肝癌细胞冻融抗原负载树突状细胞瘤苗的制备与活化

目的: 探讨制备肝癌树突状细胞(DCs)瘤苗和体外诱导DCs活化的优化方法。方法: 取健康人新鲜血50mL, Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC), 制备肝癌细胞冻融抗原, 采用不同因子组合培养PBMC, 诱导和激活DCs, A组: rhGM-CSF+IL-4; B组: rhGM-CSF+IL-4+冻融抗原负载;C组:rhGM-CSF+IL-4+TNF-α; D组: rhGM-CSF+IL-4+TNF-α+冻融抗原负载。结果: 各组均诱导出DCs, 并高表达CD11c和CD54, 冻融抗原可明显上调CD86、CD80、HLA-DR表达和IL-12 p40分泌(P<0.01), TNF-α促进CD86表达的作用更显著, 但对IL-12分泌无影响, 依次用TNF-α诱导和冻融抗原负载可进一步促进CD86表达和IL12 p40分泌(P<0.05)。CD54和HLA-DR双标记免疫细胞化学染色显示, 各组DCs大多为CD54⁺。表达HLA-DR的DCs均为CD54⁺HLA-DR⁺, 其中, A组CD54⁺HLA-DR⁺细胞数量最少, D组最多, 平均每个细胞HLA-DR的表达水平也与此对应。结论: 采用rhGM-CSF、IL-4诱导的未成熟DCs, 依次使用TNF-α刺激与肝癌细胞冻融抗原修饰可有效促进DCs的活化与成熟。     

大鼠含抗肝纤维化中药的血清对肝星状细胞的作用

目的：观察抗肝纤维化中药复方“肝纤方”(本单位自拟科研方)对体外培养的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及其胶原合成的影响, 并探讨中药抗肝纤维化研究中的一些血清药理学实验方法。方法： 以16倍、8倍、4倍成人剂量肝纤方水煎液给大鼠灌胃, 于0.5、1、2、4 h后制备两类血清－门静脉血清和下腔静脉血清, 将之作用于从SD大鼠肝脏分离培养的HSC, 以[³H]TdR和[³H]Pro同位素掺入试验测定其对HSC增殖、胶原合成量的影响。结果：灌胃0.5、1、2 h后制备的门静脉和下腔静脉含药血清均能减少[3H]TdR的掺入量(P<0.05);以16倍和8倍成人剂量灌胃制得含药血清的作用强于4倍者(P＜0.05), 但前二者间无明显差异(P＞0.05);灌胃给药后1h制得的含药血清作用最强(P＜0.05)。门静脉含药血清亦能减少[³H]Pro的掺入量, 情况类似于上述对[3H]TdR的作用(P＜0.05);但下腔静脉含药血清无此作用(P＞0.05)。结论： 肝纤方能抑制HSC增殖、减少其胶原合成, 可能是其抗肝纤维化的一些具体作用。     

应用生物荧光法检测三磷酸腺苷评估肝细胞功能储备

目的:探索生物荧光定量分析三磷酸腺苷作为评估肝实质功能的可行性。方法:选择2005-2006年入住我院肝胆胰脾外科的32例肝病患者（26例为恶性肝病,6例为良性肝病）作为研究对象, 男27例(84.38%),女5例(15.62%),中位年龄53.87(范围33-76)岁。所有患者均于术前进行谷草转氨酶（AST）和总胆红素（TBIL）常规肝生化检查。术中根据肝脏形态学改变将患者进行分组, 分别为正常组7例 (21.88 %);大结节硬化组9例 (28.12%);小结节硬化组16 例(50.00%)。无菌收集肝手术切除病变旁肝组织标本,经过酶解消化、细胞悬浮、培养、离心、肝细胞计数、ATP的提取和检测等步骤,最后换算出每个肝细胞ATP含量检测;进一步将ATP数据与术前肝功能其它指标(AST、TBIL)进行相关分析。结果:ATP含量在大结节硬化组明显较正常组增高 ［(1 224.66±373.37） mol/cell vs （438.66±186.97） mol/cell, P＜0.01］, 较小结节组也明显升高［(1 224.66±373.37） mol/cell vs （697.39±402.24） mol/cell, P＜0.01］;微小结节硬化组较正常组也明显升高 ［(697.39±402.24） mol/cell vs （438.66±186.97） mol/cell, P＜0.05］。所有患者单个肝细胞ATP（mole/cell）水平与术前生化检查AST (R=0.60933, P<0.01)及TBIL (R=0.61458, P<0.01)呈正相关。 结论:肝细胞ATP检测水平有可能作为评估肝实质储备功能的指标,ATP水平可能用于预测手术风险及术后恢复过程。     

基因重组人生长激素对体外培养的肝癌细胞增殖的影响及配体调控

目的 了解基因重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7402细胞增殖的影响,并探讨rhGH对肝癌细胞生长激素受体(GHR)的调控作用.方法 分别采用肿瘤细胞计数、MTT比色法和集落形成实验等方法 了解Bel-7402细胞株在不同浓度rhGH(0、1、10、100、1000、10 000 ng/ml)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用3H-TdR掺入法研究肿瘤细胞DNA代谢情况;应用放射配体法了解Bel-7402细胞GHR的表达,以及rhGH在上述浓度下对肝癌细胞GHR的影响.结果 rhGH对体外培养的Bel-7402细胞的生长有一定程度促进作用,表现为rhGH在100 ng/ml浓度下促进肝癌细胞增殖较为显著,rhGH在其他浓度(1、10、1000、10000 ng/ml)的部分时段,对肝癌细胞的增殖虽亦有一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在100 ng/ml浓度时弱;放射配体法发现Bel-7402细胞表达GHR,在rhGH作用后24 h,Bel-7402细胞GHR的位点数量(103个/细胞)在10、100 ng/ml组较对照组显著增加,在10000ng/ml组较对照组显著减少.结论 一定浓度范围rhGH对Bel-7402细胞的增殖有促进作用,原因可能与Bel-7402细胞表达GHR有关;同时rhGH对Bel-7402细胞的GHR有一定调控作用.     

裸鼠人肝癌原位移植多药耐药模型的建立及其耐药机制的探讨

目的　在体内建立人肝癌裸小鼠原位移植多药耐药模型,并研究其耐药机理。方法采用人肝癌（BEL-7402）裸小鼠（4～6周龄）原位移植,给予阿霉素(1.5mg/kg体重,每周1次)腹腔注射诱导耐药（共8周）,经四唑蓝(MTT)快速比色法检测原代培养的耐药细胞对抗癌药的敏感性,以流式细胞仪检测癌细胞表面mdr1基因产物P-糖蛋白（P-gp）的表达,并用罗丹明试验观察该蛋白功能。结果　移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征,实验组肝癌细胞表面P-gp表达为(75.45±5.67)%,而对照组表达仅(4.25±1.28)%,差异有非常显著性（P＜0.01）,对阿霉素的耐药倍数提高了16.67倍,对羟基喜树碱具有交叉耐受性（13.67倍）。耐药细胞表面P-gp有较强的药物外排功能。结论　阿霉素较易诱导原位移植于裸小鼠的人肝癌多药耐药性的产生,其耐药倍数与临床肝细胞癌相似。该模型的建立对研究肝癌多药耐药的产生机制以及逆转其多药耐药性具有重要价值。     

bcl-2 mRNA、baX mRNA表达在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的意义

目的 分析三氧化二砷(As2O3)诱导肝癌细胞凋亡中凋亡相关基因bcl—2 mRNA、bax mRNA表达的意义。方法 采用电镜、流式细胞仪、电泳及半定量RT—PCR方法检测不同剂量三氧化二砷诱导人肝癌细胞株bel—7402后凋亡的出现及bcl-2mRNA、bax mRNA的表达。结果 0．5にmol/L As2O3处理肝癌细胞未见凋亡，8μmol/L As2O3诱导肝癌细胞出现明显凋亡。对照组和药物组未检测到bcl-2 mRNA的表达，随浓度增加，bax mRNA的表达上调。结论 As2O3通过诱导凋亡抑制肝癌细胞株bel-7402的增殖，凋亡诱导基因bax mRNA的表达上调与此过程有关。bcl—2mR—NA表达与此过程无关。     

生长抑素对裸鼠肝部分切除后肝癌组织基质金属蛋白酶-2及其抑制剂表达的影响

目的观察生长抑素 (SST)对肝部分切除后裸鼠肝癌组织基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )及其抑制剂 (TIMP 2 )表达的影响。方法 30只裸鼠随机分成 3组 :A组 (对照组 )仅将人肝癌组织种植于右肝叶 ,B组 (肝部分切除组 )和C组 (SST治疗组 ) ,切除肝左叶和中叶后于右肝叶种植人肝癌组织 ,C组术后第 1天开始腹腔注射SST(2 5 0 μg/kg ,2次 /d)B组和A组腹腔注射等量的生理盐水 ,3组动物于 35d后处死 ,检测癌体大小和重量 ,采用免疫组织化学和图像分析法检测肝癌组织微血管密度 (MVD)值、MMP 2和TIMP 2的表达。结果B组癌体重量和体积、MVD和MMP 2表达较A组明显增加 (P <0 0 5 ) ,TIMP 2则明显减低 (P <0 0 5 ) ;C组癌体重量和体积较B组和A组明显减低 (P <0 0 5 ) ,MVD和MMP 2表达较B组和A组明显减低 (P <0 0 5 ) ,TIMP 2表达则较B组和A组明显增加 (P <0 0 5 )结论MMP 2表达上调和TIMP 2表达下调可能为肝部分切除后癌灶新生血管形成增多的原因 ,SST可以通过抑制MMP 2的表达 ,上调TIMP 2的表达 ,从而抑制癌灶新生血管形成而减轻肝部分切除促癌灶生长的作用。     

原发性肝癌组织生长激素受体mRNA的表达

目的探讨原发性肝癌组织与正常肝组织的生长激素受体(GHR)mRNA的表达情况。方法通过半定量的逆转录鄄多聚酶链式反应(RT鄄PCR)方法检测GHRmRNA在32例原发性肝癌组织与6例正常肝组织中的表达。结果癌组织GHRmRNA的表达率为90.6%(29/32),正常肝组织GHRmRNA的表达率为100%;半定量RT鄄PCR结果表明:GHRmRNA在正常肝组织、原发性肝癌组织的表达二者之间无显著性差异(P>0.05)。结论正常肝组织、原发性肝癌组织的GHR在蛋白表达水平上差异的原因与二者在mRNA水平上的表达量无明显相关性。     

肿瘤体外药敏试验三磷酸腺苷生物发光法在肝癌化疗中的应用

目的：探讨肿瘤体外药敏试验三磷酸腺苷生物发光法（ATP－TCA）在肝癌综合治疗中的应用。方法：取36例肝癌手术、活检和穿刺标本行ATP－TCA。结果：ATP－TCA的可评估率为94．44％；10种化疗药物的敏感率分别为：5－氟脲嘧啶（5－Fu）8．33％、诺消灵（MIT)8．33％、顺铂（CDDP）11．11％、草酸铂（OXA）13．89％、足叶已甙（VP－16）19．44％、丝裂霉素（MMC）25．00％、表阿霉素（EPI）27．78％、开普拓（CPT）44．44％、健择（GEM）47．22％、泰素（TAX）63．89％。结论：ATP－TCA法可用于肝癌化疗中化疗药物的筛选。     

肝癌根治性切除术后联合肝动脉化疗栓塞和门静脉化疗对预防复发的价值

目的　探讨在肝癌根治性切除术后联合肝动脉化疗栓塞 (hepaticarterychemoembo lization ,HACE)和门静脉化疗 (portalveinchemotherapy,PVC)对预防术后复发的价值。方法　总结 1991年 8月～ 1995年 7月收治符合根治性切除的原发性肝癌患者 81例。其中 ,术后联合HACE和PVC(Ⅰ组 ) 2 3例 ,单纯HACE(Ⅱ组 ) 30例 ,未做特殊处理 (Ⅲ组 ) 2 8例。全部患者随访 3年以上。将 3组进行对比研究。结果　患者术后 1年 ,Ⅰ组和Ⅱ组的复发率比Ⅲ组低 ,生存率比Ⅲ组高 ;术后 2年 ,Ⅰ组的复发率比Ⅱ组和Ⅲ组低 ,生存率比Ⅱ组和Ⅲ组高 ;术后 3年和 5年的复发率和生存率 ,各组的差异不显著。癌灶 >5cm、无包膜、多个癌灶及AFP >40 0 μg/L ,是导致术后复发的高危因素。 结论　在肝癌根治性切除后 ,联合HACE和PVC可以明显降低术后复发率 ,提高术后生存率 ,其结果优于术后单纯HACE ,但对远期 (3年以上 )的复发率和生存率影响不大。