人Qki-5基因重组腺病毒的制备

目的:构建针对Qki-5人重组腺病毒表达载体,并在能在转染该病毒的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中观察到该基因过表达效果.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-Qki-5-IRES-EGFP与骨架载体共转化到大肠杆菌BJ5183中,同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒.用获得的病毒感染Qki-5表达较低的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western blot方法检测细胞中基因表达的变化.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对Qki-5基因的重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR和Western blot方法证实,在MDA-MB-231细胞中,Qki-5基因在mRNA和蛋白水平均有上升.结论:Qki-5腺病毒载体够建成功并且可以在乳腺癌细胞MDA-MB-231内表达.     

人骨形成蛋白2碳端肽在大肠杆菌中的高表达及活性测定

利用基因工程技术生产人骨形成蛋白（ｈＢＭＰ），为其诱骨机理及临床应用研究提供前提条件。作将ｈＢＭＰ２ ｃＤＮＡ３’端７３２ｂｐ片段，克隆入大肠杆菌表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，经ＩＰＴＧ诱导后，表达产物存在于包涵体中，将其纯化复性后，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＦＰＬＣ分析，并作小鼠体内异位诱骨活性检测。表达的ｈＢＭＰ２与ＧＳＴ的融合蛋白Ｍｒ＝５１ｋｕ，占菌体总蛋白的３０％，纯化、复性后，ＦＰＬＣ分析示尖而