敏感、特异的人血清甲状腺球蛋白单克隆抗体ELISA法

应用自制的3株鼠抗人甲状腺球蛋白(HTg)单克隆抗体(McAb)建立了快速敏感和特异的3位抗体夹心的ELISA法。本法的标准曲线是用TG标准品连续稀释所得。其检测TG最低浓度为1. 25ng/ml。216各本院健康献血队员中有81. 6%含有TG。     

稳定高效表达p21~(WAF1/CIP1)的HCT/8-WAF1细胞株的建立

目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1大肠癌细胞株 HCT/8- WAF1。方法 :应用阳离子脂质体分别将带有目的基因 WAF1的 pc DNA3及空白 pc DNA3质粒转染大肠癌细胞株 HCT/8,经G41 8进行阳性筛选 ,将筛选的阳性细胞连续传代培养 ,应用免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1的表达。结果 :经 G41 8筛选后 ,空白对照细胞全部死亡 ,转染目的基因及空质粒组的细胞存活 ,可连续传代培养 30代以上 ,并选择 HCT/8作对照 ;免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1表达结果显示转染目的基因的 HCT/8细胞 p2 1 WAF1/ CIP1表达阳性细胞率 ( 89.96% )显著高于转染空质粒组 ( 8.0 2 % )和空白对照组 ( 3.39% ) ( F=1 6 60 8.99,P<0 .0 0 1 ) ;各代间差异无显著性 ( F=2 .1 71 ,P>0 .0 5 )。结论 :HCT/8- WAF1是一株高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1的大肠癌细胞株     

同源盒基因在胶质瘤细胞中的表达

目的:观察胶质瘤细胞C6中同源盒基因(Hox基因组)的表达,及苯乙酸(PA)对Hox基因组表达的影响。方法:体外培养C6细胞并用PA诱导分化,提取细胞RNA。用Hox基因三对简并引物P1、P2和P3进行逆转录PCR(RT-PCR)。通过计算机图像分析,Hox基因组mRNA的表达水平用Hox基因(组)/β-肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示。应用PA前后基因表达的差异用t检验分析。结果:在胶质瘤细胞C6中,P1、P2和P3组Hox基因表达分别为0.8817±0.0731(n=16),0.6825±0.0987(n=9),0.8608±0.0881(n=16);应用PA后,分别为:0.8765±0.0667(n=8),0.8386±0.0811(n=14),0.8937±0.0598(n=11)。应用PA后,P2组Hox基因表达显著增强,与用药前比较,差异显著(P<0.001)。结论:在胶质瘤C6细胞中,PA对P2组Hox基因mRNA水平的表达有明显的上调作用。PA的作用机理与调节胶质瘤细胞转录过程可能有关。     

瞬时转染后WAF1基因对肠癌细胞株Hct/8的生物学效应

目的:探讨外源基因WAF1的转染、表达活性和生物调控作用.方法:采用脂质体转染技术将外源基因WAF1转入Hct/8细胞;经免疫荧光染色和流式细胞仪分别监测外源基因的表达和对细胞分化增殖、细胞凋亡的调控作用.结果:外源基因p21WAF1/CIP1-pcDNA3在Hct/8细胞阳性表达为89.6%,显著高于空质粒对照和空白对照组(P＜0.01);转染48 h后细胞分裂减慢,24～48 h凋亡指数开始增高,72 h达到高峰,以后逐渐下降.结论:克隆的外源基因WAF1具有表达活性及诱导Hct/8细胞凋亡的作用,揭示WAF1具有生物调控作用.     

氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响

目的 观察不同浓度氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响。方法 采用胶原酶消化分离培养小鼠乳鼠颅盖骨成骨细胞，应用四唑盐(MTT)比色法，观察氟对培养的成骨细胞增殖活力的影响。结果 染氟0.5mg／L以下，细胞增殖活力变化不明显，染氟1．0～4．0mg／L时成骨细胞增殖活力明显增强，与对照组比较差异有显著意义，且此作用呈剂量和时间依赖性。结论 氟在一定剂量范围对体外培养的小鼠成骨细胞的增殖有促进作用。     

bFGF真核表达载体的构建及其在MSCs中的稳定表达

目的 构建人碱性成纤维生长因子(bFGF)真核表达载体,观察其在人骨髓间充质干细胞(MSCs)内的表达.方法 应用RT-PCR从人胎盘组织中扩增出bFGF,并将其构建于pcDNA3.1真核表达载体上.利用脂质体将基因转染MSCs内,利用G418进行基因的表达筛选,通过RT-PCR和Western blot进行基因表达的检测.结果 扩增出人bFGF基因成功构建在bFGF-pcDNA3.1真核表达载体上.经G418筛选转染的MSCs存活十代以上.经RT-PCR及Western blot检测发现转染bFGF-pcDNA3.1真核表达载体的MSCs能够大量稳定表达bFGF.结论 构建的bFGF-pcDNA3.1真核表达载体可在MSCs内得到稳定的表达.     

未成熟DCs诱导同种免疫低应答及 CD14分子在DCs上的表达

目的：从健康人外周血单核细胞诱导树突状细胞（DCs）,并且证实未成熟DCs在体外可以诱 导同种T细胞的低应答。 方法：人外周血单核细胞经GM-CSF,IL-4及TNF-α联合诱导,分化出不同发育阶段的DCs。采用再次混合淋巴细胞培养的方法观察未成熟DCs处理过的T细胞对与未成熟DCs同一来源的T细胞的应答能力。 结果：在DCs的未成熟期与成熟期均中度以上表达CD14分子;随着培养时间的不同DCs内吞能 力不断变化,在第7天达高峰,且内吞量高于相同培养时间的单核细胞（P＜001）;在再次混合淋巴细胞反应中,供者未成熟DCs预处理的受者T细胞当再次被供者的T细胞刺激时应答降低,而对第三者的T细胞刺激则表现强反应性。 结论：诱导人外周血单核细胞获得不同发育阶段的DCs,经过再次混合淋巴细胞反应发现具 有中度表达共刺激分子的未成熟DCs在体外可以诱导T细胞免疫低应答。     

人白细胞介素2单克隆抗体的制备

作者采用自行制备ＩＬ－２纯品及免疫ＢＡＬＢ／Ｌ小鼠，将脾细胞与ＮＳ－１细胞融合，获得具有分泌稳定性抗体的高效价杂交瘤细胞株，细胞连续舆传４２代仍稳定分泌单克隆抗体，该抗体与ＩＬ－２有特殊吸附，杂交瘤核型呈双亲染色体特点。连续传代未见变异。     

5-Fu对人结肠癌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨5-氟尿嘧啶（5-Fu）对人结肠癌细胞凋亡及其相关基因表达的影响。方法:Hct/8细胞分为5-Fu组和对照组，通过凋亡细胞数量、形态、基因组DNA片段化及流式细胞仪检测观察5-Fu对人结肠癌细胞凋亡情况的影响，并通过基因芯片测定相关基因改变。结果：吖啶橙染色及基因组DNA电泳显示5-Fu组凋亡细胞数量明显多于对照组（P<0.01）；基因芯片检测显示，5-Fu致多种基因表达发生改变，尤其是与DNA损伤修复相关基因出现表达下调。结论：5-Fu具有致人结肠癌细胞凋亡的作用，其原因是由于多种基因表达改变相互作用影响所致，尤其是DNA损伤修复相关基因的改变致不能及时修复受损的基因，最终致癌细胞发生凋亡。     

分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及鉴定

目的：构建分泌型核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,为研究DCN的生物学功能奠定基础。方法：利用特异性引物,应用PCR技术扩增DCN全长基因cDNA片段,与 pcDNA3.1载体进行连接,并转化到大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体,应用双酶切、PCR以及测序鉴定此重组载体。结果：获得了约1080 bp大小的特异性DNA片段;PCR产物与真核表达载体进行连接,经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实分泌型DCN cDNA片段正确插入真核表达载体pcDNA3.1中。结论：成功克隆了分泌型DCN cDNA,并且构建了真核表达载体pcDNA3.1-DCN。