PTEN基因对卵巢癌耐药细胞系C13K顺铂耐药性的影响

目的:探讨第10号染色体上PTEN对人卵巢癌顺铂耐药细胞株C13K顺铂耐药性的逆转作用。方法:将野生型PTEN基因真核表达质粒在脂质体介导下转染人卵巢癌耐药细胞系C13K细胞,同时以转染空载体和未转染C13K细胞作为对照,分别应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹法(W estern blot)检测PTEN mRNA及蛋白表达水平,对转染细胞株进行四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)实验,观察PTEN基因对肿瘤细胞生长的抑制作用和C13K细胞对顺铂药物敏感性的影响,流式细胞仪(FACS)分析细胞的凋亡。结果:转染48 h后,与对照组相比,转染野生型PTEN基因能明显增加C13K细胞PTEN mRNA和蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05);MTT法显示,转染野生型PTEN基因的C13K细胞生长明显慢于转染空载体和未转染的C13K细胞,转染PTEN的C13K细胞对顺铂的敏感性显著增加;FACS分析显示,顺铂作用24h后,转染PTEN基因能够显著提高C13K细胞凋亡率。结论:转染野生型PTEN质粒能有效地提高C13K细胞内PTEN的表达,恢复细胞对顺铂的敏感性。     

RNAi抑制Akt2基因表达对卵巢癌细胞系A2780放射敏感性的影响

背景与目的:许多研究已经表明蛋白激酶B(P13K/Akt)在肿瘤细胞恶性增殖及肿瘤对放化疗的拮抗中起着重要作用,Akt2是Akt家族成员之一.本研究应用RNAi(RNA interference,RNAi)技术抑制Akt2基因的表达,观察其对肿瘤细胞生长和放射敏感性的影响.方法:构建Akt2基因的短发卡状RNA质粒转染人卵巢癌细胞A2780,同时以转染空载体和未转染组作为对照,3组细胞命名为pAkt2-shRNA/A2780,pEGFP/A2780和A2780)运用RT-PCR、蛋白质免疫印迹方法比较转染前后Akt2表达的差异;四甲基偶氮唑蓝实验绘制细胞生长曲线;克隆形成实验观察细胞的放射敏感性变化,以克隆形成率表示;6 MV X线10 Gy照射后48 h收集细胞,流式细胞仪(FACS)分析细胞凋亡情况.结果:与对照相比,shRNA可抑制Akt2 mRNA转录和蛋白的表达,差异显著(P＜0.05);pAkt2-shRNA/A2780细胞生长明显慢于pEGFP/A2780和A2780细胞;pAkt2-shRNA/A2780细胞克隆形成率明显低于pEGFP/A2780细胞和A2780细胞(P＜0.05);pAkt2-shRNA/A2780,pEGFP/A2780和A2780细胞凋亡率分别为(78.3±2.2)%、(41.2±1.8)%和(40.4±2.0)%,差异有显著性(P＜0.05).结论:转染针对Akt2基因shRNA真核表达载体,抑制卵巢癌细胞中Akt2基因表达,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,增强其对放射治疗的敏感性.     

癌基因c-myc和n-ras在妊娠滋养细胞疾病中表达的研究

为研究癌基因c-myc和n-ras在妊娠滋养细胞疾病(GTD)发生、发展中的作用,用地高辛标记的c-myc、n-ras裸核探针与54例石蜡包埋的GTD组织进行原位杂交.结果显示c-myc mRNA在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌组织中阳性表达率分别为44.4%、55.6%和83.3%,绒癌c-myc阳性表达率高于葡萄胎(P＜0.05).n-ras mRNA在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌组织中阳性表达率分别为88.9%、77.8%和44.4%,绒癌n-ras阳性表达率显著低于葡萄胎(P＜0.01)和侵蚀性葡萄胎(P＜0.05).Ⅲ～Ⅳ期妊娠滋养细胞瘤(GTT)组织中c-myc阳性表达率为90.9%,高于I期的45.5%(P＜0.05).c-myc和n-ras基因在GTT组织中共同表达率为47.2%.结果提示c-myc基因与GTD病变的发展及GTT临床分期有关,n-ras基因可能为GTT发生的早期事件,c-myc和n-ras基因在GTD癌变过程中起协同作用.     

宫颈癌FHIT蛋白表达及与临床的相关性

目的:探讨候选抑癌基因FHIT产物FHIT蛋白在由正常宫颈上皮过渡至子宫颈癌过程中的表达缺失情况及其临床意义.方法:应用SP免疫组化染色法检测65例子宫颈癌,25例宫颈上皮肉瘤样病变(CIN),14例慢性子宫颈炎,5例正常子宫颈组织中FHIT蛋白的表达情况,并与组织学类型、组织学分级、肌层浸润深度和临床分期等生物学行为进行相关分析.结果:FHIT蛋白在子宫颈癌前病变和宫颈癌组织中的表达明显减少,缺失率分别为56.00%和72.31%,表达缺失率与组织学类型和组织学分级有关(P＜0.05),与子宫颈癌的肌层浸润深度和临床分期无关(P＞0.05).结论:FHIT表达缺失是子宫颈癌发生的早期分子事件,FHIT蛋白表达缺失是早期诊断子宫颈癌及癌前病变较好的生物学标志.     

PCDGF反义RNA真核表达载体的构建、转染及其对卵巢癌细胞增殖能力的抑制效应

目的:检测特异性封闭高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626、A2780中畸胎瘤源性生长因子(PC -cell -devivedGrowthFactor,PCDGF)的表达,并观察其对增殖能力的抑制效应。方法:用RT -PCR技术扩增PCDGF基因cDNA保守序列,经pGEM -TEasy载体克隆后双酶切,反向插入哺乳动物真核表达载体pcDNA3 1 ( +)构建反义PCDGF核酸载体。并通过脂质体转染法转染人卵巢癌细胞株Sw626、A2780,用RT- PCR和Westernblot技术检测转染前后PCDGFmRNA和蛋白的表达,MTT实验检测其增殖能力的变化。结果:PCDGF反义核酸载体转染株的mRNA和蛋白水平明显低于对照组,Sw626的抑制率分别为50%、72%;A2780分别为53%、70%。同时增殖能力亦明显降低,其抑制率Sw626及A2780分别为71%、73%。结论:PCDGF反义核酸在高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626及A2780中起了特异性封闭作用。为进一步研究PCDGF的分子生物学特性、致瘤机理及今后利用反义PCDGF核酸载体治疗卵巢癌提供了实验和理论模型。     

smad4 shRNA 真核表达质粒的构建及鉴定

 目的 针对smad4基因的不同部位,构建不同smad4shRNA表达质粒载体,在转录后水平抑制smad4的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法 用DNA重组技术将针对人smad4基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3。脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆。结果 3个smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westernblotting均证实：3种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4mRNA丰度及smad4蛋白表达。结论 成功构建了smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3,并筛选出特异而高效地阻断smad4表达的克隆。此实验结果为进一步研究smad4蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。     

含HPV16型反义E7基因的腺相关病毒骨架质粒pUF1-E7AS的构建及鉴定

目的:构建含HPV16型反义E7基因的腺相关病毒骨架质粒pUF1- E7AS并鉴定,探讨腺相关病毒介导的反义E7基因技术用于治疗早期宫颈癌的可能性。方法:使用RT -PCR法扩增全长HPV16型E7基因,利用基因重组法将目的片段反向插入腺相关病毒骨架质粒pUF1并酶切鉴定。结果:RT PCR法扩增全长315bp的HPV16型E7基因,装入pGEM -Teasy载体进行测序,经NCBI数据库blast检索为100%的符合,经基因重组获得含HPV16型反义E7基因的腺相关病毒骨架质粒pUF1 E7AS,AccⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定pUF1 E7AS。结论:含HPV16型反义E7基因的腺相关病毒骨架质粒pUF1 E7AS可成功构建。     

乳腺肿瘤组织AQP1表达及其临床意义

目的:探讨水通道蛋白1(AQP1)在乳腺癌组织及乳腺良性肿瘤中的表达特点,以及其在乳腺癌发生、发展中的意义.方法:收集乳腺癌136例、乳腺良性肿瘤68例,应用免疫组织化学方法测定 AQP1在乳腺癌和乳腺良性肿瘤组织中表达水平及分布特点.结果:AQP1在乳腺良性肿瘤细胞及其周围的血管内皮细胞中呈低表达或不表达,但是在乳腺癌腺上皮细胞及乳腺癌组织中的血管内皮细胞呈高表达.两组AQP1阳性细胞的表达率分别为35.66±7.32和277.39±19.35,两者差异有统计学意义,P<0.001.同时乳腺癌组织中AQP1表达及分布存在异质性.结论:AQP1在乳腺良、恶性肿瘤组织中表达存在显著差异,AQP1在乳腺癌组织中呈过高表达,这可能与乳腺癌的恶性生物学行为有关.     

Identification of novel epithelial ovarian cancer biomarkers by cross-laboratory microarray analysis

The purpose of this study was to pool information in epithelial ovarian cancer by combining studies using Affymetrix expression microarray datasets made at different laboratories to identify novel biomarkers.Epithelial microarray expression information across laboratories was screened and combined after preprocessing raw microarray data,then ANOVA and unpaired T test statistical analysis was performed for identifying differentially expressed genes(DEGs),followed by clustering and pathway analysis for these ...     

剖宫产3587例原因分析

目的探讨和分析剖宫产的指征变化及剖宫产的原因。方法选择2008年1月至2010年12月我院剖宫产的3587例病例,用回顾性分析的方法进行统计。结果我院3年的剖功率为42.5%。剖宫产的主要原因为难产、妊娠并发症、胎儿宫内窘迫、社会因素等。结论剖宫产的原因很多,主要因为难产、社会因素的影响。社会因素使得剖宫手术上升迅速,只有通过医患双方和社会的共同努力和宣传,才能有效地减少剖宫产率。