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161.
目的: 探讨食管癌患者NK细胞扩增前后的受体表达及其对肿瘤细胞的杀伤。 方法: 收集福建省肿瘤医院食管癌患者外周血20例,健康供者(对照组)外周血10例。NK细胞培养采用细胞因子(IL-2+IL-12+IL-15+IL-18)组合,流式细胞术检测NK细胞免疫表型及其受体(CD56+、CD69+、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、CD158b、CD159a)的表达,LDH法检测不同效靶比时NK细胞对多种肿瘤细胞株(K562、Raji、Eca-109、TE-1)的杀伤作用。 结果: 与对照组相比,食管癌患者外周血CD3+、CD4+细胞比例以及CD4+/CD8+T细胞比值明显降低(P<0.05),NK细胞(CD3-CD56+)及调节性T细胞(Treg)比例明显升高(P<0.05)。经细胞因子IL-2+IL-12+IL-15+IL-18组合定向扩增20 d后,食管癌患者NK细胞比例高达90%以上,NK细胞数扩增达1 000倍以上(P<0.01);而CD3+T细胞、CD4+、CD8+T细胞、CD19+B细胞、Treg细胞及单核巨噬细胞(CD14+)比例均显著降低(P<0.01),且食管癌患者与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。经细胞因子体外培养20 d后,NK细胞表面CD69及活化性受体(NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46)均明显上调,而抑制性受体(CD158b、CD159a)均明显下调(P<0.05)。培养20 d后,食管癌患者NK细胞对肿瘤细胞K562、Raji、Eca-109、TE-1的杀伤能力均显著高于培养前\[(69.2±5.1)% vs (42.3±3.0)%,(44.6±3.2)% vs (21.1±2.0)%,(69.7±3.9)% vs (50.3±35)%,(67.1±4.5)% vs (41.2±3.3)%;均P<0.01\]。 结论: 细胞因子IL-2+IL-12+IL-15+IL-18组合能有效扩增外周血NK细胞并上调其活并性受体的表达、下调抑制性受体的表达,其数量及功能均能满足临床治疗需要。 相似文献
162.
脐血来源树突状细胞的培养与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立并鉴定脐血来源树突状细胞(DC)培养体系,在体外诱导脐血干细胞生成成熟DC。探讨其在抗肿瘤免疫中的作用。方法脐血CD34 来源的DC以两步法,即0天开始使用GM-CSF、TNF-α、SCF、TPO、FL20,8~14天用GM—CSF、TNF—α和IL-4诱导生成。并分别在形态(光学显微镜 电镜)、表面标记(流式细胞仪)和功能(同种混合淋巴细胞反应)上加以鉴定。结果在合适的细胞因子组合下,能够经过脐血干细胞培养得到成熟的DC,具备典型的DC形态并在体外有效刺激同种淋巴细胞增殖。结论通过合适的培养可以获得大量成熟D(:。 相似文献
163.
目的 构建高表达人CXCR4蛋白的白血病细胞系并测定CXCR4基因对其侵袭转移能力的影响.方法 从外周血淋巴细胞中提取基因组RNA,用RT-PCR扩展编码CXCR4基因片段,将CXCR4基因定向克隆到含有双启动子的真核表达载体PBudCFA.1,采用酶切和序列测定方法鉴定.将所构建的重组质粒用脂质体2000转染K562细胞,Zeoein筛选阳性克隆.流式细胞术和RT-PCR对阳性克隆进行鉴定;用Transwell板检测转染与未转染CXCR4的K562细胞对趋化因子SDF-1趋化活性.结果 成功构建编码CXCR4基因的真核表达质粒PBudCE4.1/CXCR4.经转染入K562细胞,筛选获得能稳定高表达人CXCR4蛋白的K562/CXCR4细胞;K562/CXCR4细胞对SDF-1的趋化能力较K562细胞明显增强.结论 成功构建了转染人CXCR4基因的白血病细胞系,为进一步研究白血病细胞髓外浸润的分子机制奠定基础. 相似文献