酵母双杂交筛选肝细胞中乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白结合蛋白基因

目的筛选并克隆人肝细胞中与HBsAg中蛋白(MHBs)相互作用肝细胞蛋白的基因,探讨MHBs的生物学功能。方法应用PCR法以HBV adr亚型全序质粒A7为模板扩增MHBs基因,克隆到pGEM-T载体中扩增并测序鉴定,EcoR I和BamH I双酶切后回收连接到酵母表达载体pGBWT- 7中并应用酵母双杂交系统3,构建MHBs诱饵质粒并转化酵母AH109,与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖苷酸上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌氨苄青霉素-LB平板上,选择并测序结果在GenBank中进行生物信息学分析。结果构建MHBs酵母细胞表达载体,配合后筛选出既能在四缺培养基(SD/-Trp-Leu-Ade-His)上培养也能在铺有X-α-半乳糖苷酸的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落2个,其中一个克隆为人醛缩酶B、另一个克隆为未知功能基因,新基因命名为MBP1。结论扩增出MHBs基因,用酵母双杂交技术筛选出2个与MHBs相互作用的肝细胞结合蛋白编码基因,为阐明MHBs的生物学功能及HBV损害肝细胞、致癌等方面的作用提供了新线索。     

肾综合征出血热患者IL-15和sICAM-1的动态变化

肾综合征出血热 (HFRS)是由汉坦病毒 (HV )引起的一种自然疫源性疾病 ,其发病机制至今尚未完全阐明。一般认为 ,HV作为重要的始动因子 ,一方面病毒感染能导致感染细胞功能和结构的损害 ,另一方面病毒感染诱发人体的免疫应答和各种细胞因子的释放 ,既有清除感染病原、保护机体的作用 ,又有能引起机体组织损伤的不利作用。细胞因子调节是机体免疫调节的一种重要形式 ,在参与机体免疫调节的同时还可直接造成机体的病理损伤。本实验应用酶联免疫检测法 (ELISA)检测了HFRS患者发病早期、极期及恢复期血清的IL 15和sICAM 1(人可溶性细胞…     

沈家骥老师治疗痹证经验

沈家骥主任医师是云南省荣誉名中医,云南省首批及全国第四批老中医专家学术经验继承导师,从事中医临床、科研及教学工作近50年.精于歧黄,擅于<伤寒论>、<金匮要略>、<脾胃论>等著名经典方剂之应用和创新,临床学验俱丰.导师治疗痹证,颇具特色,疗效显著,现将导师治疗痹证的经验介绍如下.     

血红素加氧酶1在恶性梗阻性黄疸患者小肠黏膜氧化应激损伤中的作用

目的 探讨血红素加氧酶1(HO-1)在恶性梗阻性黄疸(MOJ)患者小肠黏膜表达及其在氧化应激损伤中的作用.方法 采用前瞻性研究,收集行内镜下逆行胰胆管造影(ERCP)检查或治疗的恶性胆道梗阻伴黄疸患者15例,恶性胆道梗阻无黄疸患者10例;并以健康体检胃镜检查者10名作为对照组.取十二指肠乳头以下2～5 cm肠黏膜组织,应用比色法检测组织丙二醛含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.应用免疫组织化学和蛋白质印迹方法检测小肠黏膜组织HO-1分布及表达变化.结果 MOJ伴黄疸患者肠黏膜脂质过氧化产物丙二醛水平(nmol·mg~(-1)·prot~(-1))明显高于无黄疸组和健康对照组(1.79±0.24比1.09±0.28、1.18±0.32,P=0.041);SOD活力(nmol·mg~(-1)·prot~(-1)则明显低(303±10比398±11、406±11,P=0.017);肠上皮细胞凋亡率(%)高(69.1±5.9比28.6±3.5、10.2±2.5,P<0.01).MOJ患者小肠黏膜HO-1阳性表达为细胞核及细胞质呈棕黄色;伴黄疸组小肠黏膜HO-1表达(0.28±0.04)明显高于无黄疸组(0.20±0.04,P<0.01)和健康对照组(0.13±0.05,P<0.01).蛋白质印迹显示伴黄疸组患者小肠黏膜HO-1蛋白表达(%)明显高于其他两组(10.7±0.7比7.6±0.5和3.9±0.4,P<0.01).结论 MOJ患者小肠上皮细胞存在氧化应激损伤,HO-1蛋白表达随着胆道梗阻的进展明显升高,这可能是减轻肠黏膜损伤的一种保护性反应.     

广西四家三级甲等医院急诊患者输血前相容性试验调查分析

目的 探讨急诊患者输血前血液相容性试验的必要性与可行性.方法 对4家三级甲等医院急诊患者用血和急诊患者的输血前血液相容性试验情况进行回顾性调查分析.结果 4家三级甲等医院急诊患者746 501例中,申请输血例数为1 848例,占0.25%,实际用血例数为920例,占申请输血例数的49.78%.接受调查的医院输血前检查项目完善,都能在血液发出前准确完成临床输血相容性检测.结论 对急诊患者输血前联合应用快速有效的临床输血相容性试验,是非常有必要及可行的.     

活体肾移植血管重建69例临床分析

目的 介绍活体肾移植血管重建的临床经验.方法 自2005年12月至2008年11月共行活体肾移植69例,供者手术均采用十一肋间小切口开放手术.58例单支肾动脉除2例外均采用肾动脉与髂外动脉端侧吻合重建血管,用4 mm打孔器作髂外动脉开口;6例副肾动脉分别采用原位（肾下极副肾动脉）或离体腹壁下动脉（肾上极副肾动脉）重建血管;3例双支肾动脉根据两支动脉口径不同采用不同方法重建血管;2例3支肾动脉采用受者离体髂内动脉重建血管.结扎多支肾静脉中较小的肾静脉只吻合其较大的主干,当两支肾静脉口径相近时,则将其整形为一个开口后吻合.结果 所有血管吻合均一次完成,开放血流时吻合口均通畅;所有供者和受者术后均恢复顺利,受者未发生血管重建相关并发症;随访1个月～3年,供受者均存活, 受者除1例血肌酐250～300 μmol/L外,68例血肌酐维持在70～150 μmol/L.结论 该活体肾移植血管重建方式安全、实用、操作方便,多支供肾动脉及多支供肾静脉均能较好重建,移植肾功能良好.     

老年股骨粗隆间骨折三种内固定方法的评价

目的评价治疗股骨粗隆间骨折（ITF）三种术式的疗效。方法选择高龄患者71例,分为三组,即动力髋螺钉（DHS）组（26例）、股骨近端髓内钉（PFN）组（23例）、防旋股骨近端髓内钉（PFNA）组（22例）,三组患者平均年龄分别为74．4、75．1、78．5岁。对手术时间、术中出血量、术后出血量、手术切口长度等进行比较,结果采取LSD检验,进行两组间的分别对比。同时分析比较三种不同内固定方法的优缺点。结果（1）手术时间：三组间比较（P〈0．05）;PFNA组用时最短,PFN组次之,DHS组用时最长。（2）术中出血量：PFNA组与DHS组（P〈0．05）;PFNA组术中出血量较少。（3）术后出血量：PFNA组与DHS组（P〈0．05）;PFNA组出血量较少。另外DHS组和PFN组有切割现象、髋内翻、骨折延迟愈合等并发症,PFNA未发现上述并发症。结论PFNA在三种手术方式中由于创伤小,出血少,手术时间短,固定坚强,无切割现象等特点,适合于高龄患者中多种类型的粗隆间骨折。     

姜黄素类似物对人结肠癌HT-29细胞增殖与自噬的影响

目的 初步探究姜黄素类似物——WH-8对人结肠癌HT-29细胞增殖和自噬的影响。方法 选用不同浓度WH-8作用于人结肠癌HT-29细胞,应用四甲基偶氮唑盐还原法观察药物对细胞的生长抑制作用;通过荧光染色技术和细胞成像技术观察WH-8作用下细胞自噬囊泡的变化;四甲基偶氮唑盐还原法检测经自噬特异性抑制剂3-MA预处理后WH-8对细胞生长抑制率的影响;蛋白质印迹法观察WH-8作用下细胞自噬特征性蛋白酵母自噬相关基因1(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达情况。结果 WH-8呈时间-剂量依赖性抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,48 h平均半数抑制浓度为(12.5±1.3)μmol/L;一定浓度下WH-8可诱导细胞的自噬囊泡增多;3-MA可逆转WH-8对人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);WH-8可诱导Beclin-1表达上调,且在一定时间内促进LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化。结论 WH-8可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导细胞自噬。     

急性心肌梗死经皮冠状动脉成形术治疗的近期疗效

目的：观察急性心肌梗死（AMI）经皮冠状动脉成形术（PTCA）及原发性冠状动脉内支架植入术的近期疗效。方法：204例AMI患发病0．5－26h内行急诊冠状动脉造影（CAG）,证实冠状动脉闭塞,仅对梗死相关血管直径行TPCA及原发性冠状动脉内支架植入,。结果：全组204例患再通197例,成功率96％,发病至血管再通的时间1－27h,平均5．6h,PTCA失败7例,其中心包填塞2例,钢丝不能通过2 ,术中死亡2例（均发生在伴有心源性休克的前壁心肌梗死患）,率为0．9％,5周内死亡2例（经PTCA及支架植入术后心功能未明显改善,死亡心功能不全）,2－6个月死亡6例（因再发心肌梗死而死亡,总死亡率4．9％。结论：AMI后早期（6h内）成功的再灌注可挽求涉死的心肌,缩小梗死面积和明显降低死亡率,即使 在较晚时间（＞12h),病人仍有胸痛及ST段抬高,使梗死的血管再通仍可达到治疗的目的。早期充分的再灌注可明显改善患的预后,急诊TPCA治疗,可命名开通闭塞血管的届时时间提前,PTCA后残余狭窄甚微,再灌注血流充分,极少发生恢复期心肌缺务及心功能不全,在条件的大型A,TPTCA治疗AMI的最佳方法。     

Wistar大鼠形成盐敏感高血压后动脉组织端粒酶的活性变化

目的 :探讨wistar大鼠形成盐敏感高血压前后动脉组织端粒酶的活性变化。方法 :采用鼠尾测血压计测量血压。选择 1 2只形成感觉神经变性盐敏感高血压wistar大鼠及 1 0只对照同龄wistar大鼠 ,麻醉下取外周动脉组织 ,用PCR ELISA方法测定高血压及对照大鼠动脉组织端粒酶活性。结果 :正常血压大鼠动脉组织 1 0 %端粒酶阳性 ,而高血压大鼠 5 0 %阳性 ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ,两组动脉组织端粒酶活性A值比较亦具有差异性显著 (P <0 0 5 )。结论 :大鼠形成高血压后动脉组织端粒酶再次激活 ,而端粒酶作为细胞增殖的分子水平标志 ,提示盐敏感性高血压形成后 ,存在血管壁增殖 ,即高血压与血管壁增殖或血管重构互为因果