非霍奇金淋巴瘤恶性程度与S期比值及DNA倍体关系

目的:探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)恶性程度与S期比值、DNA倍体间的关系.方法:取43例经组织学确诊的NHL(其中低度恶性12例,中度恶性7例,高度恶性24例)石蜡包埋标本,制成单细胞悬液,染色并行流式细胞术(FCM)分析,并对35例病人进行为期3年的随访.结果:低度恶性NHL12例,S期比值均数为13.56%±6.89%,中度恶性NHL 7例,S期比值均数为34.55%±36.20%;高度恶性NHL24例,S期比值均数为31.93%±16.14%;低恶组与中恶组相比,有显著性差异(P＜0.05);低恶组与高恶组相比,有高度显著性差异(P＜0.01);中恶组与高恶组相比,无显著性差异(P＞0.05).DNA倍体分析显示,43例NHL中,低度恶性者12例,全为二倍体;中度恶性者7例,二倍体6例,异倍体1例;高度恶性者24例,二倍体15例,异倍体9例;从低恶组至高恶组DNA异倍体率有显著性差异(P＜0.05).此外,对随访的35例病人,其中异倍体组9例,S期比值为38.65%±16.72%,有8例复发(其中1例于复发后6个月死于NHL);DNA二倍体组26例,S期比值为19.40±18.02%,有2例复发,二组病人复发率有高度显著性差异(P＜0.01).结论:结合S期比值与DNA倍体分析,有助于NHL恶性程度的鉴别.     

MDR相关蛋白在口腔鳞癌的表达及其临床意义

目的 检测口腔鳞癌患者化疗前后P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)、拓朴异构酶Ⅱα(TopoⅡα)的蛋白质表达,分析其与临床病理参数及化疗敏感性的关系。方法 采用流式细胞术的方法,对34例口腔鳞癌患者术前诱导化疗前后P-gp,LRP,MRP,TopoⅡα的蛋白质表达进行测定。化疗方案为平阳霉素16mg/m2,第1-10天。结果 ①口腔鳞癌临床化疗有效率为20.6％,其中CR 1例、PR 6例、NC 26例、PD 1例。多因素分析结果表明P-gp的表达水平与口腔鳞癌对平阳霉素化疗的敏感性呈负相关(P=0.041),而LRP,MRP,TopoⅡα的蛋白质表达均与化疗反应无明显的相关性;同时单因素分析发现化疗有效者的P-gp表达水平明显低于无效者(P<0.05),而LRP、MRP及TopoⅡα蛋白质表达在二者并无显著差异;②在口腔鳞癌组织中,同时存在多种MDR相关蛋白超表达的现象,其中P-gp平均表达率为27.7％±30.2％,LRP为41.1％±17.9％,MRF为43.9％±16.1％;癌组织的MDR相关蛋白表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),同时,它们在化疗前后的表达水平并无显著差异,表明口腔鳞癌的多药耐药性与内在性耐药有关;③P-gp的表达水平与肿瘤细胞的分化程度呈正相关(P<0.05),分化越好,表达水平也越高(P<0.05),但与临床分期、淋巴结转移无关;而LRP、MRP     

外周血干细胞冻存的探讨

目的　对冻存外周血干细胞所用的冻存液配方 ,冻存温度 ,存放时间等作一探讨。方法　用血细胞分离机采集经化疗药物及G CSF联合动员的肿瘤患者外周血干细胞 ,用 10 %DMSO 自体血浆或 5 %DMSO 6%HES 4%人血清白蛋白作冷冻保护剂 ,分别于液氮中和 -80℃低温冰箱中冻存 ,不同时间复苏 ,检测细胞活性 ,CD3 4阳性比率 ,及CFU GM数 ,分析冻存效果。结果　冻存半年 ,液氮和 -80℃对于干细胞的冻存无明显影响 ,用 10 %DMSO 自体血浆作冻存剂 ,于 -80℃低温冰箱保存的细胞 ,活力达 ( 95 .7 /-5 .84) % ,单个核细胞回收率 ( 92 .2 5 /-9.3 2 ) % ,CD3 4阳性细胞回收率 ( 71.73 /-2 7.0 3 ) % ,CFU -GM回收率 ( 77.89 /-12 .3 1) %。 9例患者行自体外周血干细胞移植 ,平均CD3 4阳性细胞回输量为每公斤体重 1.46× 10 7,CFU GM为每公斤体重 3 .85× 10 5,回输后患者平均 17天恢复中性粒细胞 2 .0 g·l-1以上 ,恢复血小板 5 0 g·l-1以上。结论　应用经 -80℃低温冻存的 10 %DMSO 自体血浆冻存外周血干细胞进行自体移植是简单可行的。     

蛋白芯片技术对甲胎蛋白阴性肝癌诊断的意义

 目的　探讨表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（简称SELDI）技术在甲胎蛋白（AFP）阴性肝癌患者中的诊断价值。方法　应用美国Ciphergen公司SELDI仪和CM10芯片检测57例血清AFP阴性（<20 μg／L）肝癌患者和55例健康对照外周血清。采用Biomarker Wizard软件分析,筛选出特征性的蛋白峰,结合临床病理资料分析该蛋白峰的诊断价值。结果　筛选出的特异蛋白峰质荷比为4.2×103、4.1×103、6.7×103、5.7×103、6.5×103、6.9×103、5.8×103,利用差异蛋白峰对17例AFP阴性的肝癌患者和13例健康对照进行盲筛,其灵敏度和特异度分别为88.23 ％和92.31 ％。筛选出的特异蛋白峰与患者年龄、性别、肿瘤大小以及是否合并肝硬化等临床资料无关。结论　应用SELDI技术筛选肝癌患者血清特异性肿瘤标志物的方法快速、有效,对血清AFP阴性患者的正确诊断有较大的辅助作用。     

乳腺癌患者可溶性MICA对自然杀伤细胞受体的影响

目的观察乳腺癌患者外周血自然杀伤（NK）细胞杀伤活性及受体的变化,探讨可溶性MICA（sMICA）对NK细胞受体及杀伤活性的影响。方法ELISA法检测外周血血清sMICA的含量。流式细胞术（FCM）检测NK细胞百分比、NK细胞活化性受体NKG2D、抑制性受体KIR（CD158b）表达。MTT法检测NK细胞对乳腺癌细胞株MCF-7的杀伤活性。结果与健康人比较,乳腺癌患者中81．6％表达sMICA,含量为（205．36±71．27）ng／L,且sMICA含量与TNM分期呈正相关。乳腺癌患者外周血NK细胞所占百分比无明显差异,但血清sMICA阳性的乳腺癌患者中NK细胞杀伤活性明显降低,NKG2D表达下降,CD158b表达增高。当NK细胞培养体系中加入sMICA阳性的乳腺癌血清时,其杀瘤活性明显降低【（76．2±6．7）％与（48．4±4．1）％】,NKG2D的表达明显下调[（92．5±7．1）％与（62．5±6．4）％],而CD158b的表达明显上升【（10．6±3．2）％与（43．6±3．4）％】。sMICA阳性的乳腺癌患者NK细胞与细胞因子IL-15共培养,NK细胞的杀瘤活性、NKG2D的表达明显升高,KIR（CD158b）的表达明显下降。结论乳腺癌外周血血清中sMICA可通过下调NK细胞NKG2D表达以及上调KIR表达,降低NK细胞杀瘤活性。IL-15可逆转sMICA对NK细胞的免疫下调作用。     

Temsirolimus治疗晚期肾细胞癌一例

患者女,43岁,2004年11月23日行右肾癌手术并经病理证实为肾混合细胞癌.2005年11月5日行正电子发射计算机断层扫描仪(PET-CT)检查发现双肺转移,相继经过干扰素联合白细胞介素-2、HLA部分相合异基因单个核细胞输注和索拉非尼治疗.     

携带非A5.1型MHC Ⅰ类相关分子A穿膜区等位基因中晚期食管癌患者对NK细胞免疫治疗的敏感性高

目的:探讨非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A(MHC class Ⅰ-related molecules A,MICA)穿膜区等位基因对中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗疗效的影响.方法:选取福建省肿瘤医院2013年4月至2015年10月收治的中晚期(TNMⅢ-Ⅳa期)食管癌患者152例,均在姑息性手术后行全身化疗,根据患者MICA穿膜区等位基因是否为A5.1分为4组:(1)A5.1化疗+NK细胞治疗(A5.1 +NK)组;(2)A5.1单纯化疗(A5.1)组;(3)非A5.1化疗+NK细胞治疗(noA5.1+NK)组;(4)非A5.1单纯化疗(noA5.1)组,观察各组患者临床疗效.构建食管癌组织标本MICA等位基因A5.1的真核表达载体pTE-1 A5.1,转染食管癌TE-1细胞株;Western blotting检测pTE-1A5.1转染对TE-1细胞MICA蛋白表达的影响,LDH法检测TE-1细胞转染pTE-1A5.1前后对NK细胞杀伤敏感性的变化,ELISA法检测食管癌患者血清可溶性MICA及转染pTE-1A5.1前后TE-1细胞上清中可溶性MICA含量.结果:经过3年的随防,A5.1 +NK组患者中位总生存期(medium overall survival,mOS)为15.0个月,A5.1组为16.0个月,noA5.1+ NK组为22.4个月,noA5.1组为16.0个月,noA5.1+ NK组mOS明显长于其他3组(P＜0.05).经Cox多因素回归分析发现,患者年龄、性别、ECOG评分及基因型与预后均无明显相关(P＞0.05),将基因类型与是否NK细胞治疗进行交叉分析,noA5.1+ NK组mOS明显长于其他3组(P＜0.01).转染pTE-1A5.1后TE-1细胞内MICA表达显著升高,培养液上清可溶性MICA分泌明显增加[(256.2±45.3) vs (45.3±11.5)pg/ml,P＜0.01];与转染前相比,NK细胞对过表达MICA的TE-1细胞的杀伤率明显降低[(29.5±7.2)％vs(42.5±7.1)％,P＜0.05].结论:相对中晚期食管癌MICA穿膜区A5.1等位基因患者,非AS.1基因患者手术后化疗联合NK细胞的疗效较好,其机制与其不容易产生可溶性MICA密切相关.     

MICA 第5 外显子微卫星多态性与食管癌相关性研究

目的:研究MICA 第5 外显子微卫星多态性与食管癌相关性。方法:采用PCR-STR 微卫星基因分型技术检测103 例食管癌患者和84 例正常对照MICA 基因5 外显子多态性。构建食管癌标本中高频率出现的MICA 等位基因的真核表达载体,转染293T 细胞株,LDH 法检测NK 细胞对不同MICA 等位基因转染的293T 细胞的杀伤作用,效靶比20 1。ELISA法检测转染的293T 细胞上清中sMICA 含量。结果:食管癌患者第5 外显子检测到5 种等位基因,频率分别为:MICA-A4(9.71%),MICA-A5(22.3%),MICA-A5.1(40.8%),MICA-A6(15.5%),MICA-A9(11.7%),其中MICA-A5.1 与对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。MICA 等位基因转染293T 细胞株后,相对于其他第5 外显子A5.1 组对NK 杀伤的敏感性较低[(30.4±6.3)%,P<0.05],上清可溶性MICA 分泌增加(135.7±6.2)pg/ ml。结论:食管癌与MICA 第5 外显子多态性A5.1 显著性相关,其危险性高于其他等位基因。     

SELDI-TOF-MS技术在肝癌诊断和介入治疗评价中的价值

目的:建立肝癌血清学诊断模型,探讨评估SELDI-TOF-MS技术在肝癌诊断和介入治疗评价中的价值.方法:用弱阳离子交换芯片(CM10芯片)和表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪(surface-enhanced laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术,测定60例肝癌患者和60例正常对照者的血清蛋白质指纹图谱,应用BiomarkerWizard统计软件比较肝癌组和正常对照组血清蛋白质表达的差异性,采用Biomarker Pattern软件分析数据建立肝癌诊断模型,比较介入治疗前后血清蛋白质指纹图谱的差异性.结果:在质荷比(M/Z)为2000-10000范围内,和正常血清比较,肝癌的差异峰有3个(M/Z为4182Da、5710Da、6992Da;P<0.01),4182Da和5710Da下调,6992Da上调.用这3个差异蛋白峰建立肝癌诊断模型,诊断肝癌的灵敏度为93.3%(28/30),特异度为90.0%(27/30),正确率为91.7%(55/60),约登指数为0.833.差异蛋白峰(M/Z4182Da)在介入术后1mo明显上调(P<0.05).结论:应用SELDI-TOF-MS技术进行肝癌血清蛋白质指纹图谱分析,建立肝癌诊断树模型,对肝癌的诊断有一定的价值;筛选出的差异蛋白峰对肝癌的介入治疗评估有一定的应用价值.     

原发性肝细胞癌组织免疫微环境的分析

目的： 探讨原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中免疫细胞的浸润及分布情况。 方法： 采用免疫组化S-P法,检测采集自福建省肿瘤医院30例HCC癌组织、癌周组织（距肿瘤边缘<2 cm）、非癌肝组织（距肿瘤边缘＞5 cm）石蜡标本中CD3、CD4、CD8、FoxP3、CD20、CD56、CD68的表达。 结果： 免疫组织化学结果显示,HCC患者CD3+、CD4+、FoxP3+细胞数在癌周组织中最高,癌组织中其次,非癌肝组织中最低（P<0.05）;CD8+、CD56+、CD68+细胞数在癌周组织中最高,非癌肝组织其次,癌组织中最低（P<005）;CD20+细胞数在肝癌组织、癌周组织、非癌肝组织中无明显差异（P>005）。肝癌组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD68+细胞主要分布于癌巢中的间质区,FoxP3+细胞呈散在分布。 结论: 肝癌组织局部微环境中,杀伤性免疫细胞减少,抑制性免疫细胞增加,从而导致局部免疫抑制状态。