组学技术在银屑病研究中的应用

银屑病作为一种难治性免疫相关炎症性皮肤病,具有病程缠绵反复、易诱发其他严重并发症、遗传倾向等特征,但其发病机制及发生发展中的治疗靶标尚无定论.目前各种高通量技术蓬勃发展,多组学技术应运而生,可为疾病研究提供更全面的证据.银屑病相关的多组学研究包括代谢组学、蛋白质组学、基因组学、表观遗传学、肠道微生物组学、转录组学等,该...     

当归补血汤实验研究进展

查阅十年来国内有关中医药研究的学术刊物,从免疫调节功能、循环系统作用,立方基础、抗氧化、保肝、配伍比例研究等几个方面概述当归补血汤的研究结果。当归补血汤具有提高机体免疫功能、改善异常循环状态,并有保肝和抗氧化等药理作用。今后应进一步开展其作用机理和物质基础的研究。     

氧化苦参碱及TNF-α对结肠癌LOVO细胞分泌炎性细胞因子的影响

目的探讨氧化苦参碱（OM）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）对人结肠癌LOVO细胞分泌细胞因子的影响。方法采用ELISA法检测单用OM或TNF-α及OM与TNF-α合用对人结肠癌LOVO细胞分泌IL-1β、IL-4、IL-6、IL-12、TNF-α、肿瘤坏死因子α受体（sTNF-αR）、hs-CRP的影响。结果 1 mg/mL OM作用48 h后,与空白对照组相比,LOVO细胞培养上清中细胞因子未发生明显变化。单独使用100μg/mL TNF-α,LOVO细胞培养上清中IL-4分泌明显增加（P〈0.01）。OM与TNF-α合用48 h后,LOVO细胞培养上清中IL-1β、IL-6、IL-4含量明显增加（P〈0.01或〈0.05）,hs-CRP明显下调（P〈0.05）。OM与TNF-α合用后,仅见LOVO细胞培养上清中IL-12、TNF-α有上升趋势,未检测到sTNF-αR。结论单独应用OM对结肠癌LOVO细胞分泌细胞因子无明显影响;但与TNF-α合用可促进LOVO细胞分泌IL-1β、IL-4以及IL-6,抑制hs-CRP的表达。     

当归补血药药理作用研究进展

本文概述了当归补血药自1990年以来的药理学研究近况，主要从免疫调节功能、循环系统作用、立方基础、抗氧化、保肝、配伍比例研究等几个方面概述，因配伍比例研究都是从免疫或循环系统角度进行，故也将其纳入前两个方面。     

芦荟大黄素对人膀胱癌细胞T24增殖及凋亡的影响

目的：探讨芦荟大黄素（AE）对人膀胱癌细胞株T24细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法：采用甲基噻唑（MTT）比色法测定AE对体外培养的T24细胞的抑制率,并用作图法计算半数有效抑制浓度（IC5）0;光学显微镜下观察AE作用前后细胞形态学变化;流式细胞技术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测mRNA表达。结果：MTT法测定显示,在5～160μg/mL浓度范围内,AE对膀胱癌T24细胞生长有抑制作用,并呈量-效关系,IC50为31.55μg/mL;光学显微镜下药物IC50剂量（32μg/mL）作用T24细胞后呈现明显的死亡形态变化;流式细胞仪检测显示AE可阻滞T24细胞进入G2/M期;Annexin V-FITC/PI双染法显示早期凋亡细胞数明显增加;R T-PCR法显示myc基因表达下降。结论：AE能抑制人膀胱癌T24细胞生长,并阻断细胞周期和诱导细胞凋亡。其机制可能与myc基因表达下调有关。     

六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸对大鼠BMSCs向脂肪细胞分化相关基因表达的影响

目的:研究补肾益气功效的六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响。方法:采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,补肾阴、补肾阳和补肾健骨方药(代表方分别为六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸)含药血清干预BMSCs成脂分化过程,采用反转录-实时荧光定量技术(RT-q real-time PCR),观察成脂分化相关基因Lpl、Fabp4和PparγmRNA表达水平的变化。结果:与10%正常大鼠血清相比较,Fabp4 mRNA在补肾阴组、补肾阳组(10%含药血清)表达水平均下降33%,但无统计学意义;Lpl mRNA在补肾阳组和补肾健骨组(10%含药血清)表达水平下降,其中补肾阳组具有统计学意义。PparγmRNA在其它各组表达无显著性变化。结论:六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸对转录因子表达水平无显著改变,但对其下游靶基因表达水平有显著下调作用,金匮肾气丸对成脂分化过程中成脂相关基因下调作用最为明显,推测其抑制骨髓间充质干细胞成脂分化能力较其它功效的方药更强。     

卡介苗经TLR4介导对膀胱癌细胞株T739 NF-κB p65活性影响

目的:探讨卡介苗(BCG)对膀胱癌细胞株T739 经Toll样受体介导的NF-κB p65活性影响.方法:采用SYBR Green嵌合荧光定量Real Time-PCR,观察BCG(0.25 g/L)刺激T739后不同时间点各个mRNA相对表达量(Ratio),设LPS和空白组作对照;采用转录因子结合DNA的ELISA方法检测NF-κB p65活性.结果:BCG刺激后T739细胞TLR2、 CD14和MD-2 mRNA表达均明显增加,Max.Ratio分别为5.3(2 h),2.6 (4 h),7.4(2 h),TLR4 mRNA增加不显著,Max.Ratio为1.6(6 h);BCG作用T739细胞后NF-κB p65活性显著增加,阻断TLR4后,NF-κB p65活性受到显著抑制(P<0.05);阻断TLR2后NF-κB p65活性却显著性增强(P<0.01).结论:BCG作用T739后TLR2、 CD14、 MD-2 和TLR4 mRNA表达均不同程度增加,BCG可经TLR4使T739细胞NF-κB p65活性增强,不是经TLR2使T739细胞NF-κB p65活化.     

骨肉瘤体外多药耐药模型R-KHOS的建立及其意义

目的 探讨体外建立骨肉瘤多药耐药模型(R-KHOS)的建立及其意义.方法 采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法 诱导复苏后的KHOS细胞,计算阿霉素对KHOS的IC50设定耐药浓度,总体培养2个月,共传代24次,初步建立体外骨肉瘤多药耐药模型(R-KHOS).应用倒置显微镜观察R-KHOS和KHOS细胞的形态学差异;用对比细胞MRP基因,P-gp蛋白、1 h细胞内阿霉素表达水平,并用统计学处理.结果 形态学上两组细胞无明显差异,R-KHOS的MRP基因、P-gp表达量明显比KHOS多,细胞内阿霉素表达水平明显比敏感株少(P<0.05),DOX对R-KHOS细胞的IC50明显提高(P<0.05).结论 大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法 诱导而建立的骨肉瘤体外耐药模型(R-KHOS)可靠且建立周期短,细胞表现出明显耐药,对阿霉素耐药倍数达2.12倍,可应用此模型对耐药的发生机制及体外逆转耐药进行研究.     

甘草对小肠隐窝干细胞增殖中p53mRNA稳定性及其表达的影响

目的研究甘草对小肠隐窝干细胞IEC-6细胞增殖及p53表达的影响。方法采用二氟甲基鸟氨酸（DFMO）耗竭细胞内多胺的方法诱导IEC-6细胞生长抑制模型,实验分4组,即对照组、DFMO组、甘草低剂量组和甘草高剂量组。对照组为正常细胞,其他3组均加入5 mmol/L DFMO,同时甘草低剂量组与甘草高剂量组分别添加40、80μg/mL甘草配方颗粒,均连续培养6天。利用流式细胞术检测各组细胞数量及存活率,Western blot检测p53蛋白水平,荧光定量RT-PCR检测p53 mRNA水平及mRNA稳定性。结果与对照组比较,第4天DFMO组IEC-6细胞生长明显受到抑制（P〈0.05）;第6天甘草低剂量组及甘草高剂量组细胞数量较DFMO组明显增加（P〈0.05）,且2个剂量的甘草组间具有量效依赖性。处理IEC-6细胞6天后,DFMO组p53蛋白及mRNA表达水平较对照组显著升高（P〈0.05）;与DFMO组比较,2个剂量的甘草组能够明显下调p53蛋白及mRNA的表达水平（P〈0.05）。对照组细胞的p53 mRNA降解最快,DFMO组细胞的降解速度最慢。结论甘草通过下调p53 mRNA的稳定性来降低p53表达,从而促进小肠隐窝干细胞的增殖,可能是甘草的肠黏膜保护和修复作用的机制之一。     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6迁移的影响

目的:观察四君子汤总多糖(PPS)在黏膜损伤后对小肠上皮细胞修复的影响。方法:采用大鼠小肠上皮细胞株IEC-6制成细胞迁移模型,观察四君子汤PPS在造模后0 h8、h及24 h对细胞迁移面积的影响。结果:四君子汤在细胞迁移的8 h及24 h,对IEC-6的细胞迁移均有促进作用。而其最佳剂量集中于100~400μg/ml范围内。结论:四君子汤可促进胃肠道黏膜损伤的修复,其机制与促进细胞迁移有关。