趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中表达的研究

目的探讨趋化受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的关系,以及脂多糖(LPS)对其表达的影响.方法采用流式细胞仪和RT-PCR法检测23例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及MDA-MB-231细胞中CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达情况,以及LPS对MDA-MB-231细胞 CXCR4表达的影响;用Transwell板检测经LPS作用前后MDA-MB-231对趋化因子SDF-1趋化活性的影响.结果乳腺癌组织MDA-MB-231细胞的趋化因子受体CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达均显著高于癌旁组织和正常组织(P<0.05),并且CXCR4的表达与乳腺癌的转移密切相关;脂多糖(LPS)能下调CXCR4的表达,经LPS作用后乳腺癌细胞趋化活性降低.结论趋化因子受体在乳腺癌的转移中起重要作用,下调乳腺癌细胞CXCR4的表达水平,可减少或抑制其转移.     

肝癌切除肝缺血再灌注损伤前后的蛋白质组学变化◆

背景:肝癌切除肝缺血再灌注损伤可促进微小转移灶的侵袭转移并引起线粒体损伤.目的:比较肝癌切除手术过程中肝正常组织缺血再灌注损伤前后蛋白质表达谱的改变,筛查发生肝缺血再灌注损伤应激的相关蛋白质分子标志物并探讨可能机制.方法:应用双向等电聚焦/聚丙烯酰胺凝胶电泳建立20例肝癌切除患者肝缺血再灌注前与灌注后15 min肝正常组织的全细胞蛋白质和线粒体蛋白质表达图谱,并进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化串联时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定,并进行生物信息学分析.结果与结论:相同条件下对各组全细胞和线粒体蛋白样品分别进行3次双向电泳,筛选在3次电泳中均存在的差异点进行分析,在全细胞蛋白质图谱中共鉴定出5个差异蛋白,在线粒体蛋白质图谱中未鉴定出明显的差异蛋白.结果可见肝癌切除手术过程中肝缺血再灌注15 min即可使细胞骨架蛋白、热休克蛋白等细胞保护蛋白表达发生改变,同时有促进肿瘤转移的风险,需要采取预防措施降低影响,但线粒体蛋白表达基本未发生改变.     

GBX2过表达促进人宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭

[摘要] 目的：探讨GBX2 基因在人宫颈癌SiHa 细胞增殖和侵袭转移中的作用及其机制。方法：应用质粒转染技术,分别将过表达GBX2 基因重组质粒pCMV6-entry-GBX2（实验组）及空载体质粒pCMV6-entry（阴性对照组）转染到宫颈癌SiHa 细胞中,用WST-1 法、集落形成实验、流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、集落形成和细胞周期,用划痕愈合实验、Transwell 实验检测细胞的迁移、侵袭能力,用ELISA 法检测细胞培养上清中IL-6 的表达水平,用WB检测EMT相关蛋白的表达变化并探讨其可能的作用机制。结果：与SiHa/pCMV6 组相比,上调GBX2 表达后：（1）SiHa/GBX2 组细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显增强（均P<0.01）,G0/G1 期的细胞比例减少、S期与G2/M期的细胞比例增加（均P<0.01）;（2）SiHa/GBX2 组细胞EMT相关蛋白上皮钙黏蛋白表达水平下降,神经钙黏蛋白、波形蛋白和snail 表达水平上调（均P<0.01）;（3）SiHa/GBX2 组细胞培养上清中IL-6 的表达水平明显增高（P<0.01）;（4）SiHa/GBX2 组细胞STAT3 磷酸化水平增强,并能被STAT3 抑制剂S31-201 抑制（P<0.01）。结论：GBX2可能通过IL-6/STAT3 通路诱导宫颈癌SiHa 细胞EMT,从而促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

肝细胞肝癌组织浸润性淋巴细胞及其因子的表达

目的:分析原发性肝细胞癌(HCC)组织中浸润淋巴细胞的分类及细胞因子表达,探讨肝癌组织免疫微环境改变的意义.方法:收集76例原发性HCC的癌组织及非癌组织标本,应用流式细胞术及免疫组化的方法分别检测组织中免疫细胞的比例;运用流式微球阵列法(CBA)检测HCC组织和非癌组织中Th1/Th2类细胞因子,ELISA法检测TGF-1、VEGF的表达.结果:HCC患者中CD3+T细胞、CD4+ Th细胞、Treg细胞及CD455RO+记忆性T细胞在癌组织中的比例均高于相应的非癌组织,而CD8+ CTL细胞在癌组织中的比例较低;Treg细胞与Th细胞或CTL细胞水平呈负相关;癌组织中早期活化因子CD69在CD3+T淋巴细胞及NK细胞上的表达均低于非癌组织,而癌组织中晚期活化因子HLA-DR在CD3+T细胞表达的水平高于非癌组织.细胞因子IL-10、TGF-1及VEGF在癌组织中表达高于非癌组织.结论:肝癌组织微环境中,抗肿瘤效应性细胞比例下降,而抑制性细胞及其相关因子增加,引发肿瘤浸润淋巴细胞的免疫无能,导致肿瘤发生.     

肝癌切除肝缺血再灌注损伤前后的蛋白质组学变化

背景：肝癌切除肝缺血再灌注损伤可促进微小转移灶的侵袭转移并引起线粒体损伤。 目的：比较肝癌切除手术过程中肝正常组织缺血再灌注损伤前后蛋白质表达谱的改变,筛查发生肝缺血再灌注损伤应激的相关蛋白质分子标志物并探讨可能机制。 方法：应用双向等电聚焦/聚丙烯酰胺凝胶电泳建立20例肝癌切除患者肝缺血再灌注前与灌注后15 min肝正常组织的全细胞蛋白质和线粒体蛋白质表达图谱,并进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化串联时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定,并进行生物信息学分析。 结果与结论：相同条件下对各组全细胞和线粒体蛋白样品分别进行3次双向电泳,筛选在3次电泳中均存在的差异点进行分析,在全细胞蛋白质图谱中共鉴定出5个差异蛋白,在线粒体蛋白质图谱中未鉴定出明显的差异蛋白。结果可见肝癌切除手术过程中肝缺血再灌注15 min即可使细胞骨架蛋白、热休克蛋白等细胞保护蛋白表达发生改变,同时有促进肿瘤转移的风险,需要采取预防措施降低影响,但线粒体蛋白表达基本未发生改变。     

NKG2D配体在中晚期食管癌患者术后NK细胞免疫治疗中的作用

  目的  探讨NKG2D配体MHC-I类相关分子A（MHC class I-related molecules A,MICA）在中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗中的作用。   方法  福建省肿瘤医院90例中晚期食管癌患者手术后,分为单纯化疗组40例、化疗联合NK细胞治疗MCIA阴性组（简称MICA-组）25例及化疗联合NK细胞治疗MICA阳性组（简称MICA+组）25例,比较其疗效。   结果  与单纯化疗组及MICA-组相比,MICA+组CD3+、CD4+T细胞阳性率、NK细胞阳性率及CD4+/CD8+比率明显高于治疗前[（64.2±6.4）% vs（51.3±5.6）%,（39.8±8.2）% vs（29.5±3.2）%,（25.3±2.1）% vs（16.4±4.3）%,（1.4±0.5）vs（1.1±0.7）;均P < 0.05],T-reg细胞明显低于治疗前[（6.3±4.5）% vs（17.3±2.4）%,P < 0.05]。3组疾病控制率及有效率无明显差异（P>0.05）。MICA+组KPS评分治疗后明显提高,MICA+组能明显改善化疗引起的白细胞减少、外周神经毒性症状,MICA+组疾病进展时间（time to progression,TTP）及总体生存时间（overall survival,OS）均明显延长（均P < 0.05）。但单纯化疗组及MICA-组之间差异无统计学意义（P>0.05）。   结论  食管癌组织MICA表达阳性的中晚期患者进行化疗联合自体NK细胞能有效能有效提高免疫力,改善患者生活质量,并能延长生存期,且回输安全、不良反应小。      

HCC患者VEGF水平检测的临床应用

目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平与原发性肝细胞癌（HCC）和病毒性肝炎的相关性。方法选用酶联免疫吸附定量法检测30例原发性肝癌患者和32例病毒性肝炎患者血清的VEGF水平。结果HCC组血清VEGF表达水平（193．9±104．1）ng／L分别与急性肝炎组（148．5±70．6）ng/L和慢性肝炎组（136．1±40．1）以及对照组（132．4±47．8）比较,均有显著性差异（P〈0．01）。发现肝肿瘤〉5cm的患者血清VEGF水平比其直径〈Sere直径的患者显著增高,提示血清VEGF水平随肿瘤大小而增加。结论检测原发性肝癌和不同肝炎患者血清的VEGF水平对判断肝病的恶性程度及肿瘤大小有临床意义。     

Survivin HLA—A2^＋高亲和性CTL表位的预测及鉴定

目的:采用生物信息方法预测和鉴定survivin抗原HLA-A2+限制性CTL表位,为探索基于survivin的肿瘤免疫治疗奠定基础.方法:采用超基序法和量化基序法对靶抗原survivin HLA-A2+限制性 CTL表位进行预测;选取得分>10的表位肽为候选对象,并进行人工合成.采用T2细胞,以HLA-A2结合实验和流式细胞术(FITC染色)检测候选CTL表位肽的结合亲和力[以荧光系数(fluorescence index,FI)表示];以HLA-A2解离实验和流式细胞术检测其结合稳定性[以复合物解离50%的时间DC50(dissociation complex 50%)表示].结果:预测到的候选survivin CTL表位肽分别是:20STFKNWPFL28 (SV20-28)、23KNWPFLEGC31 (SV23-31)、96LTLGEFLKL104 (SV96-104)、6LPPAWQPFL14 (SV6-14)、33CTPERMAEA41 (SV33-41)、46CPTENEPDL54 (SV46-54)、130KVRRAIEQL138 (SV130-138)、37RMAEAGFIH45 (SV37-45)、88SVKKQFEEL96 (SV88-96).亲和力分析显示:SV20-28 、SV96-104、SV130-138、SV23-31的FI分别为8.61、6.88、5.89、3.81;SV33-41、SV6-14、 SV46-54、 SV37-45 、SV88-96的FI分别为0.31、-0.29、-0.4、-0.16和-0.03;稳定性分析结果DC50为:SV20-28、SV96-104、SV130-138 ＞8 h;SV23-31 为4～6 h;SV6-14、SV33-41、SV88-96为2～4 h;SV46-54、 SV37-45为0～2 h.结果提示,SV20-28 、 SV96-104、SV130-138为高亲和力表位肽,SV23-31为中等亲和力表位肽,SV33-41、SV6-14、 SV46-54、 SV37-45 、SV88-96为低亲和力表位肽.结论:超基序法、量化基序法可快速有效地预测抗原表位,SV20-28 、SV96-104、SV130-138有可能是survivin HLA-A2+ CTL表位,可用于后续研究.     

脐带血原始造血细胞的分析

虽然,有关人类造血干细胞的鉴定,目前还未找到直接鉴定的方法,但仍可从其表面的分子标记、集落形成情况等推断造血干细胞的存在。ＣＤ３４抗原表达于人类的造血祖细胞表面包括造血干细胞,因而是目前普遍用于估算造血干细胞含量的指标。然而骨髓大部分ＣＤ３４＋细胞除造血干祖细胞外,也可能是骨髓的基质细胞群,因此,人们借助于其它相关或特异性抗原的表达,联合ＣＤ３４的表达来确定ＣＤ３４＋组分中造血干细胞的含量。我们以脐血为研究对象,探讨了其间ＣＤ３４＋细胞上相关抗原的表达,以期对脐血中造血干祖细胞群做一较为全面的分…