人子宫内膜癌裸鼠原位移植模型的建立及生物学观察

目的 :建立人子宫内膜癌的原位移植模型 ,观察其生物学特性。方法 :利用子宫内膜癌细胞株AN3CN制备裸鼠皮下移植瘤模型 ,然后 ,将瘤组织条植入裸鼠子宫腔内 ,建立人子宫内膜癌的原位移植模型 ,用组织病理学检查、电镜观察和流式细胞仪DNA含量及染色体核型分析鉴定模型。结果 :原位移植模型的瘤细胞与AN3CN在形态和结构上一致。结论 :小鼠肿瘤的生长和转移完全模拟人子宫内膜癌的临床过程 ,为研究子宫内膜癌转移的理论和药物治疗提供了较客观的模型     

miR-125b在前列腺癌1E8细胞运动转移中的作用及其分子机制的初步探讨

目的 研究 miR-125b在前列腺癌高低转移潜能细胞中的表达差异及其对高转移细胞株1E8细胞的运动转移中的作用和可能的分子机制.方法 realtime PCR法检测前列腺癌高低转移潜能配对细胞系中 miR-125b的表达差异.通过划痕实验及transwell实验观察1E8细胞及转染 miR-125b 抑制剂及其阴性对照后该细胞运动转移能力的变化.结果 realtime PCR结果显示高转移潜能1E8细胞中miR-125b表达水明显高于低转移潜能2B4细胞;下调miR-125b会减弱1E8细胞的运动转移能力.结论 miR-125b可促进前列腺癌细胞的运动转移能力.     

应用激光扫描细胞仪分析GRP78在食管癌各级病变中的表达情况

目的 探索应用激光扫描细胞仪分析免疫组化结果的可行性、客观性及准确性,了解葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白在食管癌各级病变中的表达情况.方法 应用激光扫描细胞仪对食管癌组织芯片中GRP78免疫组化结果进行分析,对激光扫描细胞仪分析结果和传统光镜下评分结果的相关性进行分析.结果 激光扫描细胞仪扫描整张组织芯片后获得选定组织区域的虚拟图及阳性像素点百分比;正常食管组织、中一重度异型增生、原位癌、食管鳞癌的GRP78阳性率分别为0%(0/8),90.4%(19/21)、83.3%(5/6)和47.4%(18/38).GRP78在正常食管、中-重度异型增生加原位癌、食管鳞癌3组中表达的差异有显著性意义(P<0.01).激光扫描细胞仪分析结果与传统光镜下评分结果具有高度相关性(P<0.01)).结论 激光扫描细胞仪用于免疫组化结果的分析具有高通量、高度客观、准确的优点.GRP78在食管正常细胞向恶性细胞转化的过程中可能扮演了重要角色.     

糖原合酶激酶-3β磷酸化抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨增加糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化状态对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的作用.方法 体外培养人卵巢癌细胞株OV2008细胞,运用GSK-3β特异性抑制剂LiCl增加磷酸化GSK-3β的表达,应用流式细胞仪检测不同浓度顺铂诱导的细胞凋亡,Western blot检测GSK-3β及磷酸化GSK-3β蛋白的表达.结果 流式细胞仪检测结果显示,梯度增加的顺铂(40、80、120 μmol/L)作用于OV2008细胞24 h,其凋亡率不断增加,分别为(4.55±1.64)%、(25.50±0.94)%和(53.80±1.62)%;而应用抑制剂预孵育的细胞,不同浓度顺铂作用24 h后凋亡率分别为(2.10±0.80)%、(15.75±0.97)%和(20.45±0.87)%;Western blot显示,抑制剂LiCl作用后,细胞的磷酸化GSK-3β表达明显增加,并且顺铂作用亦可引起磷酸化GSK-36表达上调;流式结果还显示,P13K的特异性抑制剂LY294002作用后使顺铂诱导的细胞凋亡率从(18.75±0.70)%增加至(28.40±1.50)%.结论 磷酸化GSK-3β表达增加可抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡.     

Neuropilin-1mRNA在不同动情周期及周龄阶段小鼠卵巢中的表达

目的:探讨Neuropilin-1(NRP -1)mRNA在繁殖适龄期小鼠动情周期间以及不同周龄阶段小鼠卵巢中的表达.方法:选用繁殖适龄期不同动情周期小鼠以及不同周龄阶段小鼠,通过实时定量聚合酶链反应检测其卵巢中NRP -1 mRNA的表达.结果:NRP -1在小鼠不同动情周期卵巢中的表达在mRNA水平差异无显著性(P ＞ 0.05).比较其mRNA在不同周龄阶段小鼠卵巢的中表达显示,近绝育期32周组表达水平显著高于其他组:为3周组的2.94倍(P ＜ 0.01),6周组的4.92倍(P ＜ 0.01),11周组的2.29倍(P ＜ 0.01).而其他各组间比较差异无统计学意义(P ＞ 0.05).结论:NRP -1 mRNA在小鼠卵巢中的表达不随动情周期而改变,且随着卵巢生理功能的下降而显著升高,提示NRP -1与卵巢衰老进程有关.     

曲古霉素A诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡反义cDNA文库的构建和效应基因的初步筛选

目的 构建曲古霉素A诱导人乳腺癌细胞凋亡反义cDNA文库,以筛选曲古霉素A抗肿瘤的效应基因.方法 收集经曲古霉素A处理不同时间点的人乳腺癌细胞MCF-7,提取poly(A)+RNA,将逆转录合成的cDNA反向插入载体PCEP 4中以构建反义cDNA文库.文库DNA随机转入人宫颈癌细胞HeLa中,以转染PCEP 4卒载体细胞为对照组,用200 nmol/L曲古霉素A和200μg/ml潮霉素同时筛选,至对照组细胞全部死亡,文库组仍有存活细胞时停止曲古霉素A筛选.存活克隆扩增后提取Hirt DNA并转化感受态细胞,获得的转化克降扩增后进行酶切鉴定并测序,得到多个EST片段,经生物信息学分析后选择感兴趣的EST片段进行初步功能验证.结果 构建的反义cDNA文库含有2 × 106重组子,重组效率>90%;经DNA测序和生物信息学分析提示第27号存活克隆是锌转运蛋白LIV1,该克隆在功能验证时表现出对曲古霉素A非常显著的抵抗效应.结论构建的反cDNA文库容量较大,质量较高;基因LIV1可能是曲古霉素A抗肿瘤的效应基因之一.     

蛋白质组学技术探寻宫颈癌相关抗原

目的:应用蛋白质组学技术探寻宫颈癌相关抗原。方法:先用双向电泳(2-DE)分离宫颈癌患者的癌组织和癌旁正常组织中抽提的蛋白质混合物,再以免疫印迹将凝胶上的蛋白质转移到尼龙膜,继而与患者血清杂交显色后通过比较两者的反应性来筛选目的蛋白,最后运用质谱技术鉴定目的蛋白。结果:组织蛋白经2-DE分离、转膜后与患者血清杂交、显色,癌组织来源的蛋白质呈阳性反应。对应的癌旁正常组织来源的蛋白质呈阴性反应的蛋白质点有4个,切取其中1个经质谱鉴定为β微管蛋白Ⅳb(Beta tubulin Ⅳb)。β微管蛋白Ⅳb在宫颈癌患者体内发生体液免疫产生了抗体。结论:β微管蛋白Ⅳb可能是宫颈癌的相关抗原;蛋白质组学技术与血清学相结合是探寻肿瘤相关抗原的新方法。     

Expression of MTA2 Gene in Ovarian Epithelial Cancer and Its Clinical Implication

Most members of metastasis-associated geneshave been identified since1994.Alot of evidenceshowed that the expression of MTA1were elevatedin human metastatic breast cell lines and metastaticcancer tissues,such as breast,colorectal,gastric,and esophageal carcinomas.MTA2,which is ho-mologous to MTA1,is a component of the NuRDATP-dependent chromatin remodeling and histonedeacetylase complex.Specifically,MTA2modu-lates the enzymatic activity of the histone deacety-lase core complext[1].Altho…     

用巢式PCR 对孕妇外周血中的单个有核红细胞进行胎儿性别诊断

目的 建立利用孕妇外周血中的单个有核红细胞诊断胎儿性别的方法。方法 46名中期妊娠妇女外周血经密度梯度离心后瑞氏染色，显微操作分离单个有核红细胞，并用巢式PCR扩增SRY基因。结果 胎儿性别的总符合率为82.61%，敏感性为80％，特异性为87.50%。结论 利用孕妇外周血中的单个有核红细胞诊断胎儿性别的方法具有一定的可行性。