单细胞巢式PCR诊断软骨发育不全

目的 探讨单细胞水平诊断软骨发育不全(achondroplasia，ACH)的可靠性，为开展ACH的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis，PGD)打下基础。方法 采用巢式PCR扩增单淋巴细胞及单卵裂球的成纤维细胞生长因子受体3基因的高发突变位点G380R区域，用限制酶Bfm I消化PCR产物，10％聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。结果 单淋巴细胞的PCR扩增成功率为90．4％，等位基因脱扣发生率为8．2％，诊断准确率为91．8％；单卵裂球的扩增成功率为75．4％。结论 单细胞巢式PCR诊断ACH是比较稳定、可靠的。     

噬菌体展示抗体微型文库的构建

用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素（N-cadherin，N-cad）分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面，再以此噬菌体免疫BALB／c小鼠，提取脾总RNA，RT—PCR扩增抗体重、轻链基因cDNA并插入噬菌体表达载体，构建分别抗N-cad分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体表达文库。然后对文库的库容量、多样性、滴度及表达能力进行鉴定。结果显示，用噬菌体展示的3种分子免疫小鼠获得成功，所构建抗体文库的库容量、多样性、滴度及表达能力均能满足进一步筛选目的抗体基因的需要，为制备相应的特异性抗体奠定了基础。     

不同解冻和移植时间的冻融胚胎成功率分析

冻融胚胎移植(FET)是辅助生殖技术(ART)的重要组成部分,影响FET的因素有冷冻胚胎的质量、患者年龄、子宫内膜容受性和子宫内膜与胚胎同步等[1].对于质量差的冷冻胚胎大多数生殖中心的策略是通过囊胚培养筛选胚胎,从而提高妊娠率.由于体内是复杂的神经-内分泌系统,体外的囊胚培养系统不能完全代替体内,可能导致部分有发育潜能的胚胎由于体外"残酷"的环境而停止发育致成胚胎的浪费.我院针对部分质量差的冷冻胚胎尝试性改变解冻和移植时间,以求达到子宫内膜和胚胎更好的同步性.本文就这一部分患者进行了回顾性分析.     

卵裂期胚胎、囊胚的玻璃化冷冻解冻的妊娠结果分析

目的 比较卵裂期胚胎、囊胚行玻璃化冷冻解冻后的妊娠结果.方法 回顾性分析2010年6月～2010年9月在该院生殖中心行玻璃化冷冻解冻患者共185周期的妊娠情况;其中卵裂期胚胎冷冻解冻后移植者127周期,卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养后移植者42周期,囊胚冻融后移植16周期.结果 玻璃化冷冻解冻患者共185周期,移植176周期,获得妊娠75周期,妊娠率42.61%;卵裂期胚胎冻融后移植者,卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养者,囊胚冻融移植者复苏率分别为96.76%(299/309)、95.83%(161/168)、94.12%(32/34),着床率分别为22.37%(66/295)、23.44%(15/64)、50%(14/28).妊娠率分别为40.94%(52/127)、33.33%(11/33)、75%(12/16).卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养的患者共42人,其中有9人未形成可移植囊胚而取消移植.其他两组解冻后没有取消移植的例数.结论 3组的玻璃化冻融复苏率无统计学差异.囊胚冷冻解冻能获得较高的着床率和妊娠率.     

胚胎植入前遗传学检测技术的临床应用和发展前景

<正>植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing, PGT)是辅助生殖与遗传学诊断技术相结合的一种胚胎检测技术，指对植入前的胚胎进行染色体或者特定基因检测，使得面临较高遗传风险妊娠的夫妇在选择遗传学正常的胚胎植入子宫后，可以降低自然流产的风险或者避免遗传性出生缺陷。相比于传统的产前诊断技术，PGT技术可以避免因发现胎儿遗传异常后不得不面临的选择性流产的身心痛苦，越来越成为人们首先考虑的生殖干预方式。     

miR375表达质粒构建及表达研究

目的 寻找一种高效、简便的构建表达miRNA质粒的方法.方法 该研究用PCR 方法直接从小鼠gDNA扩增了包含miRNA375(miR375)前体序列在内的一个126 bp片段以构建质粒pAAv-miR375.该研究用pAAV-miR375转染Hela细胞48 h后,用定量RT-PCR方法和Northern bloc检测Heh细胞中miR375的表达.结果 转染了pAAV-miR375的Hela细胞中有miR375的表达,而在转染了空质粒pAAV-MCS和未转染的Hela细胞中没有检测到miR375的表达.结论 该研究所构建的pAAV-miR375质粒能够表达miR-NA375.作者介绍的这一种构建表达miRNA质粒的方法比以往的方法更快速、高效、简便和保证序列的正确性.     

pAAV-PEG3-sTRAIL质粒的构建及表达研究

目的 构建pAAV-PEG3-sTRAIL质粒并检测其诱导细胞凋亡的作用.方法 从大鼠尾巴中提取gDNA,PCR扩增PEG3启动子,测序后定向替代pAAV载体中的CAG启动子.从培养的NTERA-2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增sTRAIL基因(编码氨基酸序列114-281),测序后定向插入至pAAV-PEG3质粒的多克隆位点.用pAAV-PEG3-sTRAIL质粒FUGENE HD转染人hSF、NTERA-2和hES细胞,用半定量RT-PCR和流式细胞仪分别检测sTRAIL基因的表达和细胞的早期凋亡.结果 限制性内切酶酶切和测序分析证实,本文成功地获得了PEG3启动子和sTRAIL基因片断,并将PEG3和sTRAIL准确插入了pAAVL质粒.转染hSF、NTERA-2和人胚胎干细胞(hES)后,检测到sTRAIL基因的表达及其引起的肿瘤细胞NTER-A-2的早期凋亡.结论 成功构建了pAAV-PEG3-sTRAIL质粒,并有可能用于肿瘤的基因治疗.     

锌指蛋白297B协同Myocardin调节平滑肌细胞的分化

目的探讨锌指蛋白297B在平滑肌细胞分化过程中的表达及相关机制。方法用定量实时多聚酶链反应检测锌指蛋白297B在人、大鼠和小鼠平滑肌细胞中体内/体外的表达量及在平滑肌细胞体内和体外分化或增殖过程中的表达变化;构建锌指蛋白297B-Myc表达质粒,免疫荧光检测锌指蛋白297B-Myc在大鼠平滑肌细胞中的表达分布;用荧光素酶活性检测及免疫共沉淀实验检测锌指蛋白297B与Myocardin的结合及相互作用。结果锌指蛋白297B在平滑肌细胞中特异性高表达,在小鼠胚胎干细胞向平滑肌细胞分化过程中表达上调,在血小板源性生长因子BB刺激的平滑肌细胞增殖过程中下调,在大鼠颈动脉球囊损伤内膜修复过程中表达先上调后下降。锌指蛋白297B主要分布于细胞核及核周的细胞质。锌指蛋白297B能与Myocardin蛋白结合,荧光素酶活性检测显示锌指蛋白297B的表达受Myocardin的调控。结论锌指蛋白297B可能在平滑肌细胞分化过程中起到重要正向调控作用,这一作用很可能是通过锌指蛋白297B与Myocardin的协同作用来完成。