血清肌钙蛋白I对儿童病毒性心肌炎的诊断价值

目的了解心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ（ｃＴｎＩ）对病毒性心肌炎的诊断价值。方法用双抗ＥＬＩＳＡ法动态测定４６例病毒性心肌炎患的血清ｃＴｎＩ，同时检测肌酸激酶同功酶（ＣＫ－ＭＢ）。结果４６例患ｃＴｎＩ的阳性率为８０．４％，ＣＫ－ＭＢ的阳性率为４５．７％（Ｐ〈０．０５）。病程１５天ｃＴｎＩ的检出率为８０．４％，而ＣＫ－ＭＢ的检出率为２１．３％（Ｐ〈０．０１）。病程６０天ｃＴｎＩ的检出率为２４．４％，而ＣＫ     

血清肌钙蛋白I测定对暴发型流脑并发心肌损伤的研究

目的 探讨暴发型流行性脑脊髓膜炎（流脑，FMM）患者并发的心肌损伤。方法 16例生前有心功能不全病史的暴发型流脑患者，分别在入院时及出现临床心力衰竭或中枢神经系统症状时抽血测定血清肌钙蛋白I（cTnI)浓度，部分病例死亡后立即穿刺心肌，制成超薄切片后电镜观察超微结构改变。结论 16例患者临床症状明显时血清cTnI浓度均明显增高（P＜0．001），电镜示有心肌细胞变性坏死及肌丝破坏。结论 暴发型流脑常并发心肌损伤，cTnI是诊断的可靠依据。     

定量检测ProMBP双抗体夹心ELISA方法的建立

目的:建立定量检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.方法:采用Protein A亲和层析法纯化自制的抗ProMBP单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western blot对纯化抗体特性进行鉴定;利用简易过碘酸钠法对抗ProMBP mAb进行标记辣根过氧化物(HRP)后行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)/ProMBP抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收性实验评价ELISA方法,初步对人血清中的ProMBP水平进行检测.结果:最佳配对组合为抗ProMBP mAb 4C6E5B9和HRP标记的抗ProMBP mAb 9G4A6G10,最适工作浓度分别为2.5 μg/ml和1:3 000,该方法的批内、批间变异系数分别为4.6%～6.2%和4.6%～10.5%,灵敏度达2.0 ng/ml,回收率为92%～113%.正常非妊娠血清、9～11周妊娠血清、15～17周妊娠血清ProMBP水平分别为(26.37±2.90)ng/ml、(357.71±33.60)ng/ml和(1088.77±58.13)ng/ml.结论:建立了一种可用于检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.     

牛心肌肌钙蛋白Ⅰ的纯化及鉴定

目的：提取和纯化牛心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)。方法：心室肌经匀浆、离心、盐析提取、CM Sephadex C-50柱层析、DEAE SephadexA-50柱层析，获得牛cTnⅠ。结果：从100g湿重牛心肌中获得15mg牛cTnⅠ，SDS—PAGE示牛cTnⅠ相对分子质量约为27ku，纯度约为90％，Western印迹证实纯化的牛cTnⅠ可被抗人cTnⅠ单克隆抗体识别。结论：实验从牛心肌中成功制备cTnⅠ。     

抗人脑钠肽单克隆抗体的制备及其鉴定

目的:制备抗人脑钠肽单克隆抗体并对其进行初步鉴定。方法:实验于2004-12/2006-02在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所进行。利用碳化二亚胺法将合成的人脑钠肽与牛血清白蛋白偶联制备完全抗原,反复免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与Balb/c小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)在PEG下融合,HAT选择性培养,间接酶联免疫吸附方法对细胞培养上清检测、筛选,选择筛选结果脑钠肽抗体阳性的细胞株连续进行3次亚克隆,建立稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株。扩大培养阳性单克隆细胞株后,腹腔注射小鼠,制备腹水。对腹水亲和层析纯化,所得的单克隆抗体行初步鉴定。结果:免疫小鼠血清呈脑钠肽抗体阳性,经筛选得到3株稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化的单克隆抗体经鉴定为IgG型,蛋白质印迹分析证实单克隆抗体可特异识别脑钠肽,具备较高的特异性及敏感性。结论:成功制备了3株抗脑钠肽特异性的单克隆抗体,可用于脑钠肽免疫检测方法的建立。     

血小板反应素-1基因G1678A多态性与急性冠脉综合征的相关性研究

目的探讨血小板反应素-1 (thrombospondin-1, TSP-1)基因G1678A (Ala523Thr)多态性与中国汉族人群急性冠脉综合征(ACS)的可能关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测412例ACS患者和319例年龄及性别相匹配的非冠心病者的TSP-1 G1678A多态性。结果ACS患者TSP-1 G1678A多态性从基因型频率(49．5％)明显高于对照组(40．4％,P=0．015)。GA和GG基因型在ACS组和对照组分布的差异无统计学意义(GA:39．3％比46．1％,P=0．070;GG:11．2％比13．5％,P=0．340)。A等位基因频率在ACS组和对照组分别为69．2％、63．5％,两组间差异有统计学意义(P=0．022)。多元logistic回归分析显示,TSP-1基因从基因型与ACS的发生呈显著相关(OR=1．52;95％CI:1．11-2．08;P= 0．010)。结论TSP-1基因G1678A多态性与中国汉族人群ACS密切相关,从基因型可能是ACS遗传易感性的基因标记之一。     

环孢菌素A对肾血管性高血压大鼠心肌肥厚和心功能的影响 一项关于CaN对心肌肥厚及心功能影响的随机对照实验

目的通过建立两肾一夹高血压大鼠心肌肥厚模型,研究环孢菌素(CsA)对心肌肥厚及心功能的影响,以探讨钙调神经磷酸酶(CaN)在心肌肥厚进展中的作用。方法制备两肾一夹肾血管性高血压大鼠模型,术后2月,经心脏超声和部分大鼠(两肾一夹2月组)病理学证实心肌肥厚后,将大鼠随机分为两组,分别予生理盐水(两肾一夹3月组)或CsA(CsA组)腹腔注射,持续1月,并以假手术组作对照。观察大鼠左室重与胫骨长度比值、心肌细胞面积、左室后壁和室间隔厚度、CaN活性和心功能的改变。结果两肾一夹2月和3月组大鼠左室重与胫骨长度比值、心肌细胞面积、左室后壁和室间隔厚度较相应假手术组增高(F=12.4,13.0;P<0.05),CsA治疗组较两肾一夹2月和3月组均明显降低,与假手术组差异无显著性。CaN活性在两肾一夹2月和3月组均显著高于假手术组,CsA治疗后CaN活性下降(F=8.8;P<0.05)。各组射血分数、左室短轴缩短率及零负荷下等容收缩期心肌纤维收缩成分的缩短速度相似(F=1.0,1.1;P>0.05),CsA组左室舒张末压、等容舒张期压力下降时间常数较两肾一夹3月组显著下降(F=3.4,10,3;P<0.05)。结论CaN参与了肾血管性高血压心肌肥厚进展,CsA可逆转心肌肥厚,改善心脏舒张功能。     

心肌肌钙蛋白I磷酸化及降解与肥厚型心肌病

目的:观察心肌肌钙蛋白I在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用。方法:实验于2005-03/2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行。取4周龄BALB/c雌鼠12只,随机分为模型组6只,正常对照组6只,适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因。饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚,断颈处死两组小鼠后,称取小鼠心脏质量(湿),心尖部心肌组织光镜病理学检查,小鼠心肌组织进行WesternBlotting检测重组蛋白、肌钙蛋白I的磷酸化及降解表达,GAPDH作为内参半定量。结果:12只小鼠进入结果分析。①模型组小鼠心脏明显增大,心脏质量(湿)/体质量比显著高于正常对照组(P<0.01);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润;两组血清肌钙蛋白I水平均正常(P>0.05)。②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在Mr55000,24000检测到突变CTnI-EGFP及其降解片断表达。③模型组在Mr55000,30000,28000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000见磷酸化肌钙蛋白I表达,模型组内源性磷酸化肌钙蛋白I表达明显高于对照组(1.18±0.15,0.97±0.15,P<0.05)。④去磷酸化抗肌钙蛋白I单克隆抗体在Mr55000,28000,检测到去磷酸化突变肌钙蛋白I-EGFP、内源性肌钙蛋白I降解片断表达,正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白I表达;用针对不同位点的抗肌钙蛋白I单克隆抗体3E3,2I-14,8I-7,MF4分别在Mr55000,30000,28000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000,见肌钙蛋白I表达,未见降解片断。结论:AdcCTnIArg146Trp-EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现,小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚;小鼠内源性肌钙蛋白I磷酸化表达增强、降解与心肌肥厚的发生、发展及心肌功能的改变可能有关,但两者之间因果关系及确切机制还有待于进一步研究。     

氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)单克隆抗体(Ox-LDL mcAb)。方法以Ox-LDL为抗原,免疫Balb／c小鼠,用杂交瘤技术建立稳定分泌抗Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞,用protein A柱亲和层析法纯化腹水中mcAb,用ELISA,western- blot等鉴定其生物学活性。结果获得2株能稳定分泌Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞(6E9D,7G3C),均为IgG1亚型;染色体数目为100-106条;腹水效价为105;western-blot分析和ELISA检测证实2株mcAb均与Ox-LDL有较高的特异性。结论本实验成功制备了2株抗Ox-LDL特异性的mcAb,可用于Ox-LDL免疫检测方法的建立。