降钙素基因相关肽对卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP) 对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法:6 周龄雌性昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin, PMSG)10 U 48 h 后处死, 取出卵巢收集卵母细胞以30~40 枚/ 孔的密度接种于培养板内, 以不同浓度CGRP(0, 10^-10, 10^-9, 10^-8 mol/L) 处理24 h后检测生发泡破裂(germinal vesicle breakdown, GVBD) 率和第一极体(polarbody I, PBI) 排出率;收集、培养人卵巢颗粒细胞, 以不同浓度CGRP(0, 10^-10, 10^-9, 10^-8 mol/L) 处理24 h 后测定颗粒细胞内cAMP 浓度。结果:外源性CGRP处理小鼠卵母细胞可浓度依赖性地降低GVBD 率及PBI 排出率;外源性CGRP 处理人颗粒细胞, 可浓度依赖性地增高细胞内cAMP 浓度。结论:CGRP 抑制小鼠卵母细胞成熟可能与其增加颗粒细胞内cAMP 浓度有关。     

高效液相色谱串联质谱联用法测定培养基中丝裂霉素C残留量

目的 建立液相色谱-电喷雾串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定培养基中丝裂霉素C残留量的方法.方法 培养基样品经乙腈直接沉淀蛋白后,采用Thenno Hypurity C18柱(2.1 mm×150 mm,5μm)分离,流速为0.2 ml/min,以乙腈:0.1%甲酸=40:60为流动相等度洗脱.通过电喷雾离子源进入质谱,以二级质谱多反应监测(MRM)方式进行检测.结果 丝裂霉素的线性范围分别为0.098～50 ng/ml,最低检测浓度为0.098 ng/ml,平均相对回收率在91.30%～105.46%范围内,日内和日间精密度<15%.结论 本法简单、快速、灵敏、重现性好,可用于丝裂霉素C的培基中残余量的测定和监控.     

一种从凝胶中直接回收DNA进行PCR的方法

分子生物学实验中，常常需要从琼脂糖凝胶或聚丙酰胺凝胶中回收DNA，进行纯化、探针标记或进一步扩增等。鉴于PCR反应具有高度敏感性，微量模板即可扩增出阳性产物。我们从琼脂糖凝胶中直接回收DNA进行PCR，取得较满意的结果，报道如下。     

授精时机、活动精子总数对宫腔内人工授精临床妊娠率影响的研究

目的　探讨在宫腔内人工授精 (IUI)过程中 ,授精时间、处理后A、B级精子总数与IUI妊娠率的关系。方法　回顾了我室 2 0 0 1年 4月 30日～ 2 0 0 1年 11月 1日 2 0 8例IUI的资料 ,比较了不同授精时间、处理后A、B级精子总数对IUI临床妊娠率的影响。结果　IUI的授精时间与预期排卵时间在 6小时以内组的妊娠率显著高于 8小时组 (P <0 .0 5 ) ;而处理后A、B级精子总数分为 3组① 1× 10 6<精子总数 <2× 10 6;② 2× 10 6<精子总数 <10×10 6;和③精子总数 >10× 10 6。 3组间比较表明 ,其临床妊娠率无显著性差异 (P >0 .1)。结论　IUI治疗过程中 ,A B级精子总数 >1× 10 6时 ,其数量增加对临床妊娠率的增加并不显著 ,但授精时间愈接近排卵期 ,则妊娠率愈高     

应用连锁分析对杜氏/贝氏肌营养不良症家系进行快速携带者检测和产前基因诊断

杜氏 贝氏肌营养不良症 (Ｄｕｃｈｅｎｎｅ Ｂｅｃｋｅｒｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓ ｔｒｏｐｈｙ ,ＤＭＤ ＢＭＤ)是Ｘ连锁隐性遗传病。近年来 ,在ＤＭＤ基因 3′ ,5′端及基因内发现了多个 (ＣＡ)ｎ短串联重复序列 (ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ,ＳＴＲ)具有多态性 ,且信息量高。用ＳＴＲ进行连锁分析 ,适用于缺失型及非缺失型ＤＭＤ ＢＭＤ患者的基因诊断 ,大大提高了ＤＭＤ ＢＭＤ的可诊断率和产前诊断的准确率 ,成为ＤＭＤ ＢＭＤ快速基因诊断、产前诊断及携带者检测的最重要的方法 ,本室应用该法对 2个ＤＭＤ家系进行了快速的产前基因诊断和携带者检测。1　对象与方法1.1　对象　 2个家系的     

预防多囊卵巢综合征患者发生卵巢过度刺激综合征的体外受精-胚胎移植治疗新策略

多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄妇女常见的一类内分泌紊乱疾病,与月经异常、流产以及一系列妊娠相关的并发症有关,同时也是Ⅱ型糖尿病和心血管疾病的高风险人群.在育龄妇女中占5％～10％[1],在接受辅助生殖助孕治疗的病人中约占50％,但这部分患者接受体外受精(IVF)助孕治疗时,较其他患者更易发生卵巢过度刺激综合征(OHSS),发生率高达14％[2].对这部分患者寻求安全有效的治疗方法,是目前PCOS研究的重点.     

免疫珠试验检测抗精子抗体技术在体外受精-胚胎移植中的应用

对17对不明原因不育夫妇作了免疫珠试验以测定抗精子抗体,发现1例女性血清IgA抗精子抗体阳性;IgA免疫珠在活动精子头部的结合率达46％。该例先前作了IVF—ET治疗失败;回收的三个卵母细胞在自身血清制备的培养基中无一受精。故认为免疫珠试验测精子抗体技术可作为IVF—ET治疗前的一项常规检查,以排除不孕的免疫因素。     

联合运用St14(DXS52)位点VNTR和 FⅧ基因内的(CA)n重复多态性诊断甲型血友病

目的　提高甲型血友病 (hemophilia A,HA)家系成员基因诊断及产前基因诊断的准确性和可诊断率。方法　采用 St14 (DXS5 2 )位点的可变串联重复序列和 F 基因第 13内含子的 (CA) n重复多态性连锁分析对 HA家系进行间接基因诊断。结果　单用上述 2个多态位点中的 1个对 9个 HA家系进行连锁分析 ,可诊断率均为 6 6 .7% ,联合 2个多态位点 ,可诊断率则提高到 88.9% ,完成了 4个家系的产前基因诊断 ,并监测到 1例单用 St14位点的可变串联重复序列多态连锁分析可能发生的产前诊断的误诊。结论联合采用上述 2个多态位点可以对近 90 %的 HA家系作出快速、准确的基因诊断和产前基因诊断。     

应用双向电泳技术初步建立人精子头部蛋白质图谱

目的 :利用人类精子蛋白质组分析的双向蛋白电泳 (2 DE)技术建立正常人精子头部蛋白质图谱。　方法 :先用固相pH梯度 SDS电泳技术 (IPG DALT)对全精子和精子头部蛋白质抽提物进行蛋白质分离 ,然后用图像分析软件比较精子头部蛋白质图像与精子蛋白质图像的蛋白质斑点组成差异。其中 ,全精子蛋白质的抽提比较了硫脲 /尿素 /盐酸胍和Kit/盐酸胍两种抽提方法。　结果 :硫脲 /尿素 /盐酸胍法与Kit/盐酸胍法所得的全精子 2 DE图像蛋白质斑点分别为 80 2个和 797个 ,其中相同的有 4 92个 ,将两种方法获得的图像整合而得到的全精子蛋白质图像有1 1 0 7个蛋白质斑点 ;精子头部图像蛋白质斑点有 4 2 8个 ,经匹配 ,全部来源于全精子蛋白质图像。　结论 :综合采用两种蛋白质提取方法初步建立了精子头部蛋白质图谱。     

三种不同促排卵方案在卵巢低反应患者中的应用

【目的】比较三种不同的控制性超排卵方案（COH）对卵巢低反应患者的体外受精胚胎移植（IVF—ET）临床结局,旨在寻求更为适合的促排卵方案。[A-法】回顾性分析2010年1～12月在本院接受体外受精（IVF）或卵细胞浆单精子注射（ICSI）助孕的卵巢低反应患者133例,超短方案组（A组）36例,改良超长方案组（B组）34例,拮抗剂方案组（C组）63例,比较三组超排卵天数、血清激素水平、获卵数、成熟卵子数、正常受精胚胎数（2PN）、周期妊娠率和胚胎种植率等。【结果】三组治疗后超排卵天数、成熟卵子数、2PN胚胎数、移植胚胎数比较差异均无显著性（P〉0．05）;平均促性腺激素释放激素（GnRH）用量A、B组间差异无显著性（P〉0．05）,A、B显著高于C组（P〈0．05）;胚胎种植率A、C组比较无显著性差异（P〉0．05）,但均显著低于B组（P〈0．05）;临床妊娠率B组最高,c组次之,A组最低,三组比较有显著性差异（P〈0．05）。【结论】促性腺激素释放激素拮抗剂（GnRH拮抗剂）方案和改良超长方案治疗卵巢低反应是一种有效的超排卵方案,可有效的提高IVF-ET的临床妊娠率。