大鼠趋化素样因子2 mRNA在心肌梗死大鼠心脏中的表达

目的：观察大鼠趋化素样因子2(rCKLF2)的mRNA在心肌梗死后大鼠心脏组织的表达。方法：构建大鼠心肌梗死模型，分别于心肌梗死后1d、3d、1周、2周、3周(每个时间点各5例)，取心肌梗死周边区心肌组织，提取组织总RNA，逆转录后行竞争性PCR，了解rCKLF2 mRNA的表达情况。结果：rCKLF2 mRNA在梗死心肌周边区的表达于术后上调，并呈动态变化，1周达峰值，为正常的6．7倍。结论：CKIF2可能参与心肌梗死的病理生理过程。     

内源性硫化氢在大鼠低氧性肺动脉高压中的作用

目的 :观察低氧性肺动脉高压 (HPH)时 ,内源性硫化氢生成的变化以及应用外源性硫化氢处理对HPH的影响 ,探讨气体分子硫化氢在HPH发病中的作用。方法 :Wistar大鼠随机分为对照组 (n =6 )、低氧组 (n =7)和低氧 +NaHS组 (n =6 )。低氧处理采用吸入氧浓度为 10 % (体积分数 )的气体 ,每天低氧 6h ,共持续 3周。低氧 +NaHS组大鼠每天低氧前腹腔注射NaHS (0 78mg·kg-1)。低氧结束后用右心导管法测定肺动脉压 ,测定右心室 /(左心室 +室间隔 ) [RV/ (LV +SP) ]比值 ,弹力纤维染色观察肺小动脉显微结构改变 ,透射电镜观察肺小动脉超微结构 ,酶促反应法测定肺动脉和肺组织中硫化氢合酶活性 ,定量RT PCR方法测定肺组织中胱硫醚 γ 裂解酶(CSE)基因表达水平。结果 :与对照组相比 ,低氧组大鼠平均肺动脉压升高 4 5 .6 % (P <0 .0 1) ,RV/ (LV +SP)比值增加 4 1% (P <0 .0 1) ;光镜下肺小动脉相对中膜厚度 (RMT)和相对中膜面积 (RMA)分别增加 4 1%和 39% (P <0 .0 1) ;电镜下肺小动脉内皮细胞增生 ,平滑肌细胞呈合成表型改变 ;硫化氢合酶活性在肺动脉和肺组织中分别降低 5 2 %和 5 4 % (P <0 .0 1) ,而且与平均肺动脉压均呈明显负相关 ;肺组织中硫化氢合酶基因表达水平下调 5 3%(P <0 .0 1)。与低氧组相比 ,低氧 +     

转化生长因子β1在老龄大鼠博来霉素诱导肺成纤维化模型肺脏中的表达变化

目的对比观察转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGFβ1）在老龄大鼠及成年大鼠博来霉素诱导肺间质纤维化模型中表达水平的变化，探索老年人肺间质纤维化发病率升高的可能机制。方法大鼠气管内灌注博来霉素（实验组）或生理盐水（对照组），择期处死，取出鼠肺，Trizol一步法提取大鼠肺脏mRNA，M-MLV逆转录为cDNA。利用taqman探针方法实时PCR（realtime PCR）技术测定TGFβ1 mRNA表达量。结果老龄大鼠肺脏TGFβ1 mRNA表达水平与成年大鼠肺脏表达水平差异无显著性（P〉0．01）。气管内灌注博来霉素后老龄大鼠肺脏TGFβ1 mRNA表达水平升高，第14h达到峰值，与成年大鼠气管内灌注博来霉素后肺脏TGFβ1 mRNA升高一致，但是保持峰值时间长于成年大鼠。结论气管内灌注博来霉素后老龄大鼠肺脏TGFβ1长时间高水平表达可能是增龄后肺间质纤维化发病水平增高的基础。     

巯嘌呤甲基转移酶基因多态性分析方法探讨

建立以PCR为基础的位点特异性PCR、限制性内切酶消化、变性高效液相色谱分析和SNaPshot定点的序列分析等方法。并结合DNA直接测序检测巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因的5个单核苷酸多态性(SNP)位点的多态性频率。在实验过程中还探讨基因多态性检测的方法学，比较几种方法的可信度、可行性及其优劣。研究结果显示。限制性内切酶消化法能准确地检测TPMT基因外显子区的SNP，变性高效液相色谱分析技术能快速筛选出TPMT第5和第10外显子区的SNP，但不能检测出第7外显子的SNP；位点特异性PCR不能检测出TPMT基因外显子区的SNP，SNaPshot定点的序列分析检测TPMT基因外显子和启动子区的SNP准确率高。通过比较几种SNP检测方法后获得的结论是。TPMT基因SNP位点的检测应根据标本量和实验条件首选限制性酶切消化法、DNA测序或SNaPshot定点序列分析，有时一种技术不能完全满足检测的需要，必须几种方法的相互补充。     

男性孤独症儿童甲基CpG结合蛋白-2基因突变的分析

目的:应用甲基CpG结合蛋白-2(methyl-CpG-binding protein 2,MECP2)基因突变筛查方法,检测孤独症患者的MECP2基因,探讨孤独症与MECP2基因的关系。方法:收集男性孤独症44例,均满足孤独症《美国精神障碍诊断和统计手册》第4版诊断标准,应用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)筛查MECP2基因变异,并进行DNA测序鉴定。对存在MECP2基因错义突变的病例进行家系调查。结果:在44例患者中经DHPLC筛查阳性和DNA测序发现,4例患者存在不同的MECP2基因突变,包括c.590C>T(T197M)和c.602C>T(A201V)2种错义突变,以及c.1053C>G、c.897C>T 2种同义突变;17例的内含子3位于Exon 4前74位点C>T,为SNP(rs2071569);1例c.602C>T错义突变患者家系调查发现,突变来源于母亲及外祖父,母亲呈杂合子,为X染色体随机失活,母亲与外祖父智力均正常,外祖父有抑郁症。结论:在男性孤独症患者中,存在MECP2基因较高的变异率,MECP2基因在孤独症致病中可能起着一定作用,不除外是孤独症的易感基因。     

伴发Castleman病的副肿瘤性天疱疮发病机制研究

目的研究Castleman病在副肿瘤性天疱疮患者(PNP)发病机制中的作用。方法肿瘤组织常规免疫组化染色。RT-PCR扩增6例患者肿瘤组织中RNA,将PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及克隆测序;并以原位杂交法与6例无皮肤黏膜损害的Castleman病和3例淋巴结反应性增生患者肿瘤B细胞克隆相比较。以RNA印迹法了解重排基因的表达情况。结果6例PNP患者RT-PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳皆获得1条约124bp的锐利条带;克隆测序得到2种高度同源的序列,分别为128bp,122bp,其中6例患者皆具有长序列,4例患者同时还有相同短序列。以128bp的重排基因为探针进行原位杂交,阳性信号仅见于PNP患者肿瘤组织切片的淋巴滤泡样结构中;RNA印迹示该探针与6例PNP患者肿瘤组织mRNA皆有较强的杂交信号。结论6例PNP患者肿瘤组织中主要B细胞克隆是相同的。这种B细胞克隆的免疫球蛋白重排基因在肿瘤组织中有丰富表达,所产生的免疫球蛋白可能直接与皮肤中的抗原发生作用,引起皮肤黏膜的免疫损伤。     

副肿瘤性天疱疮自身抗原表位研究

目的 探讨副肿瘤性天疱疮的自身抗原表位。方法 运用重组融合蛋白免疫印迹实验、合成短肽酶联免疫吸附实验、竞争性酶联免疫吸附实验和斑点免疫印迹实验对副肿瘤性天疱疮的主要自身抗原-斑蛋白家族分子进行研究。结果 斑蛋白家族中周斑蛋白和包斑蛋白的L亚区是副肿瘤性天疱疮患者血清识别的主要抗原，其中包斑蛋白L亚区第1738 ～ 1757位氨基酸序列中存在着特异性抗原表位，可被多数副肿瘤性天疱疮血清识别。结论 包斑蛋白L亚区中存在着副肿瘤性天疱疮的特异性抗原表位。     

IL-10基因单核苷酸多态性与急性淋巴细胞白血病易感性的相关性研究

Objective To observe the relationship of IL-10 gene single nucleotide polymorphism and the susceptibility to ALL. Methods The bone marrow and peripheral blood samples from 115 ALL patients and 323 healthy controls were collected in Peking University First Hospital and Beijing Dao-pei Hospital from January 2007 to December 2009. The DNA were extracted from all samples. The primers of -819C/T and -592A/C in the promoter region of IL-10 gene were designed for the PCR. The restrictive fragment length polymorphism of IL-10 gene was analyzed by using restrictive enzyme Msl Ⅰ and HpyCH4 Ⅲ.Sequencing was done in part of these samples to confirm the results of PCR. The differences of genotypes and allele ratio of -819 and -592 sites were analyzed between the ALL patients and healthy controls. Real-time quantitative PCR was performed to detect the EB virus (EBV) infection and the expression of BCR/ABL fusion gene. The differences of genotypes and allele ratio of -819 and -592 sites were analyzed between the positive and negative group. Results The genotype ratios of -819CC, -819TT, - 819CT, -592AA,- 592CC and - 592AC were 14. 8% ( 17/115 ), 45.2% ( 52/115 ), 40. 0% ( 46/115 ), 43.5% ( 50/115 ),16. 5% ( 19/115 ), 40. 0% ( 46/115 ) in ALL patients, and were 9. 9% ( 32/323 ), 16. 4% ( 53/323 ),73.7% ( 238/323 ), 11.8% ( 38/323 ), 15.5% ( 50/323 ), 72. 8% ( 235/323 ) in the healthy controls,respectively. The genotypes of -819 and -592 sites had statistically significant differences between the two groups(x2 values were 46.000 and 54.550, all P ＜ 0. 05 ). The allele ratio of -819T and -592A were (65.2%, 150/230) and (63.5%, 146/230) in ALL patients, while they were 53.5% (344/646) and 48. 1% (311/646)in the healthy controls. There were statistically significant differences between the two groups (x2 values were 9. 877 and 15.986, all P ＜ 0. 05 ). The EBV DNA were detected in 42 ALL patients,among which 22 were positive and 20 were negative. The genotype ratios of -819CC, -819TT, -819CT,-592AA, - 592CC, - 592AC in EBV positive group were 9. 1% ( 2/22 ), 40. 9% ( 9/22 ), 50. 0%(11/22) ,31.8% ( 7/22 ), 13.6% ( 3/22 ), 54. 5% ( 12/22 ), while they were 35.0% ( 7/20 ), 45.0%(9/20) ,20. 0% (4/20) ,35.0% (7/20) ,45.0% (9/20) ,20. 0% (4/20) in the EBV negative group. The genotypes of -819 and -592 sites showed no statistical differences between the two groups( all P ＞ 0. 05 ).The BCR/ABL fusion gene were detected in 36 ALL patients, among which 20 were positive and 16 were negative. The genotype ratios of - 819CC, - 819TT, - 819CT, - 592AA, - 592CC, - 592AC in BCR/ABL positive group were 0% (0/20) ,45.0% (9/20) ,55.0% ( 11/20), 45. 0% (9/20) ,5.0% (1/20) ,50. 0%( 10/20), while they were 18. 8% ( 3/16 ), 50. 0% ( 8/16), 31.3% ( 5/16 ), 50. 0% ( 8/16 ), 18. 8%(3/16), 31.3 % (5/16)in the BCR/ABL negative group. The genotypes of -819 and -592 sites showed no statistical differences between the two groups ( all P ＞ 0. 05 ). Conclusion The population with - 819TT and - 592AA genotype of IL-10 gene shows susceptibility to ALL.     

人趋化素样因子1基因转移对心肌梗死大鼠外周血CD34+细胞的影响

目的:探讨人趋化素样因子1(chemokine-like factor 1,CKLF1)基因转移动员大鼠骨髓CD34 细胞的作用和在心肌梗死情况下对外周血CD34 细胞数量变化的影响.方法:肌肉电转不同剂量CKLF1质粒,构建大鼠急性心肌梗死模型,检测基因转移后不同时间外周血CD34 细胞的数量,分析CD34 细胞数与CKLF1质粒的量效关系和时间动力学的变化.结果:逆转录聚合酶链反应和免疫荧光染色均能检测到CKLF1的表达.CKLF1基因转移引起大鼠外周血CD34 细胞的数量增加,在基因转移第5至7天达高峰,其中CKLF1质粒100 μg组的峰值最高,分别为基因转移前的3.88倍和空质粒组的3.34倍(P＜0.01).对心肌梗死大鼠CKLF1基因转移增加了心肌梗死后第1天外周血CD34 细胞数的升高,其中100 μg组最明显(14.61×106/L vs 7.85×106/L, P＜0.01).结论:CKLF1能动员骨髓CD34 细胞及在心肌梗死情况下增加外周血CD34 细胞的数量,其中CKLF1质粒100 μg效果最明显.     

低强度激光照射诱导大鼠胸主动脉金属硫蛋白的生成

目的 :观察低强度激光照射对大鼠胸主动脉金属硫蛋白(ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ ,ＭＴ)生成的影响 ,以探讨激光照射的细胞保护机理。方法 :选用 3、6、1 2Ｊ ｃｍ2 3个剂量低强度激光对体外孵育的大鼠胸主动脉进行照射。采用竞争性ＲＴ ＰＣＲ法测定胸主动脉内ＭＴ的ｍＲＮＡ水平 ,以1 0 9Ｃｄ牛血红蛋白饱和法测定ＭＴ的含量。结果 :经 3、6、1 2Ｊ ｃｍ2 的激光照射后 ,血管的ＭＴ1ｍＲＮＡ水平分别比对照组增加 1 75 % (Ｐ >0 0 5)、41 8 6 % (Ｐ <0 0 5)和 668 2 % (Ｐ <0 0 1 ) ;ＭＴ2ｍＲＮＡ水平分别比对照组增加1 63 9(Ｐ …