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61.
目的:克隆并测定恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)肝期抗原1基因(LSA-1)3′端序列,比较FCC1/HN株与国外分离株LSA-1,3′端序列的差异。方法:应用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增LSA-1,3′端序列,用T-A克隆法将其克隆入pMD18-5载体。阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR扩增鉴定后,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用DNASTAR软件进行不同分离株LSA-1,3′端序列的同源性分析。结果:PCR扩增得到特异的FCC1/HN LSA-1,3′端序列。酶切及PCR鉴定获得了正确的pT-LSA-1重组质粒。测序表明,所克隆的LSA-1,3′端大小为795bp,编码264个氨基酸。序列分析表明,我国恶性疟原虫FCC1/HN株国外的NF54、T9/96、KEN、PNG及BRA株LSA-1,3′端编码的氨基酸序列只在3个位点存在不同。结论:克隆了恶性疟原虫FCC1/HN LSA-1,3′端片段。序列测定及同源性分析表明,FCC1/HNLSA-1,3′端序列与其它分离株有高度的同源性。 相似文献
62.
【目的】研究环形RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。【方法】通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性。RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况。利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circ_0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响。通过RNA免疫共沉淀技术(RIP)验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2) 3’-UTR的结合位点。【结果】Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主... 相似文献
63.
目的 :β2 肾上腺受体 (β2 AR)基因的多态型与高血压等疾病具有相关性。现已发现 β2 AR基因在欧美人群中存在 3种突变(Arg16Gly、Gln2 7Glu、Ser16 4Phe) ,这 3种突变是否与冠心病的发生发展存在相关性还不清楚。为研究中国人 β2 -AR基因多态性与冠心病发生的关系 ,先行建立检测 β2 -AR(Gln2 7Glu)突变的温度梯度凝胶电泳 (TGGE)技术 ,并以此检测冠心病人 β2 AR基因的多态型。方法 :1.引物 :根据已知人 β2 -AR基因序列 ,设计合成 1对引物 ,Sence :5’ -GAAGCCATGCGCCGGACC - 3’ ,Antisence:5’ -AGTAGTTGGTGA… 相似文献
64.
[目的]克隆并测定恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)肝期抗原1基因(LSA-1)3'端序列,比较FCC1/HN株与国外分离株LSA-13’端序列的差异.[方法]应用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增LSA-13’端序列,用T-A克隆法将其克隆入pMD18-T载体.阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR扩增鉴定后,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定.应用DNASTAR软件进行不同分离株LSA-13’端序列的同源性分析.[结果]PCR扩增得到特异的FCC1/HN LSA-13’端序列.酶切及PCR鉴定获得了正确的pT-LSA-1重组质粒.测序表明,所克隆的LSA-1 3 '端大小为795bp,编码264个氨基酸.序列分析表明,我国恶性疟原虫FCC1/HN株与国外的NF4、T9/96、KEN、PNG及BRA株LSA-13’端编码的氨基酸序列只在3个位点存在不同.[结论]克隆了恶性疟原虫FCC1/HN LSA-13’端片段.序列测定及同源性分析表明,FCC1/HNLSA-1 3'端序列与其它分离株有高度的同源性. 相似文献
65.
目的克隆并测定恶性疟原虫海南(FCC1/HN)株HRP-I基因序列,比较FCC1/HN株与国外分离株HRP-I基因序列的差异.方法根据HRP-Ⅲ基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增HRP-I基因.通过定向克隆,构建真核表达重组质粒pcDNA3-HRP-I.阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR鉴定后,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定.应用分子生物学软件进行不同分离株HRP-Ⅲ基因序列的同源性比较.结果PCR扩增得到特异的FCC1/HN株HRP-I基因序列.酶切及PCR鉴定获得了正确的pcDNA3-HRP-Ⅲ重组质粒.测序表明,恶性疟原虫FCC1/HN株HRP-Ⅲ基因全长802bp,包含一个内含子,编码224个氨基酸.序列分析表明,我国恶性疟原虫FCC1/HN株与国外的Itg2、FC27及IMTM22株HRP-Ⅲ基因序列有较高的同源性.结论成功克隆恶性疟原虫FCC1/HN株HRP-Ⅲ基因.序列测定及同源性分析表明,FCC1/HN株与其它分离株的HRP-Ⅲ基因序列有高度的同源性. 相似文献
66.
目的 构建恶性疟原虫海南(FCC1/HN)株膜相关钙结合蛋白(Pfs40)基因编码区的原核表达载体,测定Pfs40基因编码区的序列,了解该虫株与其它虫株Pfs40基因序列的差异。方法 根据Pfs40基因已知序列设计合成一对引物,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pfs40基因编码区;EcoRV酶切鉴定PCR产物;将Pfs40基因插入原核表达载体PET28a,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,于卡那阳性LB培养平板上筛选阳性克隆,酶切,PCR扩增鉴定;用双脱氧链末端终止法进行测序,应用软件对Pfs40核苷酸及推测氨基酸序列进行分析。结果 PCR扩增获得1032bp的Pfs40基因,EcoRV酶切表明扩增产物正确;重组质粒经双酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子;恶性疟原虫FCC1/HN株与7G89株Pfs40基因核苷酸序列同源性为99.5%,编码氨基酸序列同源性为99.1%。Pfs40理论蛋白质有5个钙结合区EF-hand结构;4个明显的抗原表位区段。结论 从恶性疟原虫基因的DNA中获取Pfs40基因,并成功构建恶性疟原虫FCC1/HN株Pfs40基因编码区的原核表达载体;FCC1/HN株与7G8株Pfs40基因有高度的同源性。 相似文献
67.
目的探讨系膜细胞中调节MMP2表达的信号通路。方法鼠系膜细胞培养,分别加入酪氨酸激酶抑制剂(Herbimycin A),p38MAPK抑制剂(SB203580),MEK抑制剂(U0126),ERK抑制剂(PD098059),P13K抑制剂(Y294002),用酶谱法分析MMP2酶活性、用RT-PCR及Westem方法从基因及蛋白水平,观察阻断剂对MMP2表达的影响。结果酪氨酸激酶抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂及P13K抑制剂对MMP2酶活性、mRNA及蛋白水平无影响,在72hp38MAPK抑制剂SB203580抑制MMP2活性25%。在48h当SB203580浓度分别为10、20、30及40μmol/L时,系膜细胞中MMP2的抑制率分别为7.2%、13.5%、21.3%及28%。结论大鼠系膜细胞中p38MAPK信号传导途径参与了MMP2的表达,并且p38MAPK抑制剂SB203580对MMP2的抑制有剂量依赖性。 相似文献
68.
恶性疟原虫海南株AMA-1、Pfs230基因的序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 测定恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株裂殖子顶端膜抗原 1(AMA - 1)基因和Pfs2 30基因序列 ,并分别进行序列分析。方法 根据AMA - 1基因已知序列合成一对引物 ,用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增AMA - 1基因 ,构建真核表达重组质粒 pcDNA3 -AMA - 1。根据Pfs2 30基因已知序列合成七对引物 ,分 7段从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pfs2 30基因 ,并分别将扩增片段插入pMD - 18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测定克隆的AMA -1、Pfs2 30基因序列 ,应用DNAstar软件辅助进行序列分析和同源性比较。结果 PCR扩增得到恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1和Pfs2 30基因片段。恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1基因全长 186 9bp ,无内含子 ,编码 6 2 2个氨基酸残基 ,不存在氨基酸重复序列 ,相对分子量约 72 0 4 5kDa ;Pfs2 30基因全长 94 35bp ,无内含子 ,编码 314 4个氨基酸残基 ,分子量为36 4 36kDa。恶性疟原虫FCC1/HN株与FC2 7、7G8、CAMP、FCR3、Thai -Tn、3D7、FVO、KF1916、CMP1、HB3、K1和V1株AMA - 1的同源性在 94 9%以上 ,各株间有 5 3个位置相同的氨基酸残基替代位点 ,并且发生替代的氨基酸残基具二态性。FCC1/HN株分别比 3D7、7G8株Pfs2 30抗原多 9、10个氨基酸残基 ,三个分离株有 2 8个氨基酸替换 相似文献
69.
目的检测冠心病患者血浆巨噬细胞移动抑制因子(MIF)含量以及探讨MIF在促内皮功能紊乱中的相关病理生理机制。方法将173例冠心病患者分为3个亚组:确诊为冠心病但未接受经皮冠状动脉介入治疗(PEI)的病人(n=33)、刚接受PCI术的病人(7d内)(n=43)、接受PCI术大于6个月的病人(n=97),另选62名健康体检者作为健康对照组。采用ELISA检测血浆MIF含量,qRT-PCR检测外周血白细胞中MIF、CD74mRNA水平。同时以Eahy926细胞为研究对象,采用MIF刺激,观察相关炎性因子的表达及活性氧(ROS)、NO水平。结果冠心病人和健康人群MIF的含量分别为(1422±53.01)pg/ml、(1103±64.52)pg/ml(P〈0.01)。冠心病人群MIF的含量比健康人群显著上升,其接受PCI术后的时间长短与MIF含量无显著关系,但随着时间的延长其MIF的含量有降低趋势。外周血白细胞中MIF、CD74mRNA含量与健康对照组相比有上升趋势,但差异无统计学意义(P〉0.05)。培养细胞中加入20ng/mlMIF时,炎性因子表达增高,二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)mRNA量下降显著,ROS增多,NO量下降。结论血浆MIF的升高可能是冠心病的-个危险因素,同时MIF可能通过MIF-ROS-DDAH2-ADMA—NO途径-导致血管内皮功能紊乱,促进动脉粥样硬化的发生与发展。 相似文献
70.
葛根素对大鼠心室肌细胞钠通道的影响 总被引:7,自引:0,他引:7
目的研究葛根素对大鼠心室肌细胞膜钠通道电流的影响,探讨葛根素在离子通道水平的作用机制。方法用急性酶解法获得单个大鼠心肌细胞,用标准全细胞膜片钳技术记录钠通道电流。结果0.3,1,3g/L葛根素能剂量依赖性增加钠通道电流,增加值分别(3.4±0.5)%、(34.1±2.7)%和(55.9±2.5)%,n=5。1g/L葛根素能使心肌细胞钠通道电流鄄电压曲线显著下移,最大峰电流密度从(17.4±1.6)pA/pF增加至(23.3±1.8)pA/pF,n=5,P<0.05,但原有的电流鄄电压依赖特征不变;葛根素对钠通道电流失活和复活曲线也无明显影响。1μmol/L普萘洛尔能明显阻断1g/L葛根素增加钠通道电流作用。结论葛根素能浓度依赖性地增加心肌钠大鼠通道电流。 相似文献