老龄大鼠肺内基质金属蛋白酶2、9及基质金属蛋白酶组织抑制因子1、2、3表达变化

目的:对比观察老龄大鼠和成年大鼠肺胶原蛋白的改变、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)水平的变化、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPS)MMP2,MMP9以及基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPS)表达调控的变化,寻找肺间质纤维化发病率随年龄增加的可能原因.方法:通过羟脯氨酸定量测定肺组织胶原含量,ELISA方法测定TGF-β1蛋白水平,荧光定量PCR(realtime PCR)技术测定MMP2,MMP9,TIMP1,TIMP2,TIMP3 mRNA表达量的变化.结果:与成年大鼠组相比,老龄大鼠肺细胞外胶原成分增加,TGF-β1蛋白水平升高[(756±160)pg/g vs(1 000±246)pg/g,P＜0.05],MMP2 mRNA(3.15±1.76 vs 0.17±0.13,P＜0.01)表达水平降低,MMP9 mRNA(1.66±0.67 vs 1.74±0.87,P＞0.05)表达水平没有明显变化.老龄大鼠组TIMP1 mRNA(2.00±1.74 vs 0.11±0.06,P＜0.01),TIMP2 mRNA(7.60±2.51 vs 2.69±1.76,P＜0.01),TIMP3 mRNA(1.32±0.46 vs 0.29±0.16,P＜0.01)表达水平均低于成年大鼠组.结论:肺老化后细胞外胶原比例增加,TGF-β1蛋白水平升高,MMP2和MMP9转录水平改变,TIMPS mRNA转录水平降低等多重因素共同构成肺间质纤维化发病率随年龄增加的基础.     

Ⅱ类主要组织相容性抗原在博来霉素致大鼠纤维化肺组织中的表达

目的:在博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型上,观察主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子及其上游调控因子Ⅱ类反式激活蛋白(class Ⅱ transactivator,CⅡTA)表达水平的变化,探索肺纤维化发病可能的免疫机制.方法:在大鼠气管内灌注博来霉素(纤维化组)或生理盐水(对照组),分别于第7、第28天处死大鼠,取大鼠肺组织行HE染色和Masson染色,用生化法测定肺组织羟脯氨酸含量,免疫组化sP法染色观察肺组织MHC Ⅱ类分子表达,利用Taqman探针方法实时PCR(real-time PCR)技术测定肺组织总CⅡTA及Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型CⅡTA mRNA表达.结果:(1)第7、第28天时纤维化组肺组织MHCⅡ阳性细胞百分比均较对照组增加[(0.10±0.03)vs(0.06±0.02),P<0.05;(0.15±0.03)vs(0.06±0.01),P<0.01];纤维化组第28天较第7天增加[(0.15±0.03)vs(0.10±0.03),P<0.05];(2)第7天时,纤维化组大鼠肺组织总CⅡTA较对照组升高170.4%[(2.89±1.07)vs(1.07±0.46),P<0.05],Ⅰ型CⅡTA较对照组升高258.8%[(0.77±0.38)vs(0.21±0.09),P<0.05],Ⅳ型CⅡTA较对照组降低87.2%[(0.39±0.15)vs(3.01±0.79),P<0.01];第28天时,纤维化组大鼠肺组织总CⅡTA较对照组升高98.6%[(4.14±1.15)vs(2.08±0.76),P<0.05],Ⅰ型CⅡTA较对照组升高137.1%[(0.79±0.34)vs(0.33±0.23),P<0.05],Ⅳ型CⅡTA仍较对照组低,但差异无统计学意义[(2.98±0.92)vs(3.95±0.93),P0.05].其中,纤维化组肺组织Ⅳ型CⅡTA在第28天时较第7天时升高667.3%[(2.98±0.92)vs(0.39±0.15),P<0.01].Ⅲ型CⅡTA在各时期与对照组比较差异均无统计学意义.结论:肺组织MHC Ⅱ/CⅡTA体系参与了博来霉素诱导的肺纤维化的病理生理过程.     

鲜壁虎冻干粉抑制H22肿瘤血管生成机理的实验研究

目的 探讨鲜壁虎冻干粉对H22肝细胞癌血管生成的机制。方法 建立移植瘤小鼠H22肝细胞癌模型。将30只小鼠随机分为顺铂治疗组、壁虎治疗组以及对照组,分别给予顺铂腹腔注射（1mg/g）,口服鲜壁虎冻干粉（1．2g/kg）及口服等量生理盐水。给药20次后,用肿瘤组织称重法评价抗肿瘤活性,用TUNEL方法检测细胞凋亡率。采用Weidner方法检测肿瘤组织的微血管密度,S-P免疫组化法检测血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞因子（bFGF）的蛋白表达。结果 鲜壁虎冻干粉可抑制H22小鼠肿瘤生长及诱导肿瘤细胞凋亡,并可降低肿瘤组织VEGF、bFGF蛋白的表达,使肿瘤组织内微血管密度下降。结论 鲜壁虎冻干粉可抑制H22小鼠肿瘤生长及血管生成,其机制可能与下调VEGF、bFGF蛋白的表达有关。     

家族性热性惊厥患儿酪蛋白激酶γ2基因单核苷酸多态性研究

目的　研究酪蛋白激酶γ2 (caseinkinaseⅠ gamma 2 ,CSNK1G2 )基因单核苷酸多态性 (singlenucleotidepolymorphisms ,SNPs)位点与家族性热性惊厥的关系。 方法　通过NCBI的dbSNP数据库选择CSNK1G2基因的 5个单核苷酸多态性位点 ,应用聚合酶链式反应 限制性内切酶片段长度多态性技术 ,检测 5 3例家族性热性惊厥患儿和 10 1名健康对照者的CSNK1G2基因 5个SNPs位点的基因型 ,并使用EH1.2 0程序构建单体型并以单体型为标记进行进一步的患儿和正常人相关分析。结果　 5个SNPs位点的基因型频率在惊厥患儿和正常人群中分布均符合Hardy Weinberg平衡。其中 3个位点SNPrs740 42 3、rs2 2 7773 7、rs10 5 9684的基因型频率和基因频率在家族性热性惊厥患儿和对照组分布差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,1个位点rs2 0 74882基因型频率和基因频率在两组人群中分布差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,另一位点rs480 682 5因基因频率较低 ,故未作统计。结论　CSNK1G2基因SNPsrs740 42 3、rs2 2 7773 7、rs10 5 9684可能与家族性热性惊厥相关。     

一毛囊角化病家系中ATP2A2基因的突变

目的 :检测国内一毛囊角化病家系中ATP2A2基因的突变 ,探讨该病的发病机制。方法 :采用电镜、PCR、单链构象多态性 (singlestrandedconformationpolymorphism ,SSCP)分析和DNA测序方法。 结果 :电镜显示表皮基底细胞桥粒减少 ,张力微丝在核周凝聚。PCR SSCP方法提示ATP2A2基因 (编码肌浆网 /内质网钙离子 ATP酶 2 )第 5外显子可能存在异常 ,DNA测序证实了一种未见报道的新突变位点 :第 44 5位碱基由鸟嘌呤突变为腺嘌呤 ,使编码高度保守的 β链区第 149位氨基酸由门冬氨酸突变为门冬酰胺。 结论 :该毛囊角化病家系中存在ATP2A2基因突变 ,突变可能影响钙离子的转运 ,使表皮的细胞连接和分化出现异常     

PCR法扩增角鲨烯环氧化酶鉴定白念珠菌的研究

目的：通过扩增角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,进行PCR来鉴定白念珠菌。方法：根据白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因的开放读框中编码1MSSVKY^6的序列设计上游引物5‘－ATGAGTTCAGTTAAGTATG－3‘,编码^492NEIVR^496的序列设计下游引物5‘-CTATCTTACAATCTCGTTC-3‘,对白念珠菌ATCC11006,22株临床分离株,7株其它致病性念珠菌,8株致病性丝状真菌,1株新生隐球菌及1份人的基因组DNA进行了PCR扩增,并对PCR产物用酶切方法鉴定,结果：所有23株白念菌均可获得约1．5kb大小的PCR产物,16株其它致病性真菌及人的DNA标本均无扩增产物,PCR产物经BamHI酶切,产生两个大小分别约为1．0kb和500bp的片段。结论：利用设计的引物,扩增角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,可以特异地鉴定白念珠菌。     

单纯型大疱性表皮松解症Weber-Cockayne亚型一家系角蛋白5基因突变的检测

鉴定单纯型大疱性表皮松解症Weber-Cockayne亚型一家系中的基因突变位点。方法:应用聚合酶链反应(PCR)及DNA直接测序的方法,检测患者角蛋白5(KRT5)及角蛋白14(KRT14)基因的全部编码序列;针对所发现的突变,以限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析加以验证。结果:该家系患者存在KRT5基因突变:第2外显子第596位碱基由腺嘌呤突变为胞嘧啶,导致第199位氨基酸由赖氨酸变为苏氨酸(K199T),而正常对照无此替代。结论:KRT5K199T为导致此家系中患者临床表现的特异突变,此突变位点为国内外首次报道。     

STK11基因多态性与家族性热性惊厥关联研究

目的研究丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11(serine/threonine kinase 11,STK11)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点与家族性热性惊厥(familial febrile convulsions,FC)的关系.方法用关联分析的方法,结合传递不平衡检验(transmission disequilibrium test,TDT),对来自中国北方的家族性热性惊厥病人和对照组进行分析.结果 SNPs位点的基因型频率在惊厥患儿和对照组中分布均符合Hardy-Weinberg平衡.前期实验位点rs741764的基因型频率和基因频率及rs2075604的基因型频率在两组人群中分布差异有显著性(P＜0.05),后期选择一般人群作为对照组进行的关联分析,除rs741764基因型频率在两组间差异有显著性(P＜0.05)外,其余差异均无显著性.进一步用TDT得到3个位点都没有发现传递不平衡现象.结论 STK11基因的四个SNPs位点均与家族性热性惊厥不相关,STK11基因可能不是中国北方人家族性热性惊厥的易感基因.     

大鼠心肌成纤维细胞合成金属硫蛋白

目的 :探讨脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)、碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)、氧化型低密度脂蛋白 (oxidizedlow densitylipoproteins ,oxLDL)及重金属物质ZnCl2 等刺激因素对大鼠心肌成纤维细胞金属硫蛋白 (metallothionein ,MT)合成的影响。方法 :用10 9Cd Hb饱和法测定细胞MT含量 ,用RT PCR法测定细胞MTmRNA含量。结果 :本实验中各种处理因素均可刺激心肌成纤维细胞MT含量的增加。 1和5mg·L-1LPS处理组成纤维细胞MT含量与对照组相比分别增加 94 %和 130 % (P <0 .0 1)。 0 .2和 1.0mg·L-1bFGF处理组分别增加 4 1%和 5 9% (P <0 .0 1)。oxLDL亦可以促进心肌成纤维细胞MT的合成 ,2和 10mg·L-1oxLDL组MT含量较对照组分别增加 2 3% (P <0 .0 5 )和 4 1% (P <0 .0 1)。 1,2 ,5mg·L-1ZnCl2 呈浓度依赖性刺激心肌成纤维细胞MT含量的增加 ,与对照组相比分别增加 6 6 %、99%和 14 9% (P <0 .0 1) ,2～ 8mg·L-1ZnCl2 诱导MT1mRNA含量增加 6 9%～ 12 9% (P <0 .0 1) ,MT2mRNA含量增加 31%～ 6 0 % (P <0 .0 1)。但 10mg·L-1ZnCl2 不能进一步增加细胞MT含量 ,仅较对照组增加 91% ,可能与高浓度ZnCl2 致细胞损伤 ,细胞存活率降低有关。结论 :LPS、bFGF、oxLDL、ZnCl2 等多     

γ射线辐射对大鼠胸主动脉平滑肌细胞肾上腺髓质素和内皮素生成的影响

为观察^60COγ射线辐射对培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）肾上腺髓质素（Adm)内皮素（ET）生成的影响，以探讨辐射防治再狭窄的机制，采用逆转录－竞争性聚合酶链反应观察经0,1,,24,25Gy辐射的培养大鼠血管平滑肌细胞Adm和ET mRNA水平；用放免方法测定相应的Adm和ET的生成。发现1Gy辐射对VSMC Adm和ET的生成及基因表达均无显著影响。14Gy辐射后VSMC生成的Adm较对照组增加270％（P＜0．05），ET的生成较对照组降低27．3％（P＜0．01）；25Gy辐射使VSMC生成的Adm和ET含量分别增加233％（P＜0．05）和降低58．0％（P＜0．01）。14和25Gy辐射分别使细胞Adm mRNA水平较对照组增加82．4％（P＜0．01）和101％（P＜0．01），使ET mRNA水平较对照组降低47．1％（P＜0．01）及40．2％（P＜0．01）。表明^60Coγ射线辐射可以促进Adm的蛋白及基因表达，而抑制ET的蛋白及基因表达，增加了Adm/ET比值。