新型冠状病毒重组蛋白疫苗的构建、表达及鉴定

目的 利用毕赤酵母系统表达重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD,以期作为新冠病毒重组蛋白候选疫苗。方法 选择新型冠状病毒的RBD(受体结合域)蛋白为靶点,通过基因工程技术将RBD基因序列克隆到毕赤氏酵母表达载体pPIC9K中。通过载体将外源基因整合到毕赤酵母染色体上,获得遗传性稳定重组子。毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列,加入甲醇进行诱导,通过前导信号肽引导外源蛋白的分泌表达。结果 成功将RBD基因序列克隆到表达载体中并整合到酵母染色体上,获得遗传性稳定重组子。能通过前导信号肽引导目的蛋白的分泌表达,表达产物免疫动物刺激产生高水平的血清IgG抗体,IgG抗体效价为1∶2.73×10⁶。结论 重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD的设计具有可行性,为重组蛋白候选疫苗在预防新型冠状病毒感染中具有潜在的应用价值。     

H1N1亚型流感病毒mRNA候选疫苗的构建、表达及鉴定

目的 从mRNA序列优化和体外转录(IVT)系统优化角度,设计2条基于血凝素(HA)基因的抗H1N1亚型流感病毒mRNA疫苗,分别连接到3种体外转录系统(含不同UTRs序列)中进行候选疫苗抗原的表达及鉴定,并确定候选疫苗所使用的最佳体外转录系统。方法 确保抗原基因(HA)氨基酸序列不变,以2种优化策略对HA基因的密码子进行优化,分别命名为JLH1HA和JLHA,并分别克隆至骨架载体pGEM-T7-Hα(UTRs来自人源α球蛋白)、pGEM-T7-Mα(UTRs来自鼠源α球蛋白)、pGEM-n3(UTRs来自人源β球蛋白)上,通过线性化处理、体外转录、纯化及Cap1加帽处理,获得功能性mRNA,转染A549细胞后通过Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定目的蛋白的表达。结果 成功构建6组mRNA候选疫苗且均能表达抗原蛋白,以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统蛋白表达量较高。结论 抗原的设计具有可行性,筛选出的最优体外转录系统为以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统。密码子优化对蛋白表达量的影响并不显著,可能在动物免疫效果上能够体现。     

昆虫杆状病毒系统表达人流感多表位基因盒的研究

目的 通过昆虫-杆状病毒表达系统表达人流感病毒多表位基因盒,为进一步研发通用型流感疫苗提供实验依据。方法 将甲型流感病毒H1N1颈部区(345aa-566aa)和H1/H3/B亚型HA2片段经4GS Linker串联M2e及ferritin蛋白构成的HA2-M2e-ferritin(简称HMf),参照A/Jilin/JYT-01/2018(H1N1)毒株的全基因组序列,将其HA2基因和HMf基因序列按照昆虫细胞密码子偏好性进行优化合成,经两次双酶切后分别克隆至pFastBacTM双载体中。热激法将重组质粒转化入DH10BacTM大肠埃希菌感受态,含目的基因的pFastBacDual-HA2-HMf转移载体与DH10Bac的Bacmid质粒重组,构建重组转移质粒rBacmid-HA2-HMf。在脂质体介导下,用rB-HA2-HMf转染Sf9细胞进行重组杆状病毒的拯救。通过限制性酶双酶切、测序、重组Bacmid PCR、Western blot和间接免疫荧光法(IFA)鉴定目的蛋白的表达。用重组杆状病毒感染悬浮sf9细胞,收取细胞悬液,经超速离心、蔗糖密度梯度离心获得重组蛋白,利用透射电镜...     

乙型脑炎病毒分型基因芯片的制备

目的制备乙型脑炎病毒分型基因芯片。方法根据乙型脑炎病毒的基因组学序列,应用生物学软件设计乙型脑炎病毒分型引物及探针,制备JEV分型基因芯片。PCR扩增荧光标记的片段与固定于玻片上的探针杂交后,进行芯片清洗、扫描及结果分析。通过特异性、灵敏性、重复性试验验证,建立分型基因芯片检测方法。结果杂交显示,设计的6条探针中有3条特异地与相应的标记样品杂交并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号,其中1号探针能特异性检出乙型脑炎病毒,4、5号探针可对JEV-Ⅰ和JEV-Ⅲ型进行分型。制备的基因芯片具有可靠的重复性。结论建立的基因芯片具有高特异性、灵敏性及良好的重复性,可以快速、准确、高通量地对乙型脑炎病毒进行分型检测。     

正常人和冠心病患者高频心电图的频谱分析

1952年,由Langner首次将高频心电图(HF-ECG)应用于临床后,人们对正常人及心脏病人的HF-ECG报导较多,发现心肌缺血,损伤以及一些心肌病均能引起心电图上的高频成分(切迹,扭转)增多,HF-ECG分析可作为早期诊断冠心病的辅助手段。目前,临床HF-ECG分析大都沿用Langner氏的切迹计数法,受主观因素较     

刺梨对人体脂质过氧化作用的影响

自由基损害引起生物膜脂质发生过氧化,造成膜老化导致衰老引发动脉硬化、冠心病。寻找有效降低脂质过氧化作用的方法,对防衰老和防治冠心病、动脉硬化等将有重要意义。我们对100例正常健康人和52例临床确     

慢性心力衰竭患者血清肾上腺髓质素测定及其临床意义

目的 :探讨慢性心力衰竭患者血清肾上腺髓质素变化及其临床意义。方法 :用放射免疫分析法测定了 76例慢性心力衰竭 (CHF)患者和 30例非慢性心力衰竭患者的肾上腺髓质素 (ADM)水平 ,并进行对照统计分析。结果 :CHF组血清ADM水平显著高于对照组 (p <0 0 1 ) ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度心力衰竭组间无显著差异 (p >0 0 5 ) ,住院期间死亡组显著低于好转组 (p <0 0 5 )。结论 :CHF患者血清ADM水平显著高于对照组 ,尤以死亡组更明显     

医院制剂在我院的应用分析

目的评价医院制剂在我院的重要性。方法从不同的角度分析2007年我院医院制剂的应用情况。结果2007年1月1日—12月31日,我院患者共应用医院制剂34种,销售金额合计1 643 754.2元,占患者全部用药金额的7.07%。销售金额列前10位的医院制剂占全部医院制剂销售金额的88.51%,主要集中在我院的特色科室。结论医院制剂在我院药品结构中占有重要地位,为我院的特色专科发展起到了很大的作用,必须继续坚持和发展我院的医院制剂。     

食管癌术中放置十二指肠营养管方法的改进

目的:通过改进食管癌术中放置十二指肠营养管的方法,减少与其相关的并发症。方法:选取患者216例,其中205例患者在食管癌术中行改进后的放置十二指肠营养管方法。结果:201例患者痊愈出院,1例因肺部感染,呼吸衰竭死亡,3例出现吻合口瘘,均采用胸腔闭式引流和肠道营养以及静脉抗炎治疗痊愈出现。结论:改进后的置管方法简便易行,减少术中感染,缩短手术时间,减少并发症的发生。     

俯卧位通气对ARDS患者氧合及循环的影响

目的通过监测ARDS患者仰卧位与俯卧位通气（PPV）后血气及血流动力学指标,探讨俯卧位通气对ARDS患者氧合及循环的影响。方法将22例机械通气ARDS患者随机分为仰卧位组（A组10例）和俯卧位组（B组12例）,分别监测机械通气0．5h、2h、4h、6h的HR、MAP、CVP、SpO2、PaO2、PaO2／FiO2的变化。结果B组在俯卧位通气后的PaO2、PaO2／FiO2、SPO2值改善较A组明显。且同时段B组氧合改善均较A组明显,差异有显著性（P〈0．05）,同时俯卧位通气6h时氧合改善最明显（P〈0．01）;血流动力学变化（HR、MAP、CVP）无显著差异（P〉0．05）。结论PPV较仰卧位通气能明显改善早期ARDS患者的氧合,而对血流动力学影响不明显。