 000U/ml)的组织[(1.97±1.16)pg/ml]。结论:Th17细胞分泌的细胞因子IL-17A在肝癌组织中高表达,IL-2、IL-4和IFN-γ可能抑制其表达,而IL-6可能促进其表达;乙肝病毒感染有可能促进Th17的表达,从而降低患者的预后。     

免疫细胞在移植物抗肿瘤效应中的作用

近年来异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)由于存在移植物抗肿瘤效应(GVT)而备受关注,尽管GVT的效应细胞和分子机制尚未明了,但一些临床和动物实验资料表明,不同亚群的T细胞、异源反应性自然杀伤(NK)细胞在GVT中发挥了重要作用。我们就免疫细胞在移植物抗肿瘤效应(GVT)中的作用作一综述。1956年,Barnes等在动物实验中发现,异基因骨髓干细胞移植(allo-BMT)具有抗白血病效应,将其称为移植物抗白血病作用(GVL)。20世纪80年代,人们在接受allo-BMT的淋巴瘤患者中也发现了类似作用,称之为移植物抗淋巴瘤作用。目前GVL作用已从过去主要…     

分子检测与肿瘤靶向治疗

近年来,随着人们对肿瘤发病机制的进一步认识,以及对肿瘤细胞信号通路研究的深入,开始了以细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的治疗,并称之为“靶向治疗”,然而靶点分子的基因多态性决定了靶向药物治疗的有效性。文章概述肿瘤靶向治疗中基因多态性检测的意义。