姜黄素诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡的实验研究

目的 探讨姜黄素对人骨肉瘤 U2OS 细胞凋亡的诱导作用及其分子机制,为姜黄素应用于骨肉瘤治疗提供实验依据.方法 以不同浓度的姜黄素处理骨肉瘤 U2OS 细胞,应用 MTT 法检测细胞活性,用 Bliss 法计算 IC50 值,通过流式细胞术和 Hoechst 33258 荧光染色检测细胞凋亡,比色法检测 Caspase-3、8、9活性.结果 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L的姜黄素明显抑制骨肉瘤 U2OS 细胞生长并呈剂量依赖关系,48 h的 IC50 值为 21.63 μmol/L;20μmol/L 姜黄素作用 12、24、48 h 诱导 U2OS 细胞的凋亡率分别为:12.5%、23.1%和46.2%,细胞出现明显的凋亡特征性形态变化;姜黄素处理 U2OS 细胞 48 h后 Caspase-3、8、9的活性明显增强.结论 姜黄素可通过激活 Caspase 级联活化而抑制骨肉瘤 U2OS 细胞生长并诱导其凋亡.     

P14ARF蛋白在骨肉瘤中的表达及其意义

目的　探讨P14ARF蛋白表达与骨肉瘤发生发展和病理分级的关系。方法　应用免疫组化S -P法检测P14ARF蛋白在 10例骨软骨瘤和 30例骨肉瘤中的表达。结果　P14ARF蛋白在骨软骨瘤组阳性表达率为 90 % (9/ 10 ) ,在骨肉瘤组阳性表达率为 4 3 3% (13/ 30 ) ,P14ARF蛋白阳性表达率和染色强度在两组间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。P14ARF蛋白在骨肉瘤Ⅰ级组阳性表达率为 75 % (6 / 8) ,在Ⅱ、Ⅲ级组为 31 8% (7/ 2 2 ) ;P14ARF蛋白阳性表达率和染色强度在两组间差别有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　P14ARF蛋白的表达降低与骨肉瘤发生发展密切相关 ,可作为骨肉瘤辅助诊断和病理分级的指标     

去甲斑蝥素抑制人骨肉瘤U2OS细胞生长及其机制研究

目的：探讨去甲斑蝥素抑制人骨肉瘤U2OS细胞生长的作用及其分子机制,为开发抗骨肉瘤新药提供实验基础。方法：以不同浓度的去甲斑蝥素处理骨肉瘤U2OS细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Bliss法计算IC50值,通过流式细胞术和Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡,Caspase-3、8、9活性检测试剂盒检测其活性。结果：5、10、20、40、80μg/mL的去甲斑蝥素明显抑制骨肉瘤U2OS细胞生长并呈剂量依赖关系,48h的IC50值为26.15μg/mL;20μg/mL去甲斑蝥素作用12、24、48h诱导U2OS细胞的凋亡率分别为：7.8%、26.3%和43.9%,并出现明显的凋亡特征性形态变化;去甲斑蝥素处理U2OS细胞48h后Caspase-3、8、9的活性明显增强。结论：去甲斑蝥素可通过激活Caspase级联活化而抑制骨肉瘤U2OS细胞生长并诱导凋亡。     

α干扰素增强阿霉素诱导的骨肉瘤细胞凋亡

目的探讨α干扰素（Interferonα,IFNα）联合化疗药物阿霉素诱导人骨肉瘤U20S细胞凋亡的作用及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性探索新的治疗方法。方法应用台盼蓝拒染法测定IFNα和阿霉素单用以及联用对U20S细胞的生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡形态学变化;Westernblot法检测Caspase-3、PARP的活化;采用Caspase抑制剂Z—VAD—FMK预处理各组细胞,检测该作用是否依赖Caspase。结果IFNα处理24h、48h、72h对U20S细胞无抑制作用,却明显增强阿霉素诱导的生长抑制作用,具有时间依赖性;联合用药72h后U20S细胞出现更为明显的凋亡形态学变化;联合用药组的凋亡关键酶Caspase-3、PARP均发生断裂活化;Caspase抑制剂Z—VAD—FMK预处理明显减弱联合用药引起的生长抑制。结论IFNd通过Caspase依赖性凋亡通路增强阿霉素诱导的骨肉瘤U2OS细胞生长抑制和凋亡,二者联合应用可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。     

经皮椎体成形术和经皮后凸成形术治疗骨质疏松性胸腰椎压缩骨折并发症分析

目的探讨PVP和PKP治疗骨质疏松性胸腰椎压缩骨折的并发症及防治。方法对2009年1月～2011年12月本院确诊骨质疏松性胸腰椎新鲜压缩骨折患者182例共267椎进行PVP(102例)和PKP(80例)治疗,随访12～42个月,比较治疗前后视觉模拟评分(VAS)、Barthel指数等疗效指标,观察并处理手术并发症。结果 PVP组和PKP组术后胸腰背痛均获良好缓解,术后3天、术后1年VAS评分及Barthel指数较术前均明显改善,差异具有统计学意义(P0.05)。182例发生并发症80例,发生率43.96%。其中PVP组和PKP组发生穿刺并发症各1、2例;骨水泥渗漏各40例(53椎)、13例(15椎),发生率各为36.05%和18.75%,差异具有统计学意义(P0.05),未发生因骨水泥渗漏导致截瘫、肺栓塞等严重并发症;截至术后1年随访发生临近椎体骨折21例(11.54%),其中PVP组和PKP组各10例(9.80%)、11例(13.75%),差异无统计学意义(P0.05)。术中发生一过性呼吸困难、呛咳3例,予加强吸氧、安抚患者后好转。结论 PVP和PKP均可明显改善患者症状和生活质量,但并发症发生率较高,在骨水泥渗漏率上PKP相对于PVP具有优越性,在相邻椎体骨折发生率二者无明显差别,完善术前检查评估、良好的手术操作以及规范的抗骨松治疗有助于预防和减少并发症的发生。     

椎管内肿瘤误诊为腰椎间盘突出症的原因分析

目的分析椎管内肿瘤误诊为腰椎间盘突出症的原因,降低临床误诊率。方法回顾18例被误诊为腰椎间盘突出症的椎管内肿瘤患者的临床资料,包括病史,发病特点,病程,临床表现及影像学特征,分析发生误诊的原因,以及纠正误诊的方法。归纳出两类疾病的各自特征及鉴别要点和方法。结果临床上椎骨内肿瘤容易误诊为腰椎间盘突出症,主要原因在于忽视详细的病史采集和体格检查、过多地依赖影像学检查、以诊断收集资料而不是以分析收集资料推导诊断,违背了正常的诊断程序。结论椎管内肿瘤和腰椎间盘突出症的病史、疼痛特点以及临床表现有明显不同,只要进行详细的病史采集和仔细的体格检查并结合必要的影像学资料,两者是可以鉴别的。     

人骨形成蛋白7基因重组35型腺病毒载体的构建与鉴定

目的探讨构建携带人骨形成蛋白7(human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)基因的重组35型腺病毒(serotype35adenovirus,Ad5F35)载体,为基因治疗研究提供一种新的方法,并观察其在兔骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法以pcDNA1.1/Amp-hBMP7质粒为模板扩增骨形成蛋白(BMP-7)基因(1.3kb),将回收的PCR产物片段克隆入pDC316载体,获得重组质粒pDC316-hBMP7。骨架质粒pBHG-fiber5/35和穿梭质粒pDC316-hBMP7共转染293细胞,同源重组产生重组腺病毒rAd5/F35-hBMP7。同样的方法构建rAd5/F35-EGFP。在体外用不同感染复数(M.O.I)值的rAd5/F35-hBMP7和rAd5/F35-GFP分别转染兔MSCs,并留置空白对照。采用流式细胞仪、RT-PCR方法检测目的基因的转染效率和表达。结果PCR、酶切鉴定以及序列测定与比对分析表明,重组腺病毒rAd5/F35-hBMP7质粒构建正确。转染兔MSCs的最高效率可达99%,hBMP-7基因存在于转染后的MSCs中并表达相应的mRNA。结论本实验成功构建了含hBMP-7基因的重组腺病毒rAd5/F35-hBMP7载体,在体外能高效转染兔MSCs。     

p14ARF增强顺铂诱导的骨肉瘤U20S细胞凋亡的研究

目的探讨p14ARF对顺铂诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的影响及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供依据。方法在不表达p14ARF的U2OS细胞中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株;采用RT-PCR和Western blot法鉴定其表达;台盼蓝拒染法测定生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测凋亡;Western blot法检测Caspase-3,9和PARP的表达和活化。结果 mRNA和蛋白水平,U2OS和U2OS-vec细胞未见p14ARF表达,U2OS-ARF细胞可见p14ARF的高表达;p14ARF单独对U2OS细胞的生长无影响,但顺铂（5μM）处理72小时后,U2OS-ARF细胞的生长抑制率明显高于U2OS和U2OS-vec细胞,相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞不仅表现更为明显的凋亡形态学变化,还明显出现了Caspase-3,9和PARP的活化裂解。结论 p14ARF能够增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,通过激活Caspase-PARP级联活化,提高骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性。     

手法复位及治疗新鲜胸腰椎压缩性骨折

目的：探讨新鲜胸腰椎压缩性骨折的中西医结合微创治疗方法。方法：对26例（33椎）新鲜胸腰椎压缩性骨折病例进行回顾性分析,进行临床评价。结果：所有病例经过传统手法复位后给予（经皮椎体成形术,PVP）手术治疗,临床结果显示所有患者均安全完成治疗,椎体高度恢复情况良好,手法复位前骨折椎体前缘的平均高度为17.25±4.92mm,椎体成型术后为19.78±4.86mm,差值均数为1.86±1.76mm（P〈0.01）。能够迅速缓解疼痛,患者生活质量明显改善。术前患者的VAS评分平均为8.8±2.7分,术后第1天降至平均2.9±1.9分,随访2~16月,平均12月,除1例患者因其他疾病死亡外,其余患者均获得随访,末次随访VAS平均为2.7±2.9分,手术前后差异有显著性。结论：手法复位及经皮椎体成形术治疗新鲜胸腰椎压缩性骨折具有创伤小、疗程短、操作简单、疗效好、并发症少等优点,临床疗效满意。     

PCR XpertMTB/RIF系统对脊柱结核诊断价值研究

目的:应用聚合酶链反应(PCR)XpertMTB/RIF系统对疑似脊柱结核患者进行检测,获得结核分枝杆菌检出率与利福平耐药基因rpoB突变率,探讨该方法对脊柱结核诊断的临床价值。方法:收集2015年1月至2018年1月中山大学附属江门医院收治的100例脊柱结核患者,应用PCR XpertMTB/RIF系统进行结核分枝杆菌与利福平耐药基因rpoB的突变检测、抗酸染色、罗氏培养基中培养并药敏实验,以结核杆菌培养与药敏试验为金标准判断是否结核杆菌感染及利福平是否耐药;从而判断Xpert MTB/RIF检出结核分枝杆菌的检出率以及Xpert MTB/RIF系统用于rpoB基因突变检测结果。结果:62例经系统检出结核杆菌基因检出率62.00%(62/100);涂片抗酸染色阳性22例,检出率22.00%(22/100),差异具有统计学意义(P 0.05)。43份培养出结核分枝杆菌;培养阳性组经系统检出结核杆菌的检出率(97.67%)(42/43)。假定结核药敏实验为金标准,采用Xpert MTB/RIF行利福平耐药性检测的检出率为95.24%(20/21)。结论:Xpert MTB/RIF系统用于诊断脊柱结核的具有可行性,有高效、快速的优点。