国内副肿瘤性天疱疮患者的易感基因——HLA-Ⅰ类基因Cw*14

副肿瘤性天疱疮(PNP)是一种罕见的自身免疫性大疱性皮肤病,其特点是具有严重的黏膜糜烂和多形性皮损,体内常并发淋巴细胞增生性肿瘤.     

反复热性惊厥过程中γ-氨基丁酸B受体对硫化氢的调节作用

目的：热性惊厥(febrile se izure,FS)是婴幼儿时期最常见的惊厥性疾患之一,阐明其发生机制一直是该领域的重要研究课题。该课题前期的研究证明,γ-氨基丁酸B受体(-γam inobutyric ac id B receptor,GABABR)亚基和气体信号分子硫化氢(H2S)均在反复热性惊厥中发挥了重要作用。该文使用GABABR激动剂ba-c lofen,抑制剂Phac lofen,探讨GABABR对FS大鼠硫化氢/胱硫醚-β-合成酶(cystath ion ine--βsynthase,CBS)体系表达的影响。方法：大鼠随机分为对照组,FS组,FS+bac lofen组,FS+phac lofen组。采用热水浴诱导大鼠FS,隔日诱导1次,共10次。采用分光光度计法测定大鼠血浆中H2S含量;用原位杂交方法观察CBS mRNA表达情况;用免疫组化方法观察CBS蛋白表达情况。结果：FS+bac lofen组H2S含量较FS组升高427.45±15.91μmol/L vs362.14±19.71μmol/L,同时CBS表达也较FS组增强;而FS+phac lofen组H2S含量较FS组降低189.72±21.53μmol/L vs 362.14±19.71μmol/L,同时CBS表达也较FS组减弱。结论：反复热性惊厥过程中,GABABR的改变可影响H2S/CBS体系的表达。     

几种伴有智力低下的小儿惊厥

小儿惊厥是否伴有智力低下主要决定于惊厥的病因。有很多种神经系统病表现为惊厥和智力低下,如各种广泛脑损伤引起的后遗症(严重的脑膜炎、脑炎、脑外伤、缺氧、中毒、核黄疸或宫内感染之后)、脑性瘫痪、脑发育畸形、神经皮肤综合征(如结节性     

新生儿缺氧缺血性脑病临床诊断依据和分度

新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是指在围产期窒息导致脑的缺氧缺血性损害,临床出现一系列脑病的表现.为了提高对本病的认识,拟订HIE临床诊断依据及分度(附表),供临床参考。1 临床诊断依据1.1 具有明确的围产期缺氧史,特别是围产期重度窒息(Apgar评分1分钟<3分,5分钟<6分,经抢救10分钟后始有自主呼吸或需用气管内插管正压呼吸2分钟以上者)。1.2 生后12小时内出现以下异常神经症状:意识障碍,如过度兴奋(肢体颤抖,睁眼时间长,凝视等)、嗜睡、昏睡甚至昏迷;肢体肌张力改变,如张力减弱、松软;原始反射异常,如拥抱反射过分活跃、减弱或消失,吸吮反射减弱或消失。1.3 病情较重时可有惊厥.应注意新生儿惊厥特点,如面部、肢体不规则、不固定的节律性抽动,眼球凝视、震颤伴有呼吸暂停.面色青紫.     

MELAS综合征无创性基因突变分析方法研究

目的 研究携带A3243G突变的线粒体脑病-乳酸酸中毒-卒中样发作(MELAS)综合征患者及其母系亲属的外周血、尿、毛囊、唾液和部分患者的肌肉组织A3243G基因突变率,找到用于检测突变率更敏感的组织,建立更佳的、无创性的检查手段.方法 收集25例MELAS患者及其母系亲属33例的外周血、尿、毛囊、唾液和部分患者的肌肉组织提取DNA,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测各组织中A3243G突变,根据酶切产物电泳条带密度值问的比例计算突变型线粒体DNA的含量,比较各组织A3243G突变率的差异.结果 25例患者外周血、尿、毛囊、唾液均榆测到A3243G突变,尿液中A3243G突变率(62%±9%)明显高于外周血巾的突变率(36%±10%)(t=-11.13,P<0.01).5例患者进行了肌活检,肌肉突变率44.9%～75.1%,尿液中A3243G突变率和肌肉中A3243G突变率存在正相关,(r=0.900,P=0.037).33例母系亲属中有28例在至少一种组织中检测到A3243G突变,尿液中A3243G突变率33.0%(5.O%-70.4%)明显高于外周血中的突变率8.0%(0-33.3%)(z=-4.197,P<0.01).患者及其母系亲属唾液和毛囊组织中A3243G突变率与外周血相比筹别均不大.结论 在MELAS患者及其母系亲属巾,尿液中A3243G突变率均明显高于外周血,尿液A3243G突变率分析可能是优于外周血线粒体分析的一种无创性方法.     

单灶透明血管型Castleman''s病病理细胞起源研究

目的　从基因水平了解 6例Castleman’s病 (CD)病理细胞组成特点。方法　肿物切除以后 ,苏木精 伊红染色作常规组织病理检查以明确肿物的组织学类型 ;应用免疫组化法研究细胞表型 ,明确肿物的细胞组成 ;根据细胞组成 ,应用RT PCR和克隆测序方法了解肿物主要细胞克隆组成。结果　 6例患者皆为限局性透明血管型CD ;肿瘤组织滤泡样结构中主要为B淋巴细胞 ,滤泡间隙为T淋巴细胞。RT PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后得到单一条带 ,RT PCR产物克隆测序得到12 8bp、12 2bp两种碱基长度的克隆 ,相同长度序列间具有高度一致性 ,克隆内分别存在 12个和 7个碱基的差异。结论　 6例患者肿瘤组织中含有单 /寡克隆瘤性B细胞 ,这些B细胞起源于生发中心细胞。     

原发性红斑性肢痛症致病基因的定位及突变研究

目的 对原发性红斑性肢痛症的致病基因进行定位及突变研究。方法 收集一个原发性红斑性肢痛症家系成员和一个散发病例的血样抽提基因组DNA，选用2号染色体长臂上已知致病区域的6个微卫星标记对该家系成员进行基因扫描，并对基因分型结果进行连锁分析及单倍型分析。PCR扩增SCN9A基因的全部外显子，并进行测序。针对所发现的突变以HphI、BsrSI内切酶行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果连锁分析结果发现本家系在微卫星标记D2S2370和D2S2330的两点最大LOD值为2．11(重组率=0．00)，单倍型分析发现本家系在微卫星标记D2S1353和D2S2345存在重组。家系患者和散发病例均存在SCN9A基因第15外显子的错义杂合点突变：家系全部患者均存在T2573A杂合突变，散发病例存在T2543C杂合突变，分别导致Nav1．7第858位的亮氨酸被替换为组氨酸(L858H)及第848位的异亮氨酸被苏氨酸替换(1848T)。RFLP证实了正常对照无此突变。结论在世界上首次证明SCN9A基因是原发性红斑性肢痛症的候选致病基因。     

两个Netherton综合征家系SPINK5基因突变及产物活性的检测

目的研究两个Netherton综合征家系的SPINK5基因突变及产物活性情况。方法采用免疫组化法检测SPINK5基因编码的LEKTI在表皮中的活性,用聚合酶链反应-DNA直接测序法检测基因突变。结果患者均有LEKTI的活性降低。一个家系先证者有SPINK5基因1430+2 T>G的纯合性突变。其母亲为该突变的杂合子,表型正常。另一个家系未发现突变。结论两个家系患者均有LEKTI的活性降低,第一个家系的先证者存在SPINK5基因1430+2 T>G纯合性的剪切突变。     

遗传性铁粒幼细胞贫血致病的ALAS2基因表达载体的构建

X连锁遗传性铁粒幼细胞贫血(XLSA)是红系特异性δ-氨基-γ酮戊酸合酶(δ-amionlevulinic acid syntase 2，ALAS2)基因突变造成的，本研究构建ALAS2基因的真核表达载体，观察表达栽体转染真核细胞后蛋白表达的情况。将获自人胎肝的ALAS2基因插入到红色荧光蛋白质粒pDs—red2-N1中，命名为pDs—red2-N1／ALAS2；采用电穿孔方法将质粒转染K562细胞；转染后48小时提取细胞总RNA，进行RT—PCR检测ALAS2基因表达；流式细胞术检测红色荧光蛋白表达。再采用脂质体方法将质粒转染COS7细胞，转染后72小时提取细胞总RNA，RT—PCR检测ALAS2基因表达，荧光显微镜观察COS7细胞红色荧光蛋白表达情况。结果表明：构建了一种pDs—red2-N1／ALAS2真核表达载体，提取质粒DNA经酶切、电泳可以看到在4700bp和1764bp处存在两条电泳条带；全长测序证实构建的栽体序列正确；质粒转染K562和COS7细胞后均出现阳性ALAS2基因转录产物：流式细胞术检测转染后K562细胞红色荧光蛋白表达的阳性细胞百分率为19．2％；荧光显微镜显示转染后COS7细胞红色荧光蛋白，表达高峰出现在转染后第3天，阳性细胞百分率为10．7％，并可持续表达10天左右。红色荧光蛋白的表达可以间接说明ALAS2基因的表达。结论：ALAS2基因的真核表达载体构建成功，可以通过电穿孔和脂质体的方法转染真核细胞中并在其胞浆中表达，有可能用于XLSA患者基因替代治疗。