中国人群肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白基因突变研究

目的:初步探讨中国人群肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白T基因突变情况,为该病的早期防治和康复介入奠定理论基础。方法:提取58例肥厚型心肌病(hypertrophiccardiomyopathy,HCM)患者外周血白细胞基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增心肌肌钙蛋白T(cTnT)基因8、9、11号外显子,产物做单链构象多态性(SSCP)分析,出现异常条带者直接测序验证。结果:58例临床确诊的HCM患者cTnT基因8,9,11号外显子,除160位密码子存在ATC和ATT多态性外,未发现基因位点的异常。结论:与国外报道的肥厚型心肌病约20%是由肌钙蛋白T基因突变引起相比较,中国人群肥厚型心肌病患者基因突变可能存在不同的特点。     

急性心肌梗死血清诊断指标比较

目的 :建立血清磷酸肌酸激酶同工酶 MB(CK- MB)与心肌肌钙蛋白 I(c Tn I)测定的方法 ,并通过与CK、谷草转氨酶 (AST)、乳酸脱氢酶 (L DH)比较阐述其对急性心肌梗死 (AMI)的诊断价值。方法 :共观察急性心肌梗死 (AMI) 6 5例 ,陈旧性心肌梗死 2 8例 ,稳定性心绞痛 17例 ,阵发性室上性心动过速 49例。建立 CK- MB单克隆抗体吸附测定与 c Tn I EL ISA双夹心测定的方法。同时观察血清 CK- MB、c Tn I、CK、AST、L DH在 AMI等疾患中的变化。结果 :血清 CK- MB单克隆抗体吸附法与 c Tn I EL ISA双夹心法回收率分别为 97%～ 113%、94.6 %～ 10 5 .6 % ,标准曲线相关系数分别为 0 .993与 0 .990 ,分别与琼脂糖电泳法及国外实验室检测法对比结果基本一致。 AMI胸痛发生后 12 h内血清 CK- MB的敏感性最高 ,12～ 2 4h的敏感性与 CK、c Tn I相当 ,高于 AST和L DH,而 2 4h后血清 c Tn I的敏感性最高 ;血清 CK- MB与 c Tn I对 AMI诊断的特异性和诊断有效性明显高于CK、AST、L DH。结论 :血清 CK- MB单克隆抗体吸附法与 c Tn I EL ISA双夹心法的敏感性和特异性高 ,CK- MB与c Tn I两个指标相互补充 ,对诊断 AMI有重大的临床价值     

定量检测ProMBP双抗体夹心ELISA方法的建立

目的:建立定量检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.方法:采用Protein A亲和层析法纯化自制的抗ProMBP单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western blot对纯化抗体特性进行鉴定;利用简易过碘酸钠法对抗ProMBP mAb进行标记辣根过氧化物(HRP)后行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)/ProMBP抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收性实验评价ELISA方法,初步对人血清中的ProMBP水平进行检测.结果:最佳配对组合为抗ProMBP mAb 4C6E5B9和HRP标记的抗ProMBP mAb 9G4A6G10,最适工作浓度分别为2.5 μg/ml和1:3 000,该方法的批内、批间变异系数分别为4.6%～6.2%和4.6%～10.5%,灵敏度达2.0 ng/ml,回收率为92%～113%.正常非妊娠血清、9～11周妊娠血清、15～17周妊娠血清ProMBP水平分别为(26.37±2.90)ng/ml、(357.71±33.60)ng/ml和(1088.77±58.13)ng/ml.结论:建立了一种可用于检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.     

黄芪甲苷促进缺氧损伤后人主动脉内皮细胞血管新生的研究

目的：研究黄芪甲苷（astragaloside Ⅳ,AS?Ⅳ）对缺氧损伤后人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）的保护作用及对血管生成的影响及可能机制。方法：体外培养HAECs,8% O2制备缺氧模型,实验分为对照组、缺氧组、AS?Ⅳ治疗组,50 μg/mL）。观察AS?IV对缺氧损伤后HAECs的保护作用及对细胞迁移能力、增殖活性和体外成环的影响以及自噬在血管生成过程中的作用。结果：缺氧损伤后与对照组比较,HAECs细胞上清释放的损伤标志物乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）浓度增加［（25.33 ± 1.70）U/L vs. （5.33 ± 1.25）U/L］,细胞活力降低［（81.12 ± 0.72）% vs. （100 ± 3.07）%］,细胞迁移能力降低,增殖能力降低,体外成环数下降［（30.91 ± 3.78）个vs. （62.10 ± 7.56）个］,自噬相关蛋白Beclin及LC3?Ⅱ表达下调（P＜0.05）。加入AS?Ⅳ治疗后,与缺氧组比较,细胞上清LDH释放量减少［（18.33 ± 1.25）U/L］,细胞活力提高［（85.71 ± 2.48）%］,细胞迁移能力增强、增殖活性增加,基质胶体外成环数增加［（48.64 ± 4.80）个］,自噬相关蛋白Beclin及LC3?Ⅱ表达上调（P＜0.05）。结论：AS?Ⅳ可减轻缺氧对HAECs的损伤,可能通过激活自噬通路促进HAECs血管新生。     

血清cTnI对病毒性心肌炎诊断价值的研究

目的　分别观察多种病毒感染后血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)变化 ,结合心电图 (ECG)及临床特征 ,阐述其对病毒性心肌炎 (VMC)心肌损伤的诊断价值。方法与结果　VMC患者 180例ELISA双抗夹心法定量测定血清cTnI ,升高 97例 (5 4% ) ,其中重症 19例、有病毒感染史与ECG改变 2 7例血清cTnI均增高。 19例丙型病毒性肝炎患者 ,8例血清cTnI增高。 5 0例带状疱疹病毒感染者 2 0例血清cTnI增高 ,且与临床严重度有关 ,其中 17例ECG呈多样性表现。 6 5例VMC且cTnI持续增高者在病程 1、3、6、9、12个月时转阴率分别为 47 7%、5 2 3%、90 8%、92 3 %、98 5 %。结论　血清cTnI对多种病毒感染后VMC患者的心肌细胞损伤及病程观察能提供可靠的诊断依据     

黄芪甲苷逆转血管紧张素Ⅱ引起的主动脉平滑肌细胞线粒体功能障碍

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,As-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)引起的线粒体功能障碍的逆转作用?方法:培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),低血清培养液饥饿处理后分为24 h 对照组?Ang Ⅱ 24 h 处理组?48 h 对照组?Ang Ⅱ 48 h 处理组?As-Ⅳ 治疗组?24 h 对照组和Ang Ⅱ 24 h 处理组使用线粒体呼吸功能检测仪进行线粒体呼吸功能检测,线粒体 ATP 含量检测;48 h 对照组?Ang Ⅱ 48 h 处理组和As-Ⅳ 治疗组进行线粒体呼吸功能检测?线粒体ATP 含量检测?电镜观察线粒体结构变化,共聚焦显微镜检测线粒体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和Mn-SOD活性检测?结果:Ang Ⅱ 24 h 处理组与 24 h 对照组相比,线粒体耗氧率(oxygen consumption rates,OCRs)出现下降,线粒体ATP 含量减少(P ≤ 0.05);Ang Ⅱ 48 h 处理组与 48 h 对照组相比,线粒体 OCRs 显著下降,线粒体ATP含量明显减少(P < 0.05),线粒体出现嵴模糊?肿胀?空泡,线粒体内 ROS 水平升高(P < 0.05),Mn-SOD 活性下降(P ≤ 0.05);As-Ⅳ 治疗组较 Ang Ⅱ 48 h 处理组线粒体 OCRs 和线粒体 ATP 含量明显回升(P < 0.05),线粒体形态结构损伤减轻,线粒体内 ROS 水平降低(P < 0.05),Mn-SOD 活性升高(P ≤ 0.05)?结论:As-Ⅳ可以通过增强线粒体Mn-SOD 活性,降低线粒体内 ROS 水平,进一步减轻线粒体结构损伤并提高线粒体 OCRs 和 ATP 含量,从而逆转Ang Ⅱ引起的线粒体功能障碍?     

钙调神经磷酸酶在肾血管性高血压大鼠心肌肥厚中的作用

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)在肾血管性高血压大鼠心肌肥厚中的作用及抑制CaN活性对心肌肥厚的影响.方法制备两肾一夹肾血管性高血压大鼠模型, 术后2月, 经心脏超声证实大鼠心肌肥厚后,分别予环孢菌素A( CsA)或培多普利治疗.观察CsA、培多普利对大鼠心肌肥厚程度,CaN mRNA、蛋白质表达和CaN活性的影响.结果两肾一夹术后2月,手术组大鼠左室后壁和室间隔厚度均较假手术组增高21%(P<0.01),CsA治疗后较治疗前分别下降16%和14%(P<0.01),培多普利治疗后左室后壁和室间隔厚度亦较治疗前下降.同时大鼠左室心肌CaN mRNA和蛋白质表达、CaN活性均显著下降.结论 CaN参与肾血管性高血压大鼠心肌肥厚,抑制CaN活性可逆转心肌肥厚.     

单克隆抗体吸附法测定血清肌酸激酶同功酶及临床应用

肌酸激酶同功酶（CK－MB）是诊断急性心肌梗塞（AMI）的经典指标。本室建立血清CK－MB单克隆抗体吸附测定方法,同时对比观察血清心肌肌钙蛋白互（cTnl）、CK、AST、LDH与CK－MB在AMI、陈旧性心肌梗塞（OMI）、稳定性心绞痛（SA）及陈发性及室上性心动过速（PSVT）者中的动态变化,探讨本法测定CK－MB对AMI的诊断价值。材料和方法研究对象：随机收集1996年2月～1998年《月在我院诊治的患者,AMI65例,男53例,女12例,年龄42～89岁;OMI组28例,男20例,女8例,年龄45～85岁;SA组18例,男11例,女7例,年龄41～72岁;…     

大鼠心肌组织中高能磷酸化物的含量测定

目的　建立了同步测定大鼠心肌组织中 5种高能磷酸化物含量的反相离子对高效液相色谱法 ,并观察异丙肾上腺素致害大鼠心肌损伤模型中能量代谢的变化。方法　色谱柱 :SupelcoODS C18(2 5 0mm× 4 6mm ,5 μm) ;柱温 :2 3℃～ 2 5℃ ;UV检测波长 2 10nm ;流动相 :2 2 0mmol·L 1磷酸盐缓冲液 (含 3mmol·L 1四丁基氢氧化铵和 7%甲醇 ) ,pH6 5 ;流速 1 2ml·min 1和1 3ml·min 1。结果　 5种能量代谢物质ATP、ADP、AMP、CrP和Cr达到良好分离 ,ATP、ADP、CrP在 10～ 10 0 μmol·L 1,AMP在 10 0～ 5 0 0 μmol·L 1,Cr在 10 0～ 10 0 0 μmol·L 1浓度范围 ,峰面积与浓度呈良好线性关系。日内和日间精密度的RSD均 <10 % ,ATP、ADP、AMP、CrP及Cr的提取回收率 (% )平均为 :97 86、10 4 38、10 0 0 0、97 6 4和 98 8。与生理盐水组相比 ,ISO致害大鼠心室组织中ATP含量及能荷 (EC)显著下降 (P <0 0 5 )、ADP呈下降而AMP呈上升趋势 ,CrP含量显著上升 (P <0 0 1)。结论　本法操作简便、结果准确 ,可以用于大鼠心肌组织提取液中高能磷酸化物的测定和能量代谢状况的研究     

人心肌肌钙蛋白I的纯化及鉴定

目的 提取和纯化人心肌肌钙蛋白I。方法 心室肌经匀浆、离心、盐析提取,CM Sephadex C-50柱层析,DEAES Sephadex A-50柱层析制备人cTnI;经(cTnI)活性检测、SDS—PAGE、western blot鉴定。结果 从65g湿重心肌中获得4．1mg cTnI,分子量约为24000,纯度约为84％。结论 纯化的cTnI可被cTnI单克隆抗体特异识别,本实验从人心肌中成功制备cTnI。