氟喹酮的合成

目的合成氟喹酮并改进工艺。方法以2-氨基-5-硝基苯甲酸为起始原料,经缩合、还原、上保护基、环合、卤素交换、脱保护基,共七步反应制得氟喹酮。结果和结论改进后的方法避免了有毒有机溶剂的使用,在进行卤素交换反应时,用聚乙二醇作催化剂、无水二甲基甲酰胺代替乙二醇可以减少副产物,收率也有所提高。产物经1HNMR,IR,MS确证了结构。     

刘启泉从脾论治咽异感症经验

咽异感症临床发病率高,常作为慢性脾胃病的兼症出现。刘启泉教授认为脾与咽异感症联系密切,其病机关键是脾气虚弱,脾失健运,临床多表现为虚实夹杂证。治疗以健脾为中心,整体辨证,通过除湿化痰、升清理气、养阴生津、补虚实卫、活血散结等方法恢复脾升胃降之功能,使经脉通利,咽部气血运行顺畅,咽部症状改善。     

新型冠状病毒重组蛋白疫苗的构建、表达及鉴定

目的 利用毕赤酵母系统表达重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD,以期作为新冠病毒重组蛋白候选疫苗。方法 选择新型冠状病毒的RBD(受体结合域)蛋白为靶点,通过基因工程技术将RBD基因序列克隆到毕赤氏酵母表达载体pPIC9K中。通过载体将外源基因整合到毕赤酵母染色体上,获得遗传性稳定重组子。毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列,加入甲醇进行诱导,通过前导信号肽引导外源蛋白的分泌表达。结果 成功将RBD基因序列克隆到表达载体中并整合到酵母染色体上,获得遗传性稳定重组子。能通过前导信号肽引导目的蛋白的分泌表达,表达产物免疫动物刺激产生高水平的血清IgG抗体,IgG抗体效价为1∶2.73×10⁶。结论 重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD的设计具有可行性,为重组蛋白候选疫苗在预防新型冠状病毒感染中具有潜在的应用价值。     

H1N1亚型流感病毒mRNA候选疫苗的构建、表达及鉴定

目的 从mRNA序列优化和体外转录(IVT)系统优化角度,设计2条基于血凝素(HA)基因的抗H1N1亚型流感病毒mRNA疫苗,分别连接到3种体外转录系统(含不同UTRs序列)中进行候选疫苗抗原的表达及鉴定,并确定候选疫苗所使用的最佳体外转录系统。方法 确保抗原基因(HA)氨基酸序列不变,以2种优化策略对HA基因的密码子进行优化,分别命名为JLH1HA和JLHA,并分别克隆至骨架载体pGEM-T7-Hα(UTRs来自人源α球蛋白)、pGEM-T7-Mα(UTRs来自鼠源α球蛋白)、pGEM-n3(UTRs来自人源β球蛋白)上,通过线性化处理、体外转录、纯化及Cap1加帽处理,获得功能性mRNA,转染A549细胞后通过Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定目的蛋白的表达。结果 成功构建6组mRNA候选疫苗且均能表达抗原蛋白,以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统蛋白表达量较高。结论 抗原的设计具有可行性,筛选出的最优体外转录系统为以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统。密码子优化对蛋白表达量的影响并不显著,可能在动物免疫效果上能够体现。     

昆虫杆状病毒系统表达人流感多表位基因盒的研究

目的 通过昆虫-杆状病毒表达系统表达人流感病毒多表位基因盒,为进一步研发通用型流感疫苗提供实验依据。方法 将甲型流感病毒H1N1颈部区(345aa-566aa)和H1/H3/B亚型HA2片段经4GS Linker串联M2e及ferritin蛋白构成的HA2-M2e-ferritin(简称HMf),参照A/Jilin/JYT-01/2018(H1N1)毒株的全基因组序列,将其HA2基因和HMf基因序列按照昆虫细胞密码子偏好性进行优化合成,经两次双酶切后分别克隆至pFastBacTM双载体中。热激法将重组质粒转化入DH10BacTM大肠埃希菌感受态,含目的基因的pFastBacDual-HA2-HMf转移载体与DH10Bac的Bacmid质粒重组,构建重组转移质粒rBacmid-HA2-HMf。在脂质体介导下,用rB-HA2-HMf转染Sf9细胞进行重组杆状病毒的拯救。通过限制性酶双酶切、测序、重组Bacmid PCR、Western blot和间接免疫荧光法(IFA)鉴定目的蛋白的表达。用重组杆状病毒感染悬浮sf9细胞,收取细胞悬液,经超速离心、蔗糖密度梯度离心获得重组蛋白,利用透射电镜...     

食管癌术中放置十二指肠营养管方法的改进

目的:通过改进食管癌术中放置十二指肠营养管的方法,减少与其相关的并发症。方法:选取患者216例,其中205例患者在食管癌术中行改进后的放置十二指肠营养管方法。结果:201例患者痊愈出院,1例因肺部感染,呼吸衰竭死亡,3例出现吻合口瘘,均采用胸腔闭式引流和肠道营养以及静脉抗炎治疗痊愈出现。结论:改进后的置管方法简便易行,减少术中感染,缩短手术时间,减少并发症的发生。     

新生儿脐血T细胞亚群、γ-干扰素、白细胞介素4与乙型肝炎病毒宫内感染的研究

目的探讨新生儿脐血中T细胞亚群,γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的表达水平及两者比值与乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染的相关性。方法选择HBV感染的孕妇分娩新生儿72例为研究组,根据检测的新生儿脐血乙肝五项和HBV-DNA结果,将研究组中诊断HBV宫内感染14例作为宫内感染组,无宫内感染58例作为宫内未感染组,并选择同期正常孕妇分娩新生儿18例为对照组。用流式细胞术检测T细胞亚群,ELISA法测定新生儿脐带血细胞因子IFN-γ、IL-4表达水平,对结果进行统计学分析。结果三组的CD19~+、NK细胞阳性率的差异均无统计学意义(P0.05);CD3~+、CD4~+阳性率及CD4~+/CD8~+比值,HBV宫内感染组低于HBV宫内未感染组及对照组(P 0.05);CD8~+阳性率,HBV宫内感染组明显高于HBV宫内未感染组及对照组(P 0.05),而HBV宫内未感染组与对照组间的差异无统计学意义(P0.05)。HBV宫内感染组新生儿的IFN-γ水平[385.16(369.46,451.29)pg/ml比529.73(498.13,550.81)pg/ml,P 0.001]、[385.16(369.46,451.29)pg/ml比506.87(444.90,597.16)pg/ml,P=0.003],IFN-γ/IL-4比值[0.63(0.58,0.69)比0.93(0.87,0.97),P 0.001]、[0.63(0.58,0.69)比0.97(0.92,0.97),P 0.001]低于宫内未感染组及对照组,而IL-4水平[630.51(612.49,652.35)pg/ml比573.33(530.74,600.39)pg/ml,P 0.001]、[630.51(612.49,652.35)pg/ml比565.83(427.85,628.72)pg/ml,P=0.004]显著高于HBV宫内未感染组及对照组新生儿,差异均有统计学意义。宫内未感染组与对照组相比,IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4比值差异均无统计学意义(均P0.05)。结论 HBV宫内感染孕妇分娩新生儿细胞免疫功能紊乱造成IFN-γ作用减弱,IL-4水平升高,T淋巴细胞亚群水平较低且比例失调,不利于母体清除病毒,易致胎儿宫内感染。     

精神分裂症和双相障碍的健康一级亲属认知功能的对照研究

目的探讨精神分裂症和双相障碍患者的健康一级亲属的认知功能缺陷的异同点。方法纳入精神分裂症和双相障碍两类患者的健康一级亲属各50名、正常对照组50名。采用数字符号、连线测验(trailmarking test,TMT)A和B、数字广度、图形视觉再生、言语流畅性、威斯康星卡片、汉诺塔(Hanoi tower,HOT)评估被试者的注意、记忆和执行功能,比较3组间的差异。结果 3组间数字符号总分、TMT-A时间、数字广度(总分及倒背)、视觉图形再生总分、言语流畅性总分、WSCT持续错误数、HOT总分及完成任务数等成绩的差异均有统计学意义(P<0.05)。两两比较显示,精神分裂症亲属组上述所有指标的成绩均差于正常对照组(P<0.05),而双相障碍亲属组仅数字符号、TMT-A时间、数字广度总分及倒背、言语流畅性总分均差于正常对照组(P<0.05),精神分裂症亲属组的图形视觉再生、HOT总分及完成任务数均比双相障碍亲属组差(均P<0.05)。结论两类患者的健康一级亲属均存在注意、记忆和执行功能等认知缺陷,精神分裂症亲属的认知缺陷更显著,提示认知缺陷既是两类精神疾病共同的遗传易感因素,但又在两类疾病的家系中的遗传负荷有所不同。     

益生菌联合谷氨酰胺对急性重症胰腺炎患者肠黏膜屏障功能的影响

[目的]分析益生菌联合谷氨酰胺(Gln)对急性重症胰腺炎(SAP)患者肠黏膜屏障功能的影响。[方法]选取SAP患者78例,随机分为观察组与对照组,各39例。2组均予以加用Gln的肠内营养治疗,观察组在此基础上加用四联益生菌制剂,观察治疗第1、7、14、21天2组急性生理与慢性健康Ⅱ(APACHE-Ⅱ)评分、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、内毒素、D-乳酸及二胺氧化酶(DAO)水平的变化。[结果]2组治疗第7天APACHE-Ⅱ评分与治疗第1天比较无明显变化(P0.05),但治疗第14、21天明显降低(P0.01),其中观察组降低程度更为显著(P0.05)。治疗第7、14、21天,2组CRP、TNF-α水平及内毒素、D-乳酸、DAO水平均较治疗第1天明显降低(P0.05或P0.01),但观察组治疗第14、21天上述各水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]益生菌联合Gln的肠内营养能有效缓解SAP患者的机体炎症反应,减轻内毒素血症,减少肠道细菌移位,从而利于肠黏膜屏障功能的恢复。